免疫学检测肺炎支原体的方法技术

本发明专利技术解决以下问题，提供以免疫学检测方法的用于检测肺炎支原体的具有高灵敏度的方法，在免疫学检测方法中使用针对肺炎支原体P30蛋白的抗体进行免疫反应。提供使用针对肺炎支原体P30蛋白的抗体用于免疫学检测肺炎支原体的方法，其中，在聚氧乙烯烷基胺的存在下进行免疫反应。附加地，作为免疫学检测方法提供了使用免疫层析的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫学检测肺炎支原体的方法
本专利技术涉及免疫学检测肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae)的方法。具体地，本专利技术涉及使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体免疫学检测肺炎支原体的方法。
技术介绍
支原体肺炎为由致病性菌肺炎支原体引起的呼吸系统传染病。儿童的患病率较高，4岁以下儿童占患者的30％，9岁以下儿童占60％以上。很多支原体肺炎患者仅仅是承受支气管炎等，但部分患者严重程度提高而伴有肺炎或其他并发症。因此，快速确诊和选择合适的抗菌药十分重要，因此，操作简单、能够快速检测的免疫层析是适用的。例如，专利文献1公开了使用肺炎支原体蛋白P30特异性单克隆抗体的免疫层析装置。此外，专利文献2公开了使用肺炎支原体核糖体蛋白L7/L12特异性抗体的免疫层析装置。附带说明，当使用抗体进行检测时，有时在检测前用表面活性剂等等预处理待检测的细菌细胞或蛋白质，以暴露由抗体检测的位点。专利文献1公开了试剂盒，在试剂盒中，含有具有13至17的HLB值的非离子表面活性剂的样本稀释剂与免疫层析装置一起使用。然而，虽然有数量巨大的具有13至17的HLB值的非离子表面活性剂，但聚氧乙烯辛基苯基醚(曲拉通X-100)和聚氧乙烯山梨醇酐月桂酸酯(吐温20)的1∶1混合物，和聚氧乙烯辛基苯基醚(Nonidetp-40)和聚氧乙烯/聚氧丙烯烷基醚(NonionMN-811)的1∶1混合物这两个实例是仅有的在实施例中实际描述的非离子表面活性剂，而数量巨大的具有13至17的HLB值的其他非离子表面活性剂是否能使用，并没有描述。此外，根据本专利技术人的试验，在使用肺炎支原体P30单克隆抗体的检测中，以上所述的聚氧乙烯辛基苯基醚(曲拉通X-100)，聚氧乙烯山梨醇酐月桂酸酯(吐温20)，和聚氧乙烯辛基苯基醚(Nonidetp-40)均未提供足够的灵敏度。专利文献2公开了试剂盒，在试剂盒中，含有聚氧乙烯烷基醚或具有12至15的HLB值的非离子表面活性剂的样本稀释剂与免疫层析装置一起使用。然而，聚氧乙烯十六烷基醚(Brij58)和合成醇EO加合物(LEOCOLTD90，120)是仅有的在实施例中实际描述的非离子表面活性剂，而具有12至15的HLB值的数量巨大的其他非离子表面活性剂并没有公开。此外，针对肺炎支原体核糖体蛋白L7/L12的抗体是仅有的进行试验的抗体，而没有公开或暗示非离子表面活性剂对于P30蛋白的抗体的任何影响。此外，根据本专利技术人的试验，在使用肺炎支原体P30单克隆抗体的检测中，在向样本稀释剂中添加聚氧乙烯十六烷基醚(Brij58)或合成醇EO加合物(LEOCOLTD90，120)的任一情况下，均没有提供足够的灵敏度。因此，在使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体的免疫学检测肺炎支原体的方法中仍然待建立一种用于高灵敏/敏感性检测的技术。现有技术文献专利文献专利文献1：JP2017-009571A专利文献2：JP2014-167439A
技术实现思路
技术问题本专利技术的目的是提供免疫学检测方法，所述方法包括使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体进行免疫反应，其中肺炎支原体以高灵敏度检测。解决问题的方法为实现上述目的，本专利技术人经过深入广泛的研究结果发现，当在许多表面活性剂中的聚氧乙烯烷基胺的存在下使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体实现免疫反应时，能以高灵敏度检测肺炎支原体，因此完成本专利技术。具体地，本专利技术具有如下构成。<1>肺炎支原体的免疫学检测方法，其使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体，其中，在聚氧乙烯烷基胺的存在下进行免疫反应。<2>根据<1>的检测方法，其中，免疫学检测方法为免疫层析检测方法。<3>根据<1>或<2>的方法，其中，免疫层析检测方法包括以下步骤(A)至(C)：(A)将含有肺炎支原体的样品与含有聚氧乙烯烷基胺的样品稀释剂混合的步骤；(B)将在上述(A)中获得的混合物供应至下述定义的测试条的样品供应部分的步骤，所述测试条包含：多孔体的膜，其至少具有样品供应部分，展开部分和检测部分，缀合物含有用标记物质标记的针对肺炎支原体蛋白P30的第一抗体，所述缀合物以可溶解状态保持在展开部分的一部分中，和检测部分位于在缀合物保持部分的下游侧的展开部分的一部分，并具有固定其上的针对肺炎支原体蛋白P30的第二抗体；和(C)在检测部分检测样品中的肺炎支原体与缀合物的复合物的步骤。<4>肺炎支原体检测试剂盒，其包含如下配置(1)和(2)：(1)使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体的检测试剂；和(2)含有聚氧乙烯烷基胺的样品稀释剂。<5>根据<4>所述的检测试剂盒，其中，上述(1)中的使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体的检测试剂为如下配置(1)′：(1)′免疫层析测试条，其包含多孔体的膜，所述膜至少具有样品供应部分，展开部分和检测部分，缀合物含有用标记物质标记的针对肺炎支原体蛋白P30的第一抗体，所述缀合物以可溶解状态保持在展开部分的一部分中，和检测部分位于在缀合物保持部分的下游侧的展开部分的一部分，并具有固定其上的针对肺炎支原体蛋白P30的第二抗体。<6>用于免疫学检测方法的样品稀释剂，其含有聚氧乙烯烷基胺，所述免疫学检测方法使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体。<7>样品预处理方法，其用于免疫学检测肺炎支原体，包括使聚氧乙烯烷基胺与含有肺炎支原体的样品接触的步骤。专利技术的有益效果在本专利技术中，在聚氧乙烯烷基胺的存在下使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体进行免疫反应，据此能以高灵敏度检测肺炎支原体。附图说明[图1]为本专利技术的测试条的构成的示意图。具体实施方式(样品)在本专利技术中，样品是指从患者采集的样本，所述样本可能含有待检测的肺炎支原体。患者样本可以直接用作样品，或可以用样品稀释剂适当稀释然后用作样品。另外，患者样本可以适当稀释和过滤，然后用作样品。注意，样品稀释剂为有时称为样本稀释剂，样品提取液，样品展开液，样品悬浮液等，它们用作同义词。(聚氧乙烯烷基胺)本专利技术的免疫学检测方法，其特征在于包括在聚氧乙烯烷基胺的存在下进行免疫反应。聚氧乙烯烷基胺为如下通式表示的弱阳离子化合物，并具有这样的特性：随着氧乙烯基团的增加，非离子特性增加且对水的亲和力增加(HLB增加)。鉴于在水中的溶解度，用于本专利技术的聚氧乙烯烷基胺优选具有约5.0至18.0，更优选6.0至16.0，仍然更优选7.0至12.0，和最优选9.0至11.0的HLB。其具体例子包括以商品名AMIET(注册商标，以下均同)102(HLB6.3)、AMIET105(HL本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)的免疫学检测方法，其使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体，其中，在聚氧乙烯烷基胺的存在下进行免疫反应。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180806 JP 2018-1473711.肺炎支原体(Mycoplasmapneumoniae)的免疫学检测方法，其使用针对肺炎支原体蛋白P30的抗体，其中，在聚氧乙烯烷基胺的存在下进行免疫反应。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，免疫学检测方法为免疫层析检测方法。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，免疫层析检测方法包括以下步骤(A)至(C)：
(A)将含有肺炎支原体的样品与含有聚氧乙烯烷基胺的样品稀释剂混合的步骤；
(B)将在上述(A)中获得的混合物供应至下文定义的测试条的样品供应部分的步骤，
所述测试条包含：
多孔体的膜，其至少具有样品供应部分，展开部分和检测部分，
缀合物含有用标记物质标记的针对肺炎支原体蛋白P30的第一抗体，所述缀合物以可溶解状态保持在展开部分的一部分中，和
检测部分位于在缀合物保持部分的下游侧的展开部分的一部分，并具有固定其上的针对肺炎支原体蛋白P30的第二抗体；和
(C)在检测部分中...

【专利技术属性】
技术研发人员：落合泰史，中村知史，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP