一种金水宝片氨基酸的含量测定方法技术

本发明专利技术涉及一种金水宝片中氨基酸的含量测定方法，所述方法步骤如下：1)供试品溶液的制备：称取金水宝制剂，将其制成粉末，加浓盐酸，充入氮气无氧加热水解，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容，取定容后的氨基酸水解液，用样品稀释液定容，即得供试品溶液；2)对照品溶液的制备：精密称取各氨基酸对照品适量置同一容量瓶中，加入样品稀释液定容即得混合对照品溶液；3)测定，将供试品溶液和对照品溶液分别注入氨基酸自动分析仪，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种金水宝片氨基酸的含量测定方法
本专利技术涉及一种中药制剂中的氨基酸含量测定方法，特别涉及一种金水宝片的氨基酸含量测定方法。技术背景金水宝制剂为已经上市的产品，包括片剂，胶囊等剂型，其由发酵虫草菌粉(Cs-4)填充而得，具有补益肺肾，秘精益气功能。用于肺肾两虚，精气不足，久咳虚喘，神疲乏力，不寐健忘，腰膝痠软，月经不调，阳痿早泄；慢性支气管炎、慢性肾功能不全、高脂血症、肝硬化见上述证候者。“金水宝片质量标准的研究”《中草药》1999年07期许妍梅玲华公开了用薄层色谱法鉴别金水宝片中氨基酸、甘露醇，用反相高效液相色谱法测定其腺苷含量。CN201310076926.4公开了一种金水宝制剂中氨基酸的含量测定方法，其采用高效液相色谱法。现有金水宝制剂的质量标准主要包括核苷类、氨基酸类、甘露醇的薄层色谱鉴别和腺苷含量测定，其中氨基酸类鉴别包括亮氨酸、丙氨酸和缬氨酸的薄层色谱鉴别。研究表明，该制剂中氨基酸类有效成分还包括精氨酸、苏氨酸、脯氨酸、酪氨酸等，多达十余种，为更好地控制金水宝片的质量，有必要制定一种金水宝片中多种氨基酸成分的含量测定方法。现有含有氨基酸产品的检测一般采用，高效液相-柱前衍生法，该方法衍生化条件不易，自动化程度不高，且衍生过过程中所用溶剂为剧毒性，为找到一种，自动化程度更高，衍生化条件更易控制，更安全灵敏度高，专属性强的检测方法，本专利技术通过对色谱条件的选择，以及对供试品溶液的配制方法的筛选，找到一种同时测定金水宝制剂中多种氨基酸的方法，和氨基酸自动分析仪-柱后衍生法相比，本专利技术方法精确度高，操作简单，只在一种色谱条件下即可检测出多种氨基酸，精密度，稳定性，重复性良好。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的金水宝制剂的质量控制方法。为此，本专利技术提供一种同时测定金水宝制剂中多种氨基酸的方法。已知，金水宝制剂含有几乎全部的人体必须氨基酸，如门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸，为对金水宝制剂的质量进行控制，找到一种一次性测定以上全部氨基酸的方法是本专利技术的任务，本专利技术经过筛选研究，找到一种技术解决方案。为此，本专利技术提供一种采用氨基酸自动分析仪-柱后衍生法(原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将它们分离，采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于一定温度下进行显色反应)对金水宝制剂中的氨基酸进行检测的方法。本专利技术所述方法包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：称取金水宝制剂，将其制成粉末，加浓盐酸，充入氮气无氧加热水解，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容，取定容后的氨基酸水解液，用样品稀释液定容，即得供试品溶液；2)对照品溶液的制备：精密称取各氨基酸对照品适量置同一容量瓶中，加入样品稀释液定容即得混合对照品溶液；3)测定，将供试品溶液和对照品溶液分别注入氨基酸自动分析仪，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量。其中氨基酸自动分析仪的色谱条件如下：LCAK06/Na离子柱；流动相：流动相A(称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚0.5g，加适量水溶解，加甲醇65mL和浓盐酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH调pH至3.45)、流动相B(称取二水合柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.1g、硼酸5.0g，加适量水溶解并定容至1000mL，HCl调pH值至10.85)；按照以下条件进行梯度洗脱：其中，所述稀释液的制备方法如下：称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚2.0g加适量水溶解后加入浓盐酸10.4mL，定容至1000mL，用氢氧化钠溶液调节pH值为2.2，即得。其中，所需茚三酮溶液的制备方法如下：称取三水乙酸钠272.0g、醋酸钾196.0g，量取乙酸200mL，加适量水溶解后定容至1000mL即得钠钾缓冲液。称取茚三酮20.0g、苯酚2.0g，加入甲醇600mL，缓慢搅拌溶解后加钠钾缓冲液400mL混合，氮吹10min，再加入0.2g抗坏血酸后氮吹10min即得。其中，各氨基酸对照品为：门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸的对照品，这些对照品可以从市场上购买得到，也可以按照现有技术制备得到，其纯度较高，一般大于98％重量百分比。优选的，本专利技术的含量测定方法。包括以下步骤：1)供试品溶液的制备：精密称取金水宝片粉末100mg置25mL水解管中，加入6mol/L盐酸溶液10mL后充氮气密封，置于烘箱中水解14～22h，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容至50mL。取定容后的氨基酸水解液2mL，用样品稀释液定容至10mL，即得供试品溶液。2)对照品溶液的制备：精密称取天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸对照品适量置同一容量瓶中，加稀释液溶液定容即得混合对照品溶液。3)分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液50μl，注入氨基酸自动分析仪，测定，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量。色谱条件：LCAK06/Na离子柱；流动相：流动相A(称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚0.5g，加适量水溶解，加甲醇65mL和浓盐酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH调pH至3.45)、流动相B(称取二水合柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.1g、硼酸5.0g，加适量水溶解并定容至1000mL，HCl调pH值至10.85)；梯度洗脱根据本专利技术的测定方法，优选测定对象的金水宝制剂为金水宝片，每片总氨基酸含量不少于50mg为合格品。最优选的，本专利技术的检测方法，步骤如下：1)供试品溶液的制备：精密称取经匀质处理的金水宝片约0.1g置25mL水解管中，加入6mol/L盐酸溶液10mL后充氮气密封，置110℃烘箱中水解18h，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容至50mL。取定容后的氨基酸水解液2mL，用样品稀释液定容至10mL，即得供试品溶液。2)对照品溶液的制备：另取天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸对照品适量，加样品稀释液配制成浓度各为0.06、0.06、0.03、0.03、0.04、0.03、0.04、0.04、0.03、0.03、0.04、0.03、0.04、0.01、0.01、0.01mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液。3)测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液50μl，注入氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金水宝制剂中氨基酸的含量测定方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：/n1)供试品溶液的制备：称取金水宝制剂，将其制成粉末，加浓盐酸，充入氮气无氧加热水解，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容，取定容后的氨基酸水解液，用样品稀释液定容，即得供试品溶液；/n2)对照品溶液的制备：精密称取各氨基酸对照品适量置同一容量瓶中，加入样品稀释液定容即得混合对照品溶液；/n3)测定，将供试品溶液和对照品溶液分别注入氨基酸自动分析仪，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种金水宝制剂中氨基酸的含量测定方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：
1)供试品溶液的制备：称取金水宝制剂，将其制成粉末，加浓盐酸，充入氮气无氧加热水解，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容，取定容后的氨基酸水解液，用样品稀释液定容，即得供试品溶液；
2)对照品溶液的制备：精密称取各氨基酸对照品适量置同一容量瓶中，加入样品稀释液定容即得混合对照品溶液；
3)测定，将供试品溶液和对照品溶液分别注入氨基酸自动分析仪，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量。


2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，其中氨基酸自动分析仪的色谱条件如下：LCAK06/Na离子柱；流动相：流动相A(称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚0.5g，加适量水溶解，加甲醇65mL和浓盐酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH调pH至3.45)、流动相B(称取二水合柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.1g、硼酸5.0g，加适量水溶解并定容至1000mL，HCl调pH值至10.85)；按照以下条件进行梯度洗脱：



其中，所述稀释液的制备方法如下：称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚2.0g加适量水溶解后加入浓盐酸10.4mL，定容至1000mL，用氢氧化钠溶液调节pH值为2.2，即得。


3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，其中，在步骤中需要用到茚三酮溶液，所述茚三酮溶液的制备方法：称取三水乙酸钠272.0g、醋酸钾196.0g，量取乙酸200mL，加适量水溶解后定容至1000mL即得钠钾缓冲液，称取茚三酮20.0g、苯酚2.0g，加入甲醇600mL，缓慢搅拌溶解后加钠钾缓冲液400mL混合，氮吹10min，再加入0.2g抗坏血酸后氮吹10min即得。


4.如权利要求1所述的含，量测定方法，其特征在于，其中，各氨基酸对照品为：门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸的对照品，这些对照品可以从市场上购买得到，也可以按照现有技术制备得到，其纯度较高，一般大于98％重量百分比。


5.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：精密称取金水宝片粉末100mg置25mL水解管中，加入6mol/L盐酸溶液10mL后充氮气密封，置于烘箱中水解14～22h，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容至50mL，取定容后的氨基酸水解液2mL，用样品稀释液定容至1...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭常春，李义保，黄小勇，张克勤，李辉虎，
申请(专利权)人：江西金水宝制药有限公司，江西济民可信药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36