一种用于马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂制造技术

本发明专利技术涉及一种用于马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂，所述菌剂包含萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)CICC 20238、多粘芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxa)ACCC 10122和非洲哈茨木霉(Trichoderma afroharzianum)ACCC 33109；本发明专利技术涉及的复合微生物菌剂对马铃薯黑痣病防治效果优良，有效降低了马铃薯黑痣病的发病率，并且具有一定的促生作用。

【技术实现步骤摘要】
一种用于马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂
本专利技术属于农业微生物
，具体涉及一种用于马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂。
技术介绍
马铃薯是我国四大农作物之一，其块茎富含蛋白质和淀粉，可食用也可用于工业生产。马铃薯种植区域广泛且逐年扩大，重茬土传病害较为普遍，其中马铃薯黑痣病日趋严重且普遍，发病区域不断扩大，一般可造成马铃薯减产15％左右，严重时可造成全部毁灭。马铃薯黑痣病对马铃薯的产量和品质造成了严重的影响。马铃薯黑痣病(又称茎溃疡病、茎基腐病、丝核菌溃疡病和黑色粗皮病)由立枯丝核菌引起，是一种真菌性病害，以带病种薯和土壤为主要传播途径。病原菌主要危害幼芽、茎基部及茎块。可造成芽腐缺苗、茎腐、立枯、顶端萎蔫或叶片卷曲等症状，成熟时在薯块上形成黑痣，影响其商品以及种薯质量，严重影响了马铃薯产业的发展。目前我国主要集中于化学农药解决这一问题，但化学农药对土传病害的防治效果并不理想。而且会产生农药残留，破坏土壤环境，造成病原菌抗药性上升，食品安全性降低等问题。微生物防治指的是在微生物的作用下通过寄生、溶菌、激活抗性等多种方式达到抑制病原物活性的病害防治方法。但目前多数微生物菌剂的防治效果并不稳定。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种用于马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂。一种用于马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂，所述菌剂包含萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)CICC20238、多粘芽胞杆菌(Paenibacilluspolymyxa)ACCC10122和非洲哈茨木霉(Trichodermaafroharzianum)ACCC33109；所述萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)CICC20238购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；所述多粘芽胞杆菌(Paenibacilluspolymyxa)ACCC10122、非洲哈茨木霉(Trichodermaafroharzianum)ACCC33109均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。根据本专利技术优选的，上述复合微生物菌剂，按重量份计所述萎缩芽孢杆菌5～10份、多粘类芽孢杆菌20～30份、非洲哈茨木霉30～40份。根据本专利技术优选的，所述萎缩芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、非洲哈茨木霉的质量比为10:30:40。优选的，上述复合微生物菌剂每克含有有效活菌数≥35亿个。上述复合微生物菌剂的制备方法，包括步骤如下：(1)将萎缩芽孢杆菌CICC20238接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下，经摇瓶培养36～48h，制得液体种子，将制得的液体种子接种于液体发酵培养基A中，调控pH值至7.0～8.0、通气比为1:(0.5～1)、转速100～200转/分，在30～37℃培养36～48h，制得发酵液，将所述发酵液经喷雾干燥得到含有萎缩芽孢杆菌CICC20238有效活菌数40～60亿/g的固体菌剂A；(2)将多粘芽胞杆菌ACCC10122接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下，经摇瓶培养36～48h，制得液体种子，将制得的液体种子接种于液体发酵培养基B中，调控pH值至7.0～8.0、通气比为1:(0.5～1)、转速100～200转/分，在30～37℃培养24～36h，制得发酵液，将发酵液与麦饭石1：1混合风干后得含有多粘芽胞杆菌ACCC10122有效活菌数20～50亿/g的固体菌剂B；(3)将非洲哈茨木霉ACCC33109接种于PDA固体培养基，在25～30℃条件下固体培养45～50h，加入无菌水调整孢子浓度到108个/ml，然后按10～20wt％的接种量将非洲哈茨木霉接种于固体培养基C中，在25～30℃培养5～7天，制得含有非洲哈茨木霉ACCC33109有效活菌数10～30亿/g的固体菌剂C；(4)将固体菌剂A、固体菌剂B和固体菌剂C混合均匀，制得复合微生物菌剂。根据本专利技术优选的，所述步骤(1)中的液体培养基A每升组分如下：玉米粉10～15g，豆饼粉10～15g，葡萄糖5～10g，硫酸铵5～10g，磷酸二氢钾0.5～0.8g，硫酸镁0.1～0.25g，硫酸锰0.1～0.25g，硫酸亚铁0.1～0.2g，余量水，调整pH值7～8。根据本专利技术优选的，所述步骤(2)中的液体培养基B每升组分如下：玉米粉10～15g，豆饼粉10～15g，葡萄糖5～10g，蛋白胨1～5g，酵母粉1～5g，氯化钠5～10g，硫酸镁0.1～0.25g，硫酸锰0.1～0.25g，硫酸亚铁0.1～0.2g，碳酸钙1～4g余量水，调整pH值7～8。根据本专利技术优选的，所述步骤(3)中的固体培养基C重量组份如下：麸皮粉200～400份，玉米面600～800份，过磷酸钙3～5份，水400～700份，pH6.0～6.5。根据本专利技术优选的，所述步骤(4)中，按重量份计将固体菌剂A5～10份、固体菌剂B20～30份和固体菌剂C30～40份混合均匀，制得复合微生物菌剂。进一步优选的，所述步骤(4)中，按重量份计将固体菌剂A10份、固体菌剂B30份和固体菌剂C40份混合均匀，制得复合微生物菌剂。上述复合微生物菌剂应用于防治马铃薯黑痣病和/或增加马铃薯的产量。上述LB液体培养基和PDA固体培养基均为本领域常用培养基，LB液体培养基组分如下：酵母膏5g，蛋白胨10g，NaCl10g，加蒸馏水至1000ml，用NaOH和HCl调节pH7.0～7.2，分装灭菌；PDA固体培养基组分如下：马铃薯汁1000ml，葡萄糖20g，琼脂20g，溶化后分装灭菌。有益效果本专利技术涉及的复合微生菌剂可以有效防治马铃薯黑痣病，刺激作物生长，有效改善马铃薯的品质，增加了种植户的经济收益。同时还可以调整土壤菌群平衡，促进氮磷钾的利用率。具体实施方法下面结合实施例对本专利技术做进一步阐述，但本专利技术所保护范围不限于此。实施例中未详加说明的均按本领域现有技术。微生物材料来源实施例中所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)CICC10088、萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)CICC20238均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；所述多粘类芽胞杆菌(Paenibacillussp.)ACCC01043、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)ACCC30371、多粘芽胞杆菌(Paenibacilluspolymyxa)ACCC10122、非洲哈茨木霉(Trichodermaafroharzianum)ACCC33109均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。实施例1防治马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂的制备方法，步骤如下：(1)将萎缩芽孢杆菌CICC20238接种于LB液体培养基，在37℃条件下，经摇瓶培养36h，制得液体种子，将制得的液体种子接种于液体发酵培养基A中，调控pH值至7.0、通气比为1:1、转速170转/分，在37℃培养3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂，其特征在于，所述菌剂包含萎缩芽孢杆菌Bacillus atrophaeus CICC 20238、多粘芽胞杆菌Paenibacillus polymyxa ACCC10122和非洲哈茨木霉Trichoderma afroharzianum ACCC 33109；/n所述萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)CICC 20238购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；/n所述多粘芽胞杆菌(Paenibacillus polymyxa)ACCC 10122、非洲哈茨木霉(Trichoderma afroharzianum)ACCC 33109均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于马铃薯黑痣病的复合微生物菌剂，其特征在于，所述菌剂包含萎缩芽孢杆菌BacillusatrophaeusCICC20238、多粘芽胞杆菌PaenibacilluspolymyxaACCC10122和非洲哈茨木霉TrichodermaafroharzianumACCC33109；
所述萎缩芽孢杆菌(Bacillusatrophaeus)CICC20238购自中国工业微生物菌种保藏管理中心；
所述多粘芽胞杆菌(Paenibacilluspolymyxa)ACCC10122、非洲哈茨木霉(Trichodermaafroharzianum)ACCC33109均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。


2.如权利要求1所述的复合微生物菌剂，其特征在于，按重量份计所述萎缩芽孢杆菌5～10份、多粘类芽孢杆菌20～30份、非洲哈茨木霉30～40份。


3.如权利要求2所述的复合微生物菌剂，其特征在于，所述萎缩芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、非洲哈茨木霉的质量比为10:30:40。


4.如权利要求2所述的复合微生物菌剂，其特征在于，所述复合微生物菌剂每克含有有效活菌数≥35亿个。


5.权利要求1-4任一项所述复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：
(1)将萎缩芽孢杆菌CICC20238接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下，经摇瓶培养36～48h，制得液体种子，将制得的液体种子接种于液体发酵培养基A中，调控pH值至7.0～8.0、通气比为1:(0.5～1)、转速100～200转/分，在30～37℃培养36～48h，制得发酵液，将所述发酵液经喷雾干燥得到含有萎缩芽孢杆菌CICC20238有效活菌数40～60亿/g的固体菌剂A；
(2)将多粘芽胞杆菌ACCC10122接种于LB液体培养基，在30～37℃条件下，经摇瓶培养36～48h，制得液体种子，将制得的液体种子接种于液体发...

【专利技术属性】
技术研发人员：展彬，王金涛，周自强，杜绍国，
申请(专利权)人：德州市元和农业科技开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：山东;37