本发明专利技术公开了茶树氨基酸转运蛋白基因CsAAPs及其应用，涉及生物技术领域，所述基因具体为CsAAP1、CsAAP2、CsAAP3、CsAAP4、CsAAP5、CsAAP6中的任意一种；本发明专利技术公开的茶树氨基酸转运蛋白，为进行构建转基因茶树，以提高其茶叶茶氨酸含量，提供了有效途径；为工业生产茶氨酸，提供了理论基础；为筛选高茶氨酸茶树品种，提供了有效地筛选条件。提供了有效地筛选条件。提供了有效地筛选条件。
【技术实现步骤摘要】
茶树氨基酸转运蛋白基因CsAAPs及其应用
[0001]本专利技术涉及生物
，具体为一种茶树氨基酸转运蛋白基因及其编码蛋白。
技术介绍
[0002]茶氨酸是一种非蛋白质氨基酸，大约占茶树嫩叶中游离氨基酸含量的40-70％。绿茶干重的0.2-2.8％。它是绿茶“鲜味”的主要成分，茶氨酸的健康益处已经被广泛报道，包括抗应激、神经保护作用、抑制咖啡因的负面作用以及提高学习能力。因此，茶叶中茶氨酸含量是茶叶质量的重要指标，与茶叶价格高度相关。
[0003]茶氨酸是由谷氨酸和乙胺通过茶氨酸合成酶合成的。这一过程主要发生在茶叶根部，随后通过木质部运输到嫩枝。因此，茶氨酸的长距离运输对其在茶叶中的含量至关重要。茶氨酸的运输也因季节而异，早春较高，夏秋季较低，这与绿茶品质的变化高度相关。然而，茶氨酸转运的分子机制仍有待阐明。
[0004]氨基酸的根到茎和源到汇的转运可分别通过木质部蒸腾途径和韧皮部转运途径进行。这些过程包括氨基酸在细胞内和细胞间的运动，加载和卸载血管系统，以及脉管系统后向下沉细胞的运动；这种运动包括质外途径和共质途径。在这些过程中，氨基酸被导入或导出到细胞和细胞器中，这需要膜定位氨基酸转运体来促进导入/导出。
[0005]因此，了解和明确茶树氨基酸进行转运的分子机制，是提高茶叶品质的有效途径之一。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种茶树氨基酸转运蛋白基因CsAAPs及其应用，以解决现有技术中茶树氨基酸分子转运机制不明确的技术问题。
[0007]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0008]本专利技术提供一种茶树氨基酸转运蛋白基因CsAAPs，所述基因具体为CsAAP1、CsAAP2、CsAAP3、CsAAP4、CsAAP5、CsAAP6中的任意一种，所述CsAAP1的核苷酸序列具体为SEQ ID NO 1，所述CsAAP2的核苷酸序列具体为SEQ ID NO 2，所述CsAAP3的核苷酸序列具体为SEQ ID NO 3，所述CsAAP4的核苷酸序列具体为SEQ ID NO 4，所述CsAAP5的核苷酸序列具体为SEQ ID NO 5，所述CsAAP6的核苷酸序列具体为SEQ ID NO 6。
[0009]进一步，所述基因具体为CsAAP1，其编码的蛋白质的氨基酸序列为：SEQ ID No:7所示。
[0010]进一步，所述基因具体为CsAAP2，编码的蛋白质的氨基酸序列为：SEQ ID No:8所示。
[0011]进一步，所述基因具体为CsAAP3，其编码的蛋白质的氨基酸序列为：SEQ ID No:9所示。
[0012]进一步，所述基因具体为CsAAP4，其编码的蛋白质的氨基酸序列为：SEQ ID No:10所示。
[0013]进一步，所述基因具体为CsAAP5，其编码的蛋白质的氨基酸序列为：SEQ ID No:11所示。
[0014]进一步，所述基因具体为CsAAP6，其编码的蛋白质的氨基酸序列为：SEQ ID No:12所示。
[0015]本专利技术还提供一种上述基因CsAAPs在构件提高生产茶叶中茶氨酸含量的转基因茶树的系统中的应用。
[0016]本专利技术还提供一种上述基因CsAAPs在高含量茶氨酸茶树品种筛选或育种系统中的应用。
[0017]本专利技术还提供一种上述基因CsAAPs在工业生产茶氨酸的系统中的应用。
[0018]本专利技术相比现有技术具有以下优点：
[0019]本专利技术提供一种茶树氨基酸转运蛋白基因CsAAPs及其应用，为进行构建转基因茶树，以提高其茶叶茶氨酸含量，提供了有效途径；为工业生产茶氨酸，提供了理论基础；为筛选高茶氨酸茶树品种，提供了有效地筛选条件。
附图说明
[0020]图1为实施例1中培养结果对比图。
[0021]图2为实施例2中培养结果对比图。
[0022]图3为实施例3中培养结果对比图。
[0023]图4为实施例4中培养结果对比图。
[0024]图5为实施例5中培养结果对比图。
[0025]图6为实施例6中培养结果对比图。
具体实施方式
[0026]下面，举实施例说明本专利技术，但是，本专利技术并不限于下述的实施例。
[0027]本专利技术中选用的所有原辅材料、试剂和仪器、设备都为本领域熟知选用的，但不限制本专利技术的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本专利技术以下实施方式的实施。
[0028]为了初步验证基因是否具有转运茶氨酸的能力，我们选择了一种氨基酸转运蛋白缺失型的酵母突变体22Δ10α，该酵母突变体除了能在以精氨酸为唯一氮源的YNB培养基上正常生长外，在以其他氨基酸和GABA为唯一氮源的培养基上均不能正常生长，是验证氨基酸转运蛋白基因转运功能的理想菌株。
[0029]实施1
[0030]在本实施例1验证CsAAP1是否具有转运茶氨酸的能力。
[0031]在本实施例中提供验证试验，具体试验步骤如下：
[0032]1.1实验材料与试剂
[0033]1.1.1实验材料
[0034]酵母突变菌株22Δ10α由美国弗吉尼亚理工学院Guillaume Pilot惠赠；野生型菌株223344C由南京农业大学徐国华教授惠赠；大肠杆菌菌株DH5α感受态细胞购自北京金式瑞科技有限公司；克隆转运蛋白基因的中间载体pEASY；pYES2载体南京农业大学徐国华教
授惠赠品种为舒茶早的茶树。
[0035]1.1.2实验试剂
[0036]T4连接酶(TaKaRa，北京)；酵母感受态制备及质粒转化试剂盒Frozen-EZ Yeast TransformationⅡKit(ZYMO RESEARCH,USA)；胶回收试剂盒AxyPrep DNA Gel Extraction Kit(AxyGEN，杭州)；质粒小提试剂盒FastPure Plasmid Mini Kit(VAZYME，南京)；BCA Protein Assay Kit(康维世纪，北京)；氢离子抑制剂：2,4-二硝基苯酚(DNP)羰基氰氯苯腙(CCCP)、焦碳酸二乙酯(DEPC)；
[0037]1.2主要试剂配方
[0038]1.2.1：YNB培养基配方：
[0039][0040]上述材料配置完成后，用KOH调PH至5.5-6.0，最后用去离子水定容至1L
[0041]高压蒸汽灭菌121℃,20min，按照上述配方分别配置成固体YNB培养基和液体YNB培养基。
[0042]1.2.2：TAE buffer、1％的琼脂糖凝胶。
[0043]1.2.3：酵母洗涤缓冲液：
[0044]50mM
ꢀꢀ
磷酸三钾
[0045]0.6M
ꢀꢀ
山梨醇
[0046]上述材料配置完成后，用浓盐酸调PH至4.5。
[0047]1.2.4：10xGST Wash Buff本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种茶树氨基酸转运蛋白基因CsAAPs，其特征在于，所述基因具体为CsAAP1、CsAAP2、CsAAP3、CsAAP4、CsAAP5、CsAAP6中的任意一种，所述CsAAP1的核苷酸序列具体为SEQ ID NO1，所述CsAAP2的核苷酸序列具体为SEQ ID NO2，所述CsAAP3的核苷酸序列具体为SEQ ID NO3，所述CsAAP4的核苷酸序列具体为SEQ ID NO4，所述CsAAP5的核苷酸序列具体为SEQ ID NO5，所述CsAAP6的核苷酸序列具体为SEQ ID NO6。2.根据权利要求1所述的一种茶树氨基酸转运蛋白基因CsAAPs，其特征在于，所述基因具体为CsAAP1，其编码的蛋白质的氨基酸序列为：SEQ ID No:7所示。3.根据权利要求1所述的一种茶树氨基酸转运蛋白基因CsAAPs，其特征在于，所述基因具体为CsAAP2，编码的蛋白质的氨基酸序列为：SEQ ID No:8所示。4.根据权利要求1所述的一种茶树氨基酸转运蛋白基...
【专利技术属性】
技术研发人员：张照亮，宛晓春，张书沛，杨天元，董春霞，李芳，鲍时来，冯琳，韦朝领，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：
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