一种烟草生物碱合成负向调控NtARF6蛋白的原核表达、蛋白纯化方法技术

本发明专利技术首公开了一种烟草生物碱合成负向调控NtARF6蛋白的原核表达、蛋白纯化方法，到目前为止，尚未有人体外表达过NtARF6蛋白，而本发明专利技术通过基因工程方法，本发明专利技术首次成功表达纯化了NtARF6蛋白。纯化了NtARF6蛋白。

【技术实现步骤摘要】
一种烟草生物碱合成负向调控NtARF6蛋白的原核表达、蛋白纯化方法


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种烟草生物碱合成负向调控NtARF6蛋白的原核表达、蛋白纯化方法。

技术介绍

[0002]烟草是重要的经济作物，是切克一年生草本植物。烟碱是栽培烟草重要的特征化合物，占烟草总生物碱的95％左右。
[0003]ARF(Auxin Response Factor)类型的转录因子基因是普通烟草生长发育过程当中重要的调控因子。近年来，随着基因组和测序技术的发展，正向调控烟草尼古丁生物合成调控因子已经基本明确，而且相关分子调控机理也逐渐清晰。相比之下，烟草中能够负向调控尼古丁生物合成的调控因子却鲜见报道。具相关文献报道，负向调控烟草尼古丁合成基本上是通过直接或间接影响不同植物激素之间的互作来实现的，比如生长素(IAA)、乙烯利(Ethylene)。我们通过对乙烯利处理后烟草根部组织转录组进行分析后获得NtARF6基因表达模式和NtARF6与相关尼古丁合成代谢酶转录组共表达分析的结果，确定了NtARF6与尼古丁合成直接相关，相关本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种编码烟草生物碱合成负向调控NtARF6蛋白的基因，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.权利要求1所述基因编码的NtARF6蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2。3.包含权利要求1所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。4.权利要求3所述的重组表达载体的制备方法如下：提取4-5叶烟苗总RNA，接着反转录出cDNA；以cDNA为模板扩增NtARF6基因；将NtARF6扩增产物经BamH I和Hind III双酶切后，通过DNA连接酶插入到经同样双酶切的pET-28a表达载体中，得到重组质粒pBI121-NtARF6。5.一种烟草生物碱合成负向调控NtARF6蛋白的原核表达、蛋白纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)用权利要求4所述的重组表达载体转化大肠杆菌细胞，得到表达NtARF6蛋白的重组原核表达菌株PBI121
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【专利技术属性】
技术研发人员：曾珍，韩芳，陈剑，韦海燕，
申请(专利权)人：江苏麦莎实业有限公司，
类型：发明
国别省市：