一种实验研究用痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种实验用痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法；所述方法包括步骤：称备原料，配置培养基，制得BHI Sup.培养基；复苏种菌；重悬菌体；菌种培养。本发明专利技术中，通过配置的BHI Sup.培养基，并在厌氧环境下进行培养，能有效解决由于痤疮丙酸杆菌生长需要微需氧或厌氧的环境、且生长速率慢，及采用现有技术在体外构建其生物膜困难等问题。用现有技术在体外构建其生物膜困难等问题。

【技术实现步骤摘要】
一种实验研究用痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种实验研究用痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法。

技术介绍

[0002]现有技术公开了痤疮丙酸杆菌是一种厌氧的革兰阳性杆菌，主要定植在皮肤毛囊皮脂腺单位，是人体皮肤的共生菌群。痤疮丙酸杆菌在痤疮的发生发展中有重要的作用，此外，其也可作为一种机会致病菌，引起多种植入物相关感染。目前，系统或局部抗生素被广泛用于治疗痤疮丙酸杆菌引起的感染，然而，痤疮丙酸杆菌对抗生素的耐药率正在不断升高；据研究报道，目前其对抗生素的耐药率已高达55.5%，其中尤以对大环内酯类和林可霉素类抗生素的耐药率最高。近年来，关于细菌生物膜形成导致抗生素耐药的研究越来越多。
[0003]细菌生物膜是细菌在生长过程中为适应生存环境而吸附于惰性或活性材料表面形成的一种与浮游细胞相对应的生存方式，有三个关键的组成部分：细菌细胞、供细菌附着的平面，以及细胞外的多糖蛋白复合物；后者由细菌分泌，并能够保护细菌免受宿主免疫反应及局部和系统抗生素治疗的伤害。由于痤疮丙酸杆菌生长缓慢，临床怀疑是痤疮本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种实验研究用痤疮丙酸杆菌生物膜的构建培养方法，其特征在于，包括步骤：步骤1 称备原料：BHI 干粉、酵母提取物；步骤2 配置培养基：将BHI干粉、酵母提取物溶于水中，再加入葡萄糖配制成1%葡萄糖溶液，混合搅拌均匀，制得BHI Sup.培养基，调整培养基pH值为7.0；步骤3 复苏种菌：将冻存的痤疮丙酸杆菌菌株于室温下融化后在血平板上划线种菌，待细菌复苏后接种于布氏琼脂肉汤，调整菌株的OD600nm，使用振荡培养箱在厌氧培养；步骤4 重悬菌体：使用无菌离心管收集培养菌体，离心处理后，弃上层清液，使用布氏琼脂肉汤重悬菌体，调整OD600nm值至1.0；步骤5 菌种培养：将重悬后的菌体用BHI Sup.培养基稀释，然后加入96孔板，厌氧培养。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1中，称得37g的BHI 干粉、5g的酵母提取物；所述步骤2中：将37g BHI干粉、5g酵母提取物溶于1L水中，再加入葡萄糖配制成1%葡萄糖溶液，搅拌均匀，制得BHI Sup.培养基，调整培养基pH值为7.0；所述步骤3 中：细菌复苏后接种于布氏琼脂肉汤，菌株的OD600nm均调整为0.1，振荡转速为220rpm， 37℃厌氧培养120h；所述步骤4 中：培...

【专利技术属性】
技术研发人员：马英，贺轶轩，卢忠，杨勤萍，吴旸，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：