一株吡蚜酮降解菌IURMF17及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株吡蚜酮降解菌IURM F17及其应用，属于生物技术领域。实验证明，本发明专利技术的吡蚜酮降解菌IURM F17可以在以吡蚜酮为唯一碳源的环境中存活，具有很高的吡蚜酮降解活性，本发明专利技术所提供的吡蚜酮降解菌IURM F17可以应用于污染环境的吡蚜酮农药降解，在土壤污染处理和环境修复方面具有很好的应用价值。处理和环境修复方面具有很好的应用价值。处理和环境修复方面具有很好的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一株吡蚜酮降解菌IURM F17及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体为一株吡蚜酮降解菌IURM F17及其应用。

技术介绍

[0002]我国是传统的农业大国，我国的农业已经走过了五千多年的历史，随着人口数量不断增多，对粮食的需求量日益增大，因此迫切需要化肥、农药等农业新技术的投产，以达到粮食增质增量的目的。化学农药的使用，极大程度地减少了由于病虫害等原因造成的损失，提高了农产品质量。但随着这些农药的长期使用，它们的弊端日益凸显：在环境中不断蓄积，致使严重污染土壤、水体及大气环境，降低了周围生物种群的多样性，破坏生态系统的平衡，同时也影响了人们的健康和农产品的出口等，随着人们生活水平和环境保护意识的不断提高，农药的危害已经被人们深入的认识和了解，因此，消除农药残留污染已经成为科研工作者亟待解决的社会科学问题。
[0003]目前，国内外对农药的降解方法很多，在不同的降解方法中，微生物降解法是最重要、最清洁高效的方法之一。微生物因其种类多、分布广、繁殖快、易变异、生化适应能力强等特点，往往是污染物的最终降解途径。微生物修复是利用特定微生物体的代谢吸收、转化、清除或降解化学农药成分，实现环境净化、生态效应恢复的生物措施，具有高效经济、无二次污染等特点。大量研究证明，自然环境中存在的多种微生物在农药降解方面起着重要的作用，科研工作者通过富集培养、分离筛选等技术已发现了许多能够降解农药的微生物。但是吡蚜酮的降解菌株很少有报道，需要我们进行进一步进行研究，对消除环境中废弃吡蚜酮的污染、净化环境有着重大的现实意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种吡蚜酮降解菌，及其对土壤和水体中吡蚜酮降解等方面的应用。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种吡蚜酮降解菌 IURM F17；其中吡蚜酮降解菌IURM F17已于2020年10月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No:20854，分类命名为斯氏假单胞菌 (Pseudomonas stutzeri)。
[0006]上述吡蚜酮降解菌IURM F17，对被吡蚜酮污染的环境具有修复作用，尤其对被吡蚜酮污染的土壤环境，以及被吡蚜酮污染的水体，具有修复作用。
[0007]上述吡蚜酮降解菌IURM F17对土壤中的废弃吡蚜酮具有降解作用，对水体中所含的吡蚜酮具有降解作用，可直接应用于农田的净化处理领域。
[0008]上述的该吡蚜酮降解菌IURM F17的筛选方法，步骤如下：
[0009]1)从被吡蚜酮污染的污泥中称取泥土，加入吡蚜酮降解菌IURM F17筛选液体培养基进行富集，在35-40℃、150-200r/min恒温摇床中培养4-10天；
[0010]2)吸取步骤1中所得的培养基加入新的吡蚜酮降解菌IURM F17筛选液体培养基进
行传代，如此传代3-6次；
[0011]3)取步骤2中所得菌液在LB平板上划线分离，得到吡蚜酮降解菌IURM F17；
[0012]其中吡蚜酮降解菌IURM F17筛选培养基成分为：每1L去离子水中含有吡蚜酮农药100mg/L，氯化铵0.66g，磷酸氢二钾(K2HPO4)1.5g，磷酸二氢钾 (KH2PO4)0.5g，硫酸镁(MgSO4)0.1g，磷酸氢二钾(K2HPO4)1.5g，氯化钠0.35 g，pH 7.0-7.2；
[0013]LB固体培养基成分为：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，琼脂粉15g，以去离子水补足体积至1L。
[0014]上述吡蚜酮降解菌IURM F17的优选筛选方法，步骤如下：
[0015]1)从被吡蚜酮污染的污泥中称取泥土5g，加入100mL吡蚜酮降解菌IURM F17筛选液体培养基进行富集，在37℃、180r/min恒温摇床中培养5-7天；
[0016]2)吸取步骤1中所得的培养基3mL加入新的吡蚜酮降解菌IURM F17筛选液体培养基进行传代，如此传代4-5次；
[0017]3)取步骤2中所得菌液在LB平板上划线分离，得到吡蚜酮降解菌IURM F17；
[0018]上述吡蚜酮降解菌IURM F17的干粉剂，为用使用扩大培养后的吡蚜酮降解菌IURM F17，经过常规方法干燥而成。
[0019]所述吡蚜酮降解菌IURM F17是按照如下所述方法筛选获得：
[0020]一、从江苏常州武进区被吡蚜酮污染的污泥中称取泥土分离菌株
[0021]称取污泥5g，加入95mL吡蚜酮降解菌IURM F17筛选液体培养基进行富集，在37℃、180r/min恒温摇床中培养5-7天；然后吸取培养基3mL加入新的吡蚜酮降解菌IURM F17筛选液体培养基进行传代，如此传代4-5次，在LB平板上划线分离，经过上百次分离试验筛选，最终得到一批能在以吡蚜酮作为唯一碳源的培养基中生存的菌种；
[0022]所述吡蚜酮降解菌IURM F17筛选培养基成分为：每1L去离子水中含有吡蚜酮农药100mg/L，氯化铵0.66g，磷酸氢二钾(K2HPO4)1.5g，磷酸二氢钾 (KH2PO4)0.5g，硫酸镁(MgSO4)0.1g，磷酸氢二钾(K2HPO4)1.5g，氯化钠0.35g，pH 7.0-7.2；
[0023]所述LB固体培养基成分为：蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化钠10g，琼脂粉 15g，以去离子水补足体积至1L。
[0024]二、分析分离得到的不同菌种对培养基中吡蚜酮的降解效率，筛选获得吡蚜酮降解效果最佳的菌株。
[0025]具体测定方法如下：
[0026]1、培养基制备
[0027]基础盐培养基：NH4Cl 0.66g，K2HPO41.5 g，KH2PO40.5 g，MgSO40.1 g， K2HPO41.5 g，NaCl 0.35g，pH 7.0-7.2；121℃灭菌20min。
[0028]LB液体培养基：酵母粉5g，氯化钠10g，蛋白胨10g，去离子水1000mL， pH 7.0，121℃灭菌20min。
[0029]2、吡蚜酮降解效率测定方法
[0030]2.1吡蚜酮标准曲线的绘制
[0031]取0.05g吡蚜酮标准品，用色谱乙腈溶解，定容至50mL容量瓶中，制成 1000mg/L的母液。再用色谱纯乙腈稀释母液，逐级配置10、20、40、50、60、 80和100mg/L浓度的系列标准溶液，利用高效液相色谱仪在波长298nm条件下，测定峰面积，作浓度-峰面积标准曲线。
[0032]2.2吡蚜酮降解率测定方法
[0033]取培养液，用高效液相色谱仪在波长298nm条件下，流动相为含甲醇/水/ 甲酸(100:900:2，v/v/v)的混合物以1.0mL/min流速输送洗脱。进样体积为20μL，柱温保持在40℃，测定峰面积。利用吡蚜酮标准曲线所建立的线性回归方程计算出吡蚜酮浓度，进一步计算得出本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株吡蚜酮降解菌IURM F17，其特征在于，该吡蚜酮降解菌IURM F17为斯氏假单胞菌，其中该吡蚜酮降解菌IURM F17已于2020年10月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC NO.20854。2.如权利要求1所述的吡蚜酮降解菌IURM F17的应用，其特征在于，所述吡蚜酮降解菌IURM F17对被吡蚜酮污染的环境具有修复作用。3.如权利要求2所述的吡蚜酮降解菌IURM F17的应用，其特征在于，所述吡蚜酮降解菌IURM F17对土壤中被废弃的吡蚜酮污染的环境，具有修复作用。4.如权利要求2所述的吡蚜酮降解菌IURM F17的应用，其特征在于，所述吡蚜酮降解菌IURM F17对被水体中的吡蚜酮污染的水环境，具有修复作用。5.如权利要求1所述的吡蚜酮降解菌IURM F17的应用，其特征在于，所述吡蚜酮降解菌IURM F17对土壤中的废弃吡蚜酮具有降解作用。6.如权利要求1所述的吡蚜酮降解菌IURM F17的应用，其特征在于，所述吡蚜酮降解菌IURM F17对水体中所含的吡蚜酮具有降解作用。7.如权利要求1所述的该吡蚜酮降解菌IURM F17的筛选方法，其特征在于，步骤如下：1）从使用过吡蚜酮农药的土壤中称取泥土，加入吡蚜酮降解菌IURM F17筛选液体培养基中进行富集，在35-40℃、150-...

【专利技术属性】
技术研发人员：任建军，王珍珠，张晋，李春雨，牛东泽，王永江，魏文亮，赵建，梁硕，
申请(专利权)人：江苏碧奥环保科技有限公司河北慈心环保科技有限公司，
类型：发明
国别省市：