一种罗汉松实多糖的组成及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种罗汉松实多糖的组成及其在免疫调节功能方面的用途。罗汉松实多糖是从罗汉松或短叶罗汉松的花托中分离纯化获得的多糖。该多糖重均分子量为6018Da，数均分子量为6690Da；属于杂多糖，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成(摩尔比为21.26∶73.96∶4.78)；连接方式为α

【技术实现步骤摘要】
macrophyllus (Thunb.)D.Don或短叶罗汉松Podocarpus macrophyllus(Thunb.)D.Don var.maki(Sieb.)Endl.的花托中提取分离纯化获得。
[0012]所述的罗汉松实多糖具有如下特征：
[0013](1)重均分子量为6018Da，数均分子量为6690Da；
[0014](2)属于杂多糖，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，这三种单糖的摩尔比为21.26∶73.96∶4.78；连接方式为α-和β-构型的糖苷键。
[0015]根据本专利技术的另一方面，本专利技术提供了罗汉松实多糖在饮料、方便食品、糖果制品或特殊膳食食品方面的用途；以及在制备增强免疫力的保健食品或药品方面的用途。
[0016]本专利技术罗汉松实多糖，经动物实验证实，其能促进脾细胞中T、B淋巴细胞的增殖，从而促进机体的细胞免疫和体液免疫反应，提高机体免疫力；可通过调节血清细胞因子IL-2、IL-6、TNF-α以及INF-γ的表达，从而改善机体的免疫功能。
[0017]下面将结合具体实施例对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应该将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0018]图1罗汉松实多糖凝胶渗透色谱图
[0019]图2混合单糖标准品高效液相色谱图
[0020]图3罗汉松实多糖单糖组成分析高效液相色谱图
[0021]图4罗汉松实多糖1H-核磁共振谱图/>[0022]图5罗汉松实多糖13C-核磁共振谱图
具体实施方式
[0023]实施例1
[0024]罗汉松实多糖分子量测定
[0025]采用凝胶渗透色谱(GPC)法测定罗汉松实多糖分子量。
[0026]将不同相对分子质量的葡聚糖标准品和罗汉松实多糖用磷酸二氢钾(KH2PO4)流动相配制成2.0mg/ml的标准品溶液和样品待测液，用0.45μm滤膜过滤，分别进样检测。色谱条件：色谱柱：TSK G-5000 PWXL柱(7.8
×
300mm)和TSK G-3000 PWXL柱(7.8
×
300mm)串联；流动相：0.02mol/L KH2PO4缓冲溶液；流速：0.6mL/min；进样量：10μL；Waters2414示差检测器；柱温35℃；测定时间：35min。记录图谱。用Breeze GPC软件分析结果，以葡聚糖标准品的相对分子质量分数(logMw)为纵坐标，洗脱体积(V)为横坐标，制作标准曲线。根据标准曲线计算多糖样品等分子量。
[0027]结果，葡聚糖标准品的相对分子质量分数(Log MW)对洗脱体积(V)回归处理的标准曲线方程为：Log MW＝11.23e-0.98eV+6.23e-1
V27.67e-2
V3+8.67e-3
V4[0028]图1为罗汉松实多糖的GPC图。经Breeze GPC软件分析，罗汉松实多糖的重均分子量为6018Da及数均分子量为6690Da。
[0029]实施例2
[0030]罗汉松实多糖组成分析
[0031]单糖组成测定：采用PMP柱前衍生化-HPLC法进行测定。
[0032]精密称取罗汉松实多糖10mg于20mL的钳口瓶中，加入5mL的2mol/L三氟乙酸(TFA)，充入氮气封管(10L/min，1min)。于100℃烘箱中水解反应120min；冷却后加入1mL甲醇，置于70℃水浴中，通入氮气吹干，重复两次以上操作，使完全除去TFA；用1mL 0.3mol/L NaOH溶液溶解上一步产物，得多糖水解液。
[0033]分别精密量取400μL的混合单糖标准液和多糖水解液于5mL的具塞试管，再加入400μLPMP甲醇，充分混合，在70℃水浴条件下反应120min，后取出降至室温；后加入400μL 0.3mol/L的HCl进行中和，调节pH至6～7；随后加入1200μL纯水和1200μL氯仿，充分振摇混匀，静置待分层，弃去氯仿相，重复以上步骤两次。水相用0.45μm滤膜过滤用于HPLC进样分析。色谱条件：色谱柱C18柱(250mm
×
4.6mm
×
5μm)；流动相A：100mM磷酸钠缓冲液(pH＝6.4)；流动相B：乙腈；检测波长：250nm；柱温30℃；流速1ml/min；进样量20μL。
[0034]结果如图2和3所示，图2显示了13种混合单糖标准品的高效液相色谱图；图3显示了3种单糖的色谱峰，分别为甘露糖、葡萄糖和半乳糖。根据色谱峰的峰面积，及各单糖相对分子量，三种单糖的摩尔比为：21.26∶73.96∶4.78，组分中不含糖醛酸，说明罗汉松实多糖是中性杂多糖。
[0035]实施例3
[0036]罗汉松实多糖核磁共振波谱分析
[0037]取真空干燥后的罗汉松实多糖40mg，用氘代二甲亚砜(DMSO)溶解，转移到核磁管中，用核磁共振波谱仪检测，得到罗汉松实多糖的1H-核磁共振谱图和13C-核磁共振谱图。
[0038]图4和5分别为1H-核磁共振谱图和13C-核磁共振谱图。图4显示在5.36ppm有一个质子信号峰，在小于5.0ppm处有丰富的质子信号峰，表明罗汉松实多糖主要含有β-型糖苷键，少量α-型糖苷键。质子共振峰出现在3.2ppm-3.65ppm非常小的区域。其中，位于δ5.36信号峰为α-D-甘露糖的异头氢，δ4.76归属为β-D-葡萄糖异头氢，δ4.67处，β-D-半乳糖异头氢信号峰最强。图5显示，在δ90-100ppm有极弱的β-构型异头碳信号，在δ100-110ppm有极弱的α-构型异头碳信号，表明罗汉松实多糖存在α-构型和β-构型糖苷键。此外，在δ82-84ppm的范围内无信号，结合单糖组成分析结果，表明罗汉松实多糖不含呋喃糖，但含有吡喃糖。在δ62-63ppm范围内的信号峰，结合单糖组成分析结果，表明含有半乳糖，在δ18ppm处无信号，结合单糖组成分析结果，表明不含鼠李糖。
[0039]实施例4
[0040]罗汉松实多糖对荷瘤小鼠脾细胞中T、B淋巴细胞增殖的影响
[0041]采用MTT法测定罗汉松实多糖对荷瘤小鼠脾组织中T、B淋巴细胞增殖能力。
[0042]将荷瘤小鼠随机分为：模型组、环磷酰胺组(CTX)、香菇多糖组(LNT)、罗汉松实多糖(LHSP)高(H)、中(M)、低(L)剂量组；另设正常对照组。正常组和模型组灌胃给予生理盐水，10ml/kg；CTX组20mg/kg；LNT组100mg/kg；LHSP高、中、低剂量组分别为480，240，120mg/kg/d；各组给药容量均为10ml/kg，每天1次，连续给药14天。给药结束后，各组小鼠按以下方法操作。
[0043]小鼠脾细胞悬浮液制备：无菌坏境下摘取小鼠脾脏，浸没在PBS中的200目纱布上，将脾脏磨碎，将滤液转移至15mL离心管中。1000rpm离心5min，弃去上清液，加入2mL红细胞裂解液，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有免疫调节功能的罗汉松实多糖，其特征在于：(1)所述的多糖重均分子量为6018Da，数均分子量为6690Da；(2)所述的多糖属于杂多糖，由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，这三种单糖的摩尔比为21.26∶73.96∶4.78；连接方式为α-和β-构型的糖苷键。2.一种权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄增琼，曾凡艳，林乐珍，
申请(专利权)人：广西医科大学，
类型：发明
国别省市：