筛选细胞的方法、试剂盒及其用途技术

本发明专利技术提供了一种筛选细胞的方法，其包括：(1)在适于候选细胞表达抗体的条件下，将所述候选细胞置于培养腔室中培养预定时间；(2)在所述培养腔室中，形成靶抗体

【技术实现步骤摘要】
筛选细胞的方法、试剂盒及其用途


[0001]本专利技术涉及生物
，具体的，本专利技术涉及筛选细胞的方法、试剂盒及其用途，更具体的，本专利技术涉及一种筛选细胞的方法，一种试剂盒，一种制备抗体的方法，一种筛选单克隆抗体的方法，一种单克隆抗体。

技术介绍

[0002]抗体对在蛋白质定量中有广泛应用，夹心ELISA(Sandwich ELISA)、化学发光和免疫层析，都离不开高质量的抗体对。配对抗体指的是可以同时结合在一个抗原分子上的两个抗体。配对抗体一般应用于双抗夹心法ELISA实验。通常，配对抗体筛选的方法是双抗夹心ELISA法。筛选的原理为：在得到了单克隆抗体后，从中取出两种单克隆抗体，一种作为捕获抗体，另一种作为标记抗体(HRP酶标记)，将捕获抗体包被在抗原板上，先加入抗原，孵育后洗去未结合的抗原，再加入标记抗体孵育后洗去未结合的标记抗体，最后加入显色液显色。如果可以显色，说明标记抗体与抗原特异性结合，该捕获抗体与标记抗体为一对配对抗体。如果不能显色，说明标记抗体不能与抗原结合，从而被洗脱，该捕获抗体与标记抗体不是配对抗体。如果选择的两种单克隆抗体不能进行配对，则需重新选择两种单抗，重新进行试验，直至找出可以配对的抗体。
[0003]然而，目前的配对抗体筛选效率非常低，造成筛选成本大幅升高。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提供了一种能够有效筛选配对抗体的方法。
[0005]由此，在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种筛选细胞的方法，其包括：(1)在适于候选细胞表达抗体的条件下，将所述候选细胞置于培养腔室中培养预定时间；(2)在所述培养腔室中，形成靶抗体-抗原-信号抗体的复合物，所述信号抗体连接有信号分子；和(3)基于所述信号分子的信号，确定所述候选细胞是否为目标细胞。利用该方法能够有效地筛选配对抗体。
[0006]根据本专利技术的实施例，本专利技术提出了一种试剂盒，其包括：
[0007]信号抗体；
[0008]抗原；和
[0009]生物培养芯片。
[0010]根据本专利技术的实施例，本专利技术提出了一种制备抗体的方法，其包括：
[0011]利用前面所述的方法，筛选目标细胞；
[0012]使所述目标细胞进行扩增和表达抗体，以便获得与所述信号抗体具有不同抗原决定簇的抗体。
[0013]根据本专利技术的实施例，本专利技术提出了一种筛选单克隆抗体的方法，其包括：
[0014]将多个杂交瘤细胞分配在所述生物培养芯片上，其中，每个所述腔室中每个所述
培养腔室中含有至多一个所述杂交瘤细胞；
[0015]根据前面所述的方法，选择阳性杂交瘤细胞；
[0016]分离所述阳性杂交瘤细胞；
[0017]对所述阳性杂交瘤细胞进行培养和抗体表达，以便获得单克隆抗体，所述单克隆抗体与所述单克隆抗体与所述信号抗体对应不同的抗原决定簇。
[0018]本专利技术还提出了一种单克隆抗体，其是通过前面所述的方法获得的。该单克隆抗体与所述单克隆抗体与所述信号抗体对应不同的抗原决定簇。
[0019]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0020]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0021]图1显示了根据本专利技术一个实施例的生物细胞培养芯片的结构示意图；
[0022]图2显示了根据本专利技术另一个实施例的生物细胞培养芯片的结构示意图；
[0023]图3显示了根据本专利技术另一个实施例的生物细胞培养芯片的结构示意图；
[0024]图4显示了根据本专利技术一个实施例用于制备生物细胞培养芯片的模板的结构示意图；
[0025]图5显示了根据本专利技术一个实施例的筛选单克隆抗体的方法；
[0026]图6显示了根据本专利技术一个实施例的筛选配对抗体的方法；
[0027]图7显示了根据本专利技术一个实施例培养神经元细胞在悬浮培养和芯片培养条件下的干性比较。
具体实施方式
[0028]下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。
[0029]筛选配对抗体的方法
[0030]在本专利技术的一个方面，本专利技术提出了一种筛选细胞的方法，其包括：(1)在适于候选细胞表达抗体的条件下，将所述候选细胞置于培养腔室中培养预定时间；(2)在所述培养腔室中，形成靶抗体-抗原-信号抗体的复合物，所述信号抗体连接有信号分子；和(3)基于所述信号分子的信号，确定所述候选细胞是否为目标细胞。利用该方法能够有效地筛选配对抗体。利用该方法，通过将候选细胞置于培养腔室中进行单细胞培养，该细胞所分泌的抗体通过形成靶抗体-抗原-信号抗体可以使得信号分子在一定范围内富集，从而能够有效地实现对配对抗体的筛选。该方法与现有的有限稀释法相比要快速、节省成本、提高效率，并且能够实现高通量筛选。
[0031]根据本专利技术的实施例，所述预定时间为1～10小时，优选2～5小时，更优选3小时。
[0032]根据本专利技术的实施例，所述培养腔室设置在生物培养芯片上，所述生物培养芯片包括：基体，所述基体由基体材料形成；和微孔，所述微孔形成在所述基体的表面，并且所述
微孔在所述基体的表面开口，并且所述微孔限定出所述培养腔室，所述靶抗体-抗原-信号抗体是通过向所述培养腔室中添加抗原-信号抗体或者依次添加游离形式的抗原和信号抗体形成的。
[0033]根据本专利技术的实施例，所述微孔在所述基体构成预定的阵列图形。由此，可以方便地对阳性微孔进行定位，从而方便后续取出单细胞进行扩大培养等操作。
[0034]根据本专利技术的实施例，所述基体材料所述基体材料具有大约1.25～大约1.75的平衡溶胀率。
[0035]根据本专利技术的实施例，所述微孔的开口直径为8-25微米，深度为15-35微米。
[0036]根据本专利技术的实施例，所述基体材料包括选自胶原水凝胶、甲基化纤维素、琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶等的至少之一。
[0037]根据本专利技术的实施例，至少两个相邻的所述微孔的间距为10～50微米。
[0038]根据本专利技术的实施例，所述信号分子为荧光分子，优选地，所述荧光分子包括FITC、AF488的至少之一。
[0039]根据本专利技术的实施例，根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，利用荧光显微镜，基于所述信号分子的所述信号，对阳性细胞进行定位。
[0040]根据本专利技术的实施例，本专利技术提出了一种试剂盒，其包括：
[0041]信号抗体；
[0042]抗原；和
[0043]生物培养芯片。
[0044]根据本专利技术的实施例，本专利技术提出本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种筛选细胞的方法，其特征在在于，包括：(1)在适于候选细胞表达抗体的条件下，将所述候选细胞置于培养腔室中培养预定时间；(2)在所述培养腔室中，形成靶抗体-抗原-信号抗体的复合物，所述信号抗体连接有信号分子；和(3)基于所述信号分子的信号，确定所述候选细胞是否为目标细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预定时间为1～10小时，优选2～5小时，更优选3小时。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养腔室设置在生物培养芯片上，所述生物培养芯片包括：基体，所述基体由基体材料形成；和微孔，所述微孔形成在所述基体的表面，并且所述微孔在所述基体的表面开口，并且所述微孔限定出所述培养腔室，所述靶抗体-抗原-信号抗体是通过向所述培养腔室中添加抗原-信号抗体或者依次添加游离形式的抗原和信号抗体形成的。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述微孔在所述基体构成预定的阵列图形。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述基体材料所述基体材料具有大约1.25～大约1.75的平衡溶胀率。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述微孔的开口直径为8-25微米，深度为15-35微米。7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述基体材料包括选自胶原水凝胶、甲基化纤维素...

【专利技术属性】
技术研发人员：高晓航，魏雨，
申请(专利权)人：南京利康立德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：