一种快速荧光蛋白酶活性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，预先设定一份蛋白酶含量值参考表；S2、配置荧光用探针的荧光溶液；S3、根据预先设定的蛋白酶含量值参考表对应不同颜色的荧光溶液；创建蛋白酶荧光色参考表；S4、测定样品中是否有蛋白酶；S5、然后将样品中含有蛋白酶的样品放入到S2的荧光溶液中，进行培养，在温度为20

【技术实现步骤摘要】
一种快速荧光蛋白酶活性检测方法


[0001]本专利技术涉及一种蛋白酶标记的
，特别涉及一种快速荧光蛋白酶活性检测方法。

技术介绍

[0002]蛋白酶是最重要的一种工业酶制剂，能催化蛋白质和多肽水解，广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。在干酪生产、肉类嫩化和植物蛋白改性中都大量的使用蛋白酶。此外，胃蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、羧肽酶和氨肽酶都是人体消化道中的蛋白酶，在它们的作用下，人体摄入的蛋白质被水解成小分子肽和氨基酸。
[0003]蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在 pH 为 8.0 、温度为 37℃ 时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如： D-Hanks 液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
[0004]目前在焙烤工业中使用的蛋白酶有霉菌蛋白酶、细菌蛋白酶和植物蛋白酶。面包生产中应用蛋白酶能改变面筋性能，其作用形式和面包调制时力的作用及还原剂的化学反应不同。蛋白酶的作用不是破坏二硫键，而是断开形成面筋的三维网状结构。蛋白酶在面包生产中的作用主要表现在面团发酵过程中。由于蛋白酶的作用，使面粉中的蛋白质降解为肽、氨基酸，以供给酵母碳源，促进发酵，因此说明蛋白酶很重要，而蛋白酶广泛存在于动物内脏、植物茎叶、果实和微生物中。微生物蛋白酶，主要由霉菌、细菌，其次由酵母、放线菌生产，目前一般通过无影管检测蛋白酶，整个检测工艺复杂，而且后期查看也不太方便，故此需要改进，如何利用荧光标记的方式来检测蛋白酶位置显得尤为重要。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，以解决上述
技术介绍
中提出的检测工艺复杂的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，包括以下步骤：S1、预先设定一份蛋白酶含量值参考表；S2、配置荧光用探针的荧光溶液：以市售纯度高于98%的芘、尼罗红、 香豆素481、 苏丹红、 氟硼荧染料为荧光探针，将疏水性染料溶解到市售光谱纯丙酮、 氯仿或甲醇的有机溶剂中并添加具有不同温度下和200-500nm不同紫外光激发下呈现不同发光颜色的荧光材料， 配制荧光溶液；S3、根据预先设定的蛋白酶含量值参考表对应不同颜色的荧光溶液；创建蛋白酶荧光色参考表；
S4、测定样品中是否有蛋白酶；S5、然后将样品中含有蛋白酶的样品放入到S2的荧光溶液中，进行培养，在温度为20-37℃条件下,培养1.5-2小时；S6、用户在35-37
°
C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。
[0007]进一步，还包括在标记蛋白酶时还需要预先创建不同温度下，对应荧光材料的颜色变化，然后根据样品的实时温度，查询对应标记荧光的颜色值。
[0008]进一步，在步骤S4中测定样品中是否有蛋白酶的具体方法如下：取样品中的部分，加入浓度为2-3μM的氮杂环罗丹明双酰胺培养液培养1-3小时，然后通过检测培养液的荧光強度，判断蛋白酶的存在情况，荧光强度越高，蛋白酶越多。
[0009]进一步，在步骤S4中测定样品中是否有蛋白酶的具体方法还可以是：取样品中的部分加入金属纳米簇反应，得到反应产物，检测所述反应产物的荧光强度，所述反应产物无变化判断所述样品中无蛋白酶，若有变化，说明样品中有蛋白酶。
[0010]进一步，在步骤S2中配置荧光用探针的荧光溶液：以市售纯度高于98%的芘、尼罗红、 香豆素481、 苏丹红、 氟硼荧染料为荧光探针，将疏水性染料溶解到市售光谱纯丙酮、 氯仿或甲醇的有机溶剂中并添加具有不同温度下和450nm紫外光激发下呈现不同发光颜色的荧光材料， 配制荧光溶液。
[0011]进一步，在步骤S6中用户在36
°
C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。
[0012]进一步，所述金属纳米簇包括牛血清蛋白-金纳米簇或牛血清蛋白-银纳米簇或多肽-金纳米簇或多肽-银纳米簇中的一种。
[0013]本专利技术得到的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法的技术效果是：通过上述的荧光标记方法使得整个操作工艺简单，能够增加快速的发现检测样品中是否有蛋白酶。
具体实施方式
[0014]实施例1：本实施例提供了一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，包括以下步骤：S1、预先设定一份蛋白酶含量值参考表；S2、配置荧光用探针的荧光溶液：以市售纯度高于98%的芘、尼罗红、 香豆素481、 苏丹红、 氟硼荧染料为荧光探针，将疏水性染料溶解到市售光谱纯丙酮、 氯仿或甲醇的有机溶剂中并添加具有不同温度下和200-500nm不同紫外光激发下呈现不同发光颜色的荧光材料， 配制荧光溶液；S3、根据预先设定的蛋白酶含量值参考表对应不同颜色的荧光溶液；创建蛋白酶荧光色参考表；S4、测定样品中是否有蛋白酶；S5、然后将样品中含有蛋白酶的样品放入到S2的荧光溶液中，进行培养，在温度为20-37℃条件下,培养1.5-2小时；S6、用户在35-37
°
C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。
[0015]进一步，还包括在标记蛋白酶时还需要预先创建不同温度下，对应荧光材料的颜色变化，然后根据样品的实时温度，查询对应标记荧光的颜色值。
[0016]进一步，在步骤S4中测定样品中是否有蛋白酶的具体方法如下：取样品中的部分，加入浓度为2-3μM的氮杂环罗丹明双酰胺培养液培养1-3小时，然后通过检测培养液的荧光強度，判断蛋白酶的存在情况，荧光强度越高，蛋白酶越多。
[0017]进一步，在步骤S2中配置荧光用探针的荧光溶液：以市售纯度高于98%的芘、尼罗红、 香豆素481、 苏丹红、 氟硼荧染料为荧光探针，将疏水性染料溶解到市售光谱纯丙酮、 氯仿或甲醇的有机溶剂中并添加具有不同温度下和450nm紫外光激发下呈现不同发光颜色的荧光材料， 配制荧光溶液。
[0018]进一步，在步骤S6中用户在36
°
C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。
[0019]因此通过本专利技术在使用时，先预先设定一份蛋白酶含量值参考表；然后配置荧光用探针的荧光溶液：再根据预先设定的蛋白酶含量值参考表对应不同颜色的荧光溶液；创建蛋白酶荧光色参考表并创建方便用户查看的表格，然后进行实时检测样品数据，通过实时测定样品中是否有蛋白酶；将样品中含有蛋白酶的样品放入到S2的荧光溶液中，进行培养，在温度为20-37℃条件下,培养1.5-2小时，用户本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于包括以下步骤：S1、预先设定一份蛋白酶含量值参考表；S2、配置荧光用探针的荧光溶液：以市售纯度高于98%的芘、尼罗红、 香豆素481、 苏丹红、 氟硼荧染料为荧光探针，将疏水性染料溶解到市售光谱纯丙酮、 氯仿或甲醇的有机溶剂中并添加具有不同温度下和200-500nm不同紫外光激发下呈现不同发光颜色的荧光材料， 配制荧光溶液；S3、根据预先设定的蛋白酶含量值参考表对应不同颜色的荧光溶液；创建蛋白酶荧光色参考表；S4、测定样品中是否有蛋白酶；S5、然后将样品中含有蛋白酶的样品放入到S2的荧光溶液中，进行培养，在温度为20-37℃条件下,培养1.5-2小时；S6、用户在35-37
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C下进行荧光光谱跟踪检测，获得显示不同的荧光颜色，然后在蛋白酶荧光色参考表中查找对应的蛋白酶含量值。2.根据权利要求1所述的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于：还包括在标记蛋白酶时还需要预先创建不同温度下，对应荧光材料的颜色变化，然后根据样品的实时温度，查询对应标记荧光的颜色值。3.根据权利要求1所述的一种快速荧光蛋白酶活性检测方法，其特征在于：在步骤S4中测定样品中是否有蛋白酶的具体方法如下：取样品中的部分，加入浓度为2-3μM的氮杂环罗丹明双...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙永刚，
申请(专利权)人：南京思泰乐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：