一种共表达磷脂酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种共表达磷脂酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法，属于生物工程、酶工程、微生物工程技术领域。本发明专利技术将磷脂酶和目标蛋白在枯草芽孢杆菌中共表达，可实现胞内定位目标蛋白胞外表达，可以使海藻糖合酶的胞外分泌量达到5.8～6.2U/mL，并使分支酶的胞外分泌量达到456～580U/mL，提高生产效率、简化后提取工艺，为规模化生产目的蛋白提供了应用基础，具有较高的学术意义和应用价值。具有较高的学术意义和应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种共表达磷脂酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法


[0001]本专利技术涉及一种共表达磷脂酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法，属于基因工程、酶工程、微生物工程


技术介绍

[0002]枯草芽孢杆菌属于革兰氏阳性菌，具备无致病性，环境兼容性好、不易产生抗药性等优点，而且还具有良好的发酵基础，其培养简单快速，已被美国食品药物管理局和中国相关部门认定为食品安全级菌株GRAS(Generally recognized as safe)，目前广泛用于生产各种工业用酶。
[0003]胞外表达可简化下游纯化工艺，节约成本，因此在大规模工业化生产中具有绝对优势。而对于天然胞内定位型蛋白通常只能在细胞内进行表达并且需要利用物理或化学方法对细胞进行破碎才能获得目的蛋白，后续提取工艺不但繁琐而且成本较高，因此寻找能够有效的简化下游提取步骤降低产物纯化成本成为了研究者的目标。
[0004]我们前期研究发现，当Bacillus cereus来源的磷脂酶C在大肠杆菌中重组表达时，能够在一定程度水解细胞膜的磷脂成分，增加细胞膜的通透性，保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.磷脂酶在促进枯草芽孢杆菌胞内蛋白向胞外分泌方面的应用，其特征在于，所述磷脂酶为(a)或(b)：(a)含有SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的磷脂酶；(b)在(a)的基础上进行了一个或多个氨基酸位点取代、缺失或添加的具有磷脂酶功能的由(a)衍生的蛋白质。2.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，将磷脂酶与海藻糖合酶、分支酶、木糖异构酶、4,6-α-葡萄糖基转移酶中的至少一种酶共表达。3.根据权利要求2所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述磷脂酶来源于褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)，含有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。4.根据权利要求2所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述磷脂酶来源于链霉菌(Streptomyces antibioticus)，含有SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。5.根据权利要求2～4任一所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以质粒pHY300PLK为表达载体。6.一种使枯...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，宿玲恰，黄燕，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：