一种利用角质酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用角质酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法，属于生物工程、酶工程、微生物工程技术领域。本发明专利技术采用角质酶突变体和目标蛋白在枯草芽孢杆菌中共表达，目标蛋白包括木糖异构酶、4,6

【技术实现步骤摘要】
一种利用角质酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法


[0001]本专利技术涉及一种利用角质酶促进蛋白在枯草芽孢杆菌中胞外表达的方法，属于基因工程、酶工程、微生物工程


技术介绍

[0002]蛋白质的胞外表达可简化下游纯化工艺，节约成本，在大规模工业化生产中具有绝对优势。而对于天然胞内定位型蛋白，通常只能在细胞内进行表达，并且需要利用物理或化学方法对细胞进行破碎才能获得目的蛋白，后续提取工艺不但繁琐而且成本较高，因此寻找能够有效的简化下游提取步骤降低产物纯化成本成为了研究者的目标。
[0003]专利技术人课题组在前期研究中发现，角质酶在无信号肽介导的情况下实现了在大肠杆菌系统中高效胞外基质“分泌”型表达，尽管这种“分泌”机制还未完全解析，但是推测该现象与角质酶有限的磷脂水解活性引发的膜通透性增强有关。此外，专利技术人课题组还发现，当角质酶在大肠杆菌中与胞内蛋白共表达时，该效应还能够引发天然胞内定位型蛋白的胞外释放，并且在此过程中未发现明显的细胞裂解现象，因此，不会对下游分离提取过程产生明显的不利影响。当角质酶与天然胞内定位型蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种角质酶突变体，其特征在于，所述角质酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的角质酶的第175、177、178、207、209、213、214位中的一个或多个位点进行突变得到的。2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述角质酶突变体为：将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的角质酶的第175、177、178、207、209、213或214位的氨基酸突变为丙氨酸得到的；或将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的角质酶的第175位和第177位氨基酸同时突变为丙氨酸得到的；或将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的角质酶的第207位和第209位氨基酸同时突变为丙氨酸得到的；或将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的角质酶的第213位和第214位氨基酸同时突变为丙氨酸得到的。3.编码权利要求1或2所述突变体的基因。4.携带权利要求3所述基因的载体。5.携带权利要求3所述基因，或权利要求4所述载体的重组细胞。6.一种重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，共表达了权利要求1或2所述的角质酶突变体与胞内蛋白。7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，宿玲恰，黄燕，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：