本发明专利技术涉及病毒检测技术领域，尤其涉及一种用于检测新型冠状病毒抗体的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括抗体检测试纸；抗体检测试纸包括：底板、沿底板长度方向依次设置的样品垫、免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；免疫微球垫包被有被新型冠状病毒人工抗原所标记的乳胶微球；所述新型冠状病毒人工抗原包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明专利技术采用乳胶微球作为示踪标记物，利用抗原抗体反应对目标物进行检测，通过对制备工艺中的多项参数进行优化，并采用阻断剂进行处理，后得到的试剂盒可以准确、快捷地对新型冠状病毒进行检测。测。测。
【技术实现步骤摘要】
一种用于检测新型冠状病毒抗体的试剂盒及其应用
[0001]本专利技术涉及病毒检测
，尤其涉及一种用于检测新型冠状病毒抗体的试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]目前，由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的新型冠状肺炎（COVID-19）在大范围内广泛传播，对患者的身体健康及各行业经济发展造成严重影响。据目前研究，新型冠状病毒潜伏期一般在1-14天左右，多为3-7天。对于新型冠状病毒的实验室检测可采用病原学检查和血清学检查等方法。由于病原学检查有一定的漏检率，现有技术一般采用血清学检查结合病原学检查的方法进行检测，这可以显著提高新型冠状病毒的检出率，同时血清学检查结果对于医生判断治疗中的病人的病情情况有很大的参考价值。
[0003]抗体检测是血清学检测中的重要检测方式之一，抗体检测主要通过特异的抗原重组蛋白与血液样本中潜在的新型冠状病毒抗体进行免疫反应，来实现抗体的检测。一般情况下，抗体需要病毒感染人体后，由抗原决定簇与淋巴细胞接触进而诱导淋巴细胞产生特异性抗体。而不同个体对入侵抗原的免疫应答呈现不同的强度和反应时间，会对抗体检测的灵敏度有较大影响。
[0004]新型冠状病毒由棘突蛋白基因、包膜蛋白基因、膜糖蛋白基因和核衣壳蛋白基因组成。选择何种人工合成抗原去特异性的结合感染期的抗体，成为抗体检测试剂表现高灵敏度的重要研究基础，而如何排除血清中诸如血色素、胆固醇以及其他疾病产生的抗体的干扰是保证产品准确性的重要研究内容。
技术实现思路
[0005]为了解决现有技术存在的问题，本专利技术提供一种用于检测新型冠状病毒抗体的试剂盒及其应用。本专利技术通过对试剂盒中免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜制备流程中的各项工艺进行了优化，并采用阻断剂进行处理，得到的试剂盒可以准确、快捷地对新型冠状病毒（2019-nCoV）进行检测。
[0006]第一方面，本专利技术提供一种用于检测新型冠状病毒抗体的试剂盒，包括：抗体检测试纸；所述抗体检测试纸包括：底板、沿底板长度方向依次设置的样品垫、免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；所述免疫微球垫包被有被新型冠状病毒人工抗原所标记的乳胶微球；所述新型冠状病毒人工抗原包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，具体由SEQ ID NO.2所示核苷酸序列编码得到。
[0007]本专利技术乳胶颗粒作为标记示踪物，利用抗原抗体反应和侧向层析方法对目标物进行检测分析。乳胶颗粒粒径均匀、颜色鲜艳，表面可以偶联官能团，因此可以采用共价方式进行标记，标记后的抗体结合稳定不易脱落，是一种理想的肉眼可视标记示踪物。
[0008]进一步地，所述免疫微球垫的制备方法包括如下步骤：将乳胶微球经过15~45mg/mL EDC以及5~15mg/mL的NHS活化剂处理后，使用1.5~2mg/mL新型冠状病毒人工抗原标记3～4小时，在标记的同时加入兔IgG，经过离心纯化得到乳胶微球-新型冠状病毒人工抗原复合物；将所述乳胶微球-新型冠状病毒人工抗原复合物包被至释放垫上即得免疫微球垫。将所述乳胶微球-新型冠状病毒人工抗原复合物包被至释放垫上即得免疫微球垫。
[0009]EDC作为一种活化剂，使用浓度过低会导致标记效率降低，产品达不到预期的灵敏度，但是使用浓度过高有可能会导致乳胶标记后出现凝集或者增加非特异性反应，在15~45mg/mL的范围内，可以起到较好的活化效果。
[0010]标记抗体量对产品性能同样有一定的影响，浓度过低会导致灵敏度低，浓度过高容易增加非特异性反应，在1.5~2mg/mL的范围内，具有较好的标记效果。
[0011]此外，反应时间也对乳胶微球和人工抗原的结合效率有一定影响，3~4个小时为最合适的反应时间。
[0012]进一步地，所述包被为采用喷涂的方式，喷涂量为2.5~3μL/cm。
[0013]进一步地，所述免疫硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线，所述检测线包括新型冠状病毒IgG单克隆抗体检测线和新型冠状病毒IgM单克隆抗体检测线；并且所述质控线和检测线在包被时，抗体浓度均为2~2.5mg/mL，在此浓度范围内，可以保证免疫反应充分进行的同时节约抗体蛋白的用量。
[0014]进一步地，所述质控线为羊抗兔IgG抗体，所述新型冠状病毒IgG单克隆抗体和所述新型冠状病毒IgM单克隆抗体均为鼠抗人抗体。
[0015]进一步地，所述免疫微球垫和所述免疫硝酸纤维素膜在制备完成后还包括干燥处理，所述干燥处理为在38-42℃的环境条件中干燥处理4~16h。
[0016]干燥时间同样会影响免疫微球垫和免疫硝酸纤维素膜的性能，过低会导致拖带产生，而过高会产生假阴性的检测结果。
[0017]进一步地，所述样品垫经过阻断处理，所述阻断处理为：使用5~15HAMA μg/mL阻断剂浸泡处理5~10min。
[0018]因产品测试部分健康人样本时出现假阳现象，本专利技术在处理该不良现象时分析这可能是有部分健康人拥有小鼠抗体具有特异性抗体，因此筛选分析发现HAMA阻断剂可以起到良好的阻断效果，因此本专利技术针对样品垫进行了阻断处理，显著降低了出现假阳性和假阴性效果的可能。
[0019]进一步地，所述试剂盒还包括样本缓冲液。
[0020]进一步地，在抗体检测试纸接触待测样本10-20分钟内判读检测结果。
[0021]本专利技术进一步提供所述试剂盒在制备用于检测新型冠状病毒的产品中的应用。
[0022]作为优选的实施方式，本专利技术提供一种用于检测新型冠状病毒抗体的试剂盒的制备方法，包括：（1）将乳胶微球经过15~45mg/mL EDC活化剂处理后，使用1.5~2mg/mL新型冠状病毒S1蛋白标记3～4小时，在标记的同时加入0.5~1.5mg/mL兔IgG，经过离心纯化得到新型冠状病毒S1蛋白-乳胶微球复合物；（2）将所述新型冠状病毒S1蛋白-乳胶微球复合物以2.5~3μL/cm的喷量喷涂至释放垫
上制备免疫微球垫；（3）使用2~2.5mg/mL鼠抗人新型冠状病毒 IgG单克隆抗体配置T1检测线溶液、使用2~2.5mg/mL鼠抗人新型冠状病毒IgM单克隆抗体配置T2检测线溶液，使用2~2.5mg/mL羊抗兔IgG抗体配置C质控线溶液；（4）在硝酸纤维素膜上喷涂步骤（3）中的T1检测线溶液、T2检测线溶液和C质控线溶液制备免疫硝酸纤维素膜；（5）将所述免疫微球垫和所述免疫硝酸纤维素膜，在38-42℃的环境条件中干燥处理4~16h；（6）对样品垫使用5~15 μg/mL HAMA阻断剂浸泡处理5min
·
10min；所述新型冠状病毒S1蛋白包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
[0023]进一步地，还包括：将这样品垫、免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸沿长度方向粘贴在塑料衬片上组成新型冠状病毒抗体检测试纸半成品板。
[0024]进一步地，将新型冠状病毒抗体检测试纸半成品板分切成试剂条，装进塑料卡卡槽内，组装成卡后，和干燥剂一起装入铝箔袋，密封、包装即得单人份新型冠状病毒抗体检测试纸（卡本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于检测新型冠状病毒抗体的试剂盒，其特征在于，包括：抗体检测试纸；所述抗体检测试纸包括：底板、沿底板长度方向依次设置的样品垫、免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；所述免疫微球垫包被有被新型冠状病毒人工抗原所标记的乳胶微球；所述新型冠状病毒人工抗原包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫微球垫的制备方法包括如下步骤：将乳胶微球经过15~45mg/mL EDC以及5~15mg/mL的NHS活化剂处理后，使用1.5~2mg/mL新型冠状病毒人工抗原标记3～4小时，在标记的同时加入兔IgG，经过离心纯化得到乳胶微球-新型冠状病毒人工抗原复合物；将所述乳胶微球-新型冠状病毒人工抗原复合物包被至释放垫上即得免疫微球垫。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫硝酸纤维素膜上设有质控线和检测线，所述检测线包括新型冠状病毒IgG单克隆抗体检测线和新型冠状病毒IgM单克隆抗体检测线；并且所述质控线和检测线在包被时，抗体浓度均为2~2.5mg/mL。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述质控线为羊抗兔IgG抗体，和/或，所述新型冠状病毒IgG单克隆抗体和所述新型冠状病毒IgM单克隆抗体均为鼠抗人抗体。5.根据权利要求2-4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫微球垫和所述免疫硝酸纤维素膜在制备完成后还包括干燥处理，所述干燥处理为在38-42℃的环境条件中干燥处理4~16h。6.根据权利要求1所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈浪，王丽，
申请(专利权)人：北京金沃夫生物工程科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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