一种新型冠状病毒检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒检测试剂盒，包括抗原检测试纸；该抗原检测试纸包括衬片、吸水纸、免疫硝酸纤维素膜、免疫微球垫，免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸黏贴在衬片上；免疫微球垫上包被有乳胶微球标记的新型冠状病毒2019‑nCoV单克隆抗体1；免疫硝酸纤维素膜上设有包被有新型冠状病毒2019‑nCoV单克隆抗体2的检测线和包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。本发明专利技术采用乳胶颗粒作为标记示踪物，利用抗原抗体反应和侧向层析方法对目标物进行检测分析。在实际操作中具有方便快捷优势：检测人员无需检测专业知识，检测实验无需专业设备配置，可以基层社区医院及卫生服务中心广泛开展。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒检测试剂盒
本专利技术涉及一种用于新型冠状病毒检测用的试剂盒。
技术介绍
自2019年底开始，由新型冠状病毒(2019-nCoV)感染引起的新型冠状肺炎已在全球范围内造成广泛传播，对全人类的身体健康及经济发展造成严重影响，已被世界卫生组织列为“国际关注的突发公共卫生事件”。目前对于2019-nCoV的诊断，主要采用基于聚合酶链式反应即PCR反应的核酸检测，并结合患者的临床症状和流行病学数据。据目前的检测情况，核酸检测试验对检测环境、操作人员经验及设备要求较高，但是部分落后地区或其他基层社区医院缺少具有相应设备的实验室及专门工作人员。因此在需排除大量疑似病例、及时控制病原体传播的过程中，亟需一种快速检测检测试剂，以实现及早对潜伏感染者进行确诊并采取相关措施。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种成本低、检测要求相对不高的，针对新型冠状病毒检测用的试剂盒。为了达到上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：一种新型冠状病毒检测试剂盒，包括抗原检测试纸；该抗原检测试纸包括衬片、吸水纸、免疫硝酸纤维素膜、免疫微球垫，所述免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸黏贴在所述衬片上；所述免疫微球垫上包被有乳胶微球标记的新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1；所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体2的检测线和包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。在部分实施例中，较为优选的，乳胶微球采用直径300nm左右的红色乳胶微球。本专利技术试剂盒通过以下方法制备：(1)免疫微球垫的制备：用乳胶微球标记新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1，制备免疫微球溶液，包被至释放垫上制备免疫微球垫；(2)免疫硝酸纤维素膜的制备：分别采用新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体2羊抗鼠IgG多克隆抗体配置检测线溶液和质控线溶液，包被至免疫硝酸纤维素膜上；(3)抗原检测试纸的制备：将免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸粘贴在衬片上制备检测试纸半成品板；将检测试纸半成品板分切制备条状抗原检测试纸。其中，乳胶微球标记新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1的具体方法为：a、乳胶微球预处理：取乳胶微球溶液用标记缓冲液MES进行洗涤；b、EDC活化：将步骤(a)预处理后的乳胶微球加入标记缓冲液MES，然后加入EDC和NHS溶液混合反应；c、乳胶标记：将反应后的混合溶液离心，取沉淀加入MES缓冲液复溶，并超声均匀，加入新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1，反应；d、封闭：加入氨基乙醇溶液，反应，封闭；离心，弃上清液，沉淀备用；e、离心纯化：将沉淀用TBS缓冲液复溶，超声均匀即得所免疫微球溶液。在部分实施例中，较为优选地，活化剂EDC的用量比例如下：当乳胶微球溶液浓度为1％、用量为500μL时，EDC溶液浓度为100mg/ml、用量为5μL；即EDC的用量与乳胶微球的质量比为100:1。所述步骤(c)中乳胶标记的新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1的用量比例如下：当乳胶微球溶液浓度为1％、用量为500μL时，新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1用量以乳胶微球溶液的体积计量为1-2.5mg/ml，更为优选的用量为2.0mg/ml，即新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1的用量与乳胶微球的质量比为2:1。步骤(c)中乳胶标记的反应时间为3-5小时，优选4小时。其中，步骤(1)免疫微球垫的制备过程中，免疫微球溶液于释放垫的喷量为2.5-3.0ul/cm，喷点后得到的免疫微球垫于38-42℃下干燥4-16小时；所述步骤(2)免疫硝酸纤维素膜的制备过程中，检测线溶液和质控线溶液为2.0-2.5mg/ml，并将制备得到的免疫硝酸纤维素膜于38-42℃下干燥4-16小时。本专利技术新型冠状病毒检测试剂盒还包括样本抽提液，所述样本抽提液以0.15MNacl为基础溶液，并含有曲拉通-100和NP-40；所述曲拉通-100在样本抽提液中的浓度为0.5％，NP-40在样本抽提液中的浓度为1％。抗原/抗体检测应用的是抗原-抗体免疫反应原理，对样本中的病毒抗原和病毒蛋白诱导人体免疫反应产生的抗体进行检测。抗体检测主要通过特异的抗原重组蛋白与血液样本中潜在的新型冠状病毒抗体进行免疫反应，来检测抗体。抗体需要病毒感染人体后，由抗原决定簇与淋巴细胞接触进而诱导淋巴细胞产生特异性抗体。而不同个体对入侵抗原的免疫应答呈现不同的强度和反应时间，会对抗体检测的灵敏度有较大影响。而抗原检测是基于特异性抗体与样本中的病毒蛋白产生免疫反应，可以直接对感染部位样本进行检测。本专利技术采用乳胶颗粒作为标记示踪物，利用抗原抗体反应和侧向层析方法对目标物进行检测分析。在实际操作中具有方便快捷优势：检测人员无需检测专业知识，检测实验无需专业设备配置，可以基层社区医院及卫生服务中心广泛开展。现采用乳胶颗粒作为标记示踪物的原因是乳胶颗粒粒径均匀、颜色鲜艳，表面可以偶联官能团，因此可以采用共价方式进行标记，标记后的抗体结合稳定不易脱落，是一种理想的肉眼可视标记示踪物，而且乳胶颗粒制作工艺成熟，市场上有很多优质的乳胶颗粒供应商，比如赛默飞世尔和默克以及苏州为度等企业。本公司购买优质乳胶颗粒，直接进行生产标记操作。而示踪物的均一性好产品的变异系数(CV)比较好控制，批间差别也较小。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。本专利技术实施例中采用的新型冠状病毒(2019-nCoV)单克隆抗体1、2为本公司筛选得到的：新型冠状病毒(2019-nCoV)单克隆抗体1(抗体株12B3)新型冠状病毒(2019-nCoV)单克隆抗体2(抗体株1C5)。因新型冠状病毒(2019-nCoV)S蛋白极易降解，所以采用其它针对新型冠状病毒(2019-nCoV)N蛋白的特异性抗体，可适用于本专利技术。初步的筛选是使用人工合成抗原按照100μg/孔包被在96孔板上，然后加入相应的单克隆抗体样本摇床37℃30min，洗脱后加入羊抗鼠酶标抗体(100μg/孔,100μL/孔)37℃30min，加入1％BSA每孔200ul进行封闭，封闭半小时后进行洗脱，加入显色液后加入50μL终止液终止实验，挑选OD值在2.0以上的孔所对应的细胞株。再次的筛选是包被抗体，将筛选出来的抗体(1μg/孔)包被在包被在96孔板上，加入N蛋白人工合成蛋白(100μg/孔,100μL/孔)，然后加入相应的单克隆抗体样本摇床37℃30min，洗脱后加入羊抗鼠酶标抗体37℃30min，加入1％BSA每孔200ul进行封闭，封闭半小时后进行洗脱，加入显色液后加入50μL终止液终止实验。挑选OD值在1.0以上的孔所对应的细胞株进行配养。挑选可以配对的再筛选的OD值较高的细胞株进行克隆，最后选出新型冠状病毒(2019-nCoV)单克隆抗体1(抗体株12B3)新型冠状病毒(2019-nCoV本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括抗原检测试纸；所述抗原检测试纸包括衬片、吸水纸、免疫硝酸纤维素膜、免疫微球垫，所述免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸粘贴在所述衬片上；所述免疫微球垫上包被有乳胶微球标记的新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1；所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体2的检测线和包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括抗原检测试纸；所述抗原检测试纸包括衬片、吸水纸、免疫硝酸纤维素膜、免疫微球垫，所述免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸粘贴在所述衬片上；所述免疫微球垫上包被有乳胶微球标记的新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1；所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体2的检测线和包被有羊抗鼠IgG多克隆抗体的质控线。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述乳胶微球采用直径为290-300nm的红色乳胶微球。


3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒通过以下方法制备：
(1)免疫微球垫的制备：用乳胶微球标记新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1，制备免疫微球溶液，包被至释放垫上制备免疫微球垫；
(2)免疫硝酸纤维素膜的制备：分别采用新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体2羊抗鼠IgG多克隆抗体配置检测线溶液和质控线溶液，包被至免疫硝酸纤维素膜上；
(3)抗原检测试纸的制备：将免疫微球垫、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸粘贴在衬片上制备检测试纸半成品板；将检测试纸半成品板分切制备条状抗原检测试纸。


4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述乳胶微球标记新型冠状病毒2019-nCoV单克隆抗体1的具体方法为：
a、乳胶微球预处理：取乳胶微球溶液用标记缓冲液MES进行洗涤；
b、EDC活化：将步骤(a)预处理后的乳胶微球加入标记缓冲液MES，然后加入EDC和NHS溶液混合反应；
c、乳胶标记...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈浪，王丽，
申请(专利权)人：北京金沃夫生物工程科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11