曲唑酮的检测方法技术

本发明专利技术提供了曲唑酮的检测方法，包括：制备具有曲唑酮和内标物的至少三种浓度的标准溶液，标准溶液中的内标物的量相同；利用液相色谱仪在检测条件下检测每一种标准溶液，获得标准溶液对应的第一检测结果；根据各个第一检测结果、标准溶液中曲唑酮的浓度和内标物的浓度，拟合曲唑酮的标准曲线方程；取待处理样品离心后的第一上清液；向第一上清液内加入内标物，涡旋混匀，顺次加入蛋白沉淀剂，对第一上清液进行蛋白沉淀，得到待测样品；利用液相色谱仪在检测条件下检测待测样品，获得待测样品的第二检测结果；基于标准曲线方程和第二检测结果，得到待测样品中曲唑酮的浓度。本方案能够缩短样品检测时间。缩短样品检测时间。缩短样品检测时间。

【技术实现步骤摘要】
曲唑酮的检测方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，特别涉及曲唑酮的检测方法。

技术介绍

[0002]曲唑酮为一种三唑吡啶衍生物，具有中枢镇静、轻微松弛肌肉作用。
[0003]目前，检测样品中曲唑酮含量通常采用的方法为高效液相色谱法。而采用该方法检测通常需要对待测样品进行较复杂的前处理，包括通过氮气吹干以及加复溶液等复杂操作，耗费时间较多，从而导致样品检测时间较长。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了曲唑酮的检测方法，能够缩短样品检测时间。
[0005]为了解决上述问题，本专利技术实施例提供了曲唑酮的检测方法，包括：
[0006]制备至少三种浓度的标准溶液，其中，所述标准溶液为具有曲唑酮和内标物的溶液，所述至少三种浓度的标准溶液中的内标物的量相同；
[0007]利用液相色谱仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；
[0008]根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中曲唑酮的浓度和内标物的浓度，拟合曲唑酮的标准曲线方程；
[0009]对待处理样品进行离心处理，取离心后的第一上清液；
[0010]向所述第一上清液内加入内标物，涡旋混匀，顺次加入蛋白沉淀剂，对所述第一上清液进行蛋白沉淀，得到待测样品；
[0011]利用液相色谱仪在所述检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；
[0012]基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中曲唑酮的浓度。
[0013]优选地，为了更准确地检测出待测样品中曲唑酮的浓度，标准溶液和待测样品中的内标物均为2-萘酚，2-萘酚不存在与曲唑酮联合使用导致定量不准的风险。
[0014]具体地，系列浓度的标准溶液制备方式如下：
[0015](1)标准储备液的配制
[0016]精确称取曲唑酮标准品置于容量瓶中，用甲醇进行溶解，并定容至容量瓶标线，得到标准储备液，并在-80℃条件下保存。
[0017](2)标准工作液的配制
[0018]取适量步骤(1)中标准储备液，用含有60-80％甲醇的水溶液作为稀释液进行稀释混合，得到含有500-30000ng/mL曲唑酮的系列标曲混合中间液作为标准工作液，并在-80℃条件下保存。
[0019](3)内标储备液的配制
[0020]取内标物2-萘酚标准品置于容量瓶中，用甲醇进行溶解，并定容至容量瓶的标线，得到内标储备液，并在-80℃条件下保存。
[0021](4)内标工作液的配制
[0022]取步骤(3)中内标储备液，用稀释液进行稀释，得到含2-萘酚的内标工作液，并在-80℃保存。
[0023](5)标准溶液的标定
[0024]分别移取步骤(2)中不同浓度的标准工作液和步骤(4)中的内标工作液置于离心管中，分别向各个离心管中加入稀释液，混合制成至少三种不同浓度的混合溶液，将上述混合溶液在转速为1500-2000rpm下涡旋混匀0.5-1.5min后，移取上清液作为标准溶液。
[0025]为了降低曲唑酮和2-萘酚的工作溶液的挥发性，所以稀释液为含有60-80％甲醇的水溶液。
[0026]优选地，所述检测条件中的液相条件，包括：C18反相色谱柱；
[0027]洗脱流动相中的水相包括：含有磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液；
[0028]洗脱流动相中的有机相包括：乙腈溶液；
[0029]柱温为35-45℃；流速为0.8-1.2mL/min。
[0030]具体地，色谱柱包括Waters公司的SunFire C18色谱柱，长度为150mm、内径为4.6mm以及填料粒径为5μm的色谱柱。
[0031]具体地，针对水相中的含有磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液pH范围包括pH6至pH8，比如，pH 6、pH6.3、pH6.5、pH6.7、pH7、pH7.3、pH7.5、pH7.7以及pH8，其中，洗脱流动相在pH6.7时，则可以含有10mM磷酸二氢钠和5mM磷酸氢二钠的水溶液。
[0032]针对柱温来说，35-45℃是指35℃至45℃范围内的任一温度值，比如，35℃、40℃以及45℃。
[0033]针对流速来说，0.8-1.2mL/min是指0.8mL/min至1.2mL/min范围内的任一流速，比如，0.8mL/min、1.0mL/min以及1.2mL/min。
[0034]优选地，洗脱流动相中的水相与有机相的体积比为：35:65-50:50。
[0035]针对洗脱流动相中的水相与有机相的体积比来说，35:65-50:50是指35:65至50:50范围内的任一比例，比如，35:65、40:60、45:55以及50:50。
[0036]比如，水相的体积占洗脱流动相体积的40％，有机相的体积占洗脱流动相体积的60％；水相的体积占洗脱流动相体积的45％，有机相的体积占洗脱流动相体积的55％。
[0037]具体地，当水相在洗脱流动相中体积占比小于35％时，曲唑酮和内标物的分离度较差，内标物的色谱峰受杂质干扰；当水相在洗脱流动相中体积占比大于50％时，曲唑酮和内标物的保留时间增大，会增大曲唑酮的检测时间，因此，洗脱流动相中的水相与有机相的体积比为35:65-50:50。
[0038]优选地，所述检测条件中的荧光检测条件，包括：
[0039]激发波长：320nm；发射波长：440nm。
[0040]具体地，采用RF-20A检测器，发射光谱扫描模式；荧光检测条件中的响应时间：0.5s；增益：4；灵敏度：中。
[0041]具体地，当荧光检测条件中的激发波长低于320nm、发射波长低于440nm时，曲唑酮的响应值下降，会影响对待检测样品的检测灵敏度；而在荧光检测条件中的激发波长大于
320nm、发射波长大于440nm时，内标物的响应值下降，导致曲唑酮与内标物的响应至相差太大，影响待测样品检测的准确性，因此，激发波长为320nm；发射波长为440nm。
[0042]优选地，
[0043]所述标准曲线方程的两个变量分别为：所述标准溶液中曲唑酮的色谱峰面积与内标物的色谱峰面积的比值，以及所述标准溶液中曲唑酮的浓度与内标物的浓度的比值。
[0044]具体地，若曲唑酮的色谱峰面积与内标物的色谱峰面积的比值作为标准曲线方程的x值(即自变量)时，曲唑酮的浓度与内标物的浓度的比值作为标准曲线方程的y值(即因变量)。
[0045]若曲唑酮的色谱峰面积与内标物的色谱峰面积的比值作为标准曲线方程的y值(即因变量)时，曲唑酮的浓度与内标物的浓度的比值则为标准曲线方程的x值(即自变量)。
[0046]优选地，为了更好地去除杂质，对目标物进行提纯，对加入内标物后的第一上清液进行蛋白沉淀的蛋白沉淀剂包括单一的乙腈溶液、单一的甲醇溶液或者乙腈溶液与甲醇溶液任意比例混合后的溶液。
[0047]优选地，为了更好的去本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.曲唑酮的检测方法，其特征在于，包括：制备至少三种浓度的标准溶液，其中，所述标准溶液为具有曲唑酮和内标物的溶液，所述至少三种浓度的标准溶液中的内标物的量相同；利用液相色谱仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中曲唑酮的浓度和内标物的浓度，拟合曲唑酮的标准曲线方程；对待处理样品进行离心处理，取离心后的第一上清液；向所述第一上清液内加入内标物，涡旋混匀，顺次加入蛋白沉淀剂，对所述第一上清液进行蛋白沉淀，得到待测样品；利用液相色谱仪在所述检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中曲唑酮的浓度。2.根据权利要求1所述的曲唑酮的检测方法，其特征在于，所述检测条件中的液相条件，包括：C18反相色谱柱；洗脱流动相中的水相包括：含有磷酸二氢钠和磷酸氢二钠的水溶液；洗脱流动相中的有机相包括：乙腈溶液；柱温为35-45℃；流速为0.8-1.2mL/min。3.根据权利要求1所述的曲唑酮的检测方法，其特征在于，洗脱流动相中的水相与有机相的体积比为35:65-50:50。4.根据权利要求1所述的曲唑酮的检测方法，其特征在于，所述检测条件中的荧光检测条件，包括：激发波长：320nm；发射波长：440nm。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘杏立，贾永娟，倪君君，
申请(专利权)人：北京和合医学诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：