本发明专利技术公开了一种检测牛奶和奶粉中地塞米松残留量的方法，该方法特异性强、灵敏度高,稳定性好，采用酸化乙腈提取，QuEChERS技术净化，前过程无需过柱，操作简单，并且检出限更低。通过对现有检测的技术中的各种参数进行调整，尤其是对流动相以及样品前处理时所采用的溶剂、条件等进行优化，简化了检测过程，节约检测时间，更适合大批量的检测的工作。更适合大批量的检测的工作。更适合大批量的检测的工作。
【技术实现步骤摘要】
一种检测牛奶和奶粉中地塞米松残留量的方法
[0001]本专利技术涉及兽药检测
，具体涉及牛奶和奶粉中地塞米松残留量的测定。
技术介绍
[0002]地塞米松是一种人工合成的皮质类固醇，简称为DEX，具有抗炎及抗过敏的效果，能抑制结缔组织的增生，降低毛细血管和细胞膜的通透性，减少炎性渗出，抑制组织胺和其他毒性物质的形成与释放，促进蛋白质转变成糖，减少糖的利用；主要应用于各种炎症、严重感冒、传染病、过敏性疾病、风湿、休克、代谢疾病及引产，但是长期使用，容易导致水肿、低血钾、肌萎缩、骨质疏松、脱钙、病理性骨折、糖尿、幼畜生产停滞等。
[0003]一些违法养殖场为了缩短养殖周期，给动物大量喂食地塞米松，这是一种肾上腺皮质激素类药物，能使动物体重增加，但是这种做法的后果就是给人们的食品带来安全隐患，地塞米松的残留将对消费者的身体健康产生危害，从长远看还会对养殖业的发展和市场的正常秩序产生影响。因此，采取有效的措施，对其残留进行积极的检测和监控，防止残留超标的动物源性食品流入市场，成为当务之急。目前各国严格禁止地塞米松作为生长激素使用，同时限制此药物用于动物源性食品中。其中，牛奶和奶粉作为大多数婴儿和成年人的必需食品，但是近年来却一直有地塞米松检出量超标事件的发生。我国及欧盟规定牛奶中的地塞米松的最大残留限量为0.3ug/kg，日本肯定列表中的牛奶中的残留限量为0.02mg/kg。
[0004]因此，我们需要及时建立牛奶和奶粉中地塞米松残留量的快速检测方法，不断寻找出检测时间短、灵敏度好、选择性好、操作性简单的样品前处理技术，以便加大监测力度，及时反映牛奶和奶粉中去地塞米松残留的必要性，满足当下人民对身体健康和食品安全的诉求。
[0005]现有的检测方法如《农业部1031号公告-2-2008动物源性食品中糖皮质激素类药物多残留检测液相色谱-串联质谱法》、《GB/T 22978-2008牛奶和奶粉中地塞米松残留量的测定液相色谱-串联质谱法》等方法前处理方法相对繁琐，需要C
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固相萃取柱净化，前处理过程耗时过长同时检测成本较高。尤其是对于牛奶和奶粉这种需求量大的产品，检测样品多，如何能够缩短检测时间以及提高检测效率是节省成本的关键因素。因此在现有技术上的基础上改进检测条件，缩短检测时间是急需解决的问题。
技术实现思路
[0006]为解决现有技术中缺陷，本专利技术提供一种牛奶和奶粉中地塞米松残留的快速检测方法。该方法灵敏度高，稳定性高，操作简单，效率高，并且检出限更低。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]一种牛奶和奶粉中地塞米松残留的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
[0009](1)配制标准品溶液：首先制备标准储备液，称取适量的地塞米松标准品，用甲醇配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备液，于-18℃冰箱中保存；将标准储备液用甲醇配制成浓
度为10μg/mL的标准中间液，于4℃冰箱中保存；将标准中间液用甲醇配制成浓度为1.0μg/mL和0.1μg/mL的标准工作液，于4℃冰箱中保存；
[0010]根据实验需要，吸取标准工作溶液，用空白样品基质溶液配制成浓度分别为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL、20ng/mL的标准品工作曲线，现用现配。
[0011](2)醋酸乙腈溶液：吸取10ml的醋酸用乙腈定容到1000ml的容量瓶中配制成浓度为1％的醋酸乙腈溶液。
[0012](3)10％甲醇水(含0.1％的甲酸)溶液：10ml甲醇加水定容到100ml，加入100μl甲酸，配制成10％甲醇水含0.1％的甲酸溶液。
[0013](4)待测样品前处理：
[0014]A.提取：称取牛奶或奶粉2.00g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，回收过程中另加入0.1μg/mL地塞米松标准溶液10μL，1％醋酸乙腈溶液15mL(含油脂较多的样品加10mL正己烷)。涡旋混匀5min，超声提取15min，再涡旋混匀5min，在转速为4000r/min的离心机中离心5min；
[0015]B.净化：将上清液(加正己烷的样品需将正己烷除去)全部转移到准备好的净化管(10g马弗炉烘过的无水硫酸钠、0.5g C
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、0.2g PSA)中，涡旋混匀5min，转速为4000r/min离心机中离心5min。吸取7.5mL上清液于10mL离心管中，于40℃水浴中氮气吹干。
[0016]C.复溶：向吹干的离心管中加入0.5mL定溶液(10％甲醇水含0.1％的甲酸)，超声30S，涡旋混匀5min，过0.22um滤膜，待上机测试。
[0017]空白基质溶液除不加标准溶液，其余操作按照A.B.C进行。
[0018](5)将前处理好的样液用液相色谱-串联质谱仪定量分析，对待测样品进行定性和定量检测，得到牛奶和奶粉中地塞米松残留的含量，具体如下：
[0019]A、将步骤(1)配制的不同浓度的地塞米松标准工作曲线，用液相色谱-串联质谱仪分析检测，进样体积为5.0μL，获得标准品溶液的总离子流图、定量离子色谱图和定性离子对色谱图；
[0020]B、取5.0μL待测样品溶液进样，用液相色谱-串联质谱仪分析检测，得到待测样品溶液的总离子流图、定量离子对色谱图和定性离子对色谱图；
[0021]C、以地塞米松的定量离子峰面积和浓度分别为横纵坐标，得到地塞米松标准工作曲线；
[0022]D、根据待测样品溶液中地塞米松残留的定量离子峰面积，结合标准曲线，计算得到待测样液中地塞米松的浓度C，并按以下公式计算得到牛奶和奶粉中地塞米松的含量X，含量计算公式为：
[0023]X＝C*V*1000*f/(m*1000)
[0024]其中X为待测样品中奶粉和牛奶地塞米松的含量，单位为μg/kg；C是待测样品中地塞米松残留的浓度，单位为ng/mL；V是待测样品溶解体积，单位为mL；m是待测样品质量，单位为g；f是稀释倍数。
[0025]其中液相色谱-串联质谱仪的色谱条件为：
[0026]液相色谱条件：
[0027]a)色谱柱:Rapid Resolution HD 3.0X100mm 1.8-Micron；
[0028]b)流动相及梯度：乙腈+0.1％甲酸5mM乙酸铵水溶液；
[0029]表1流动相梯度洗脱
[0030][0031]c)结束时间：5min；
[0032]d)流速：0.4mL/min；
[0033]e)柱温：30℃；
[0034]f)进样量：5μL。
[0035]质谱条件：见表2，表3。
[0036]表2安捷伦6460QQQ
[0037][0038]表3地塞米松监测离子对及其相应的碰撞能量
[0039][0040][0041]本专利技术的有益效果为：
[0042](1)整个检测样品前处理过程简单、快速，同现有方法相比，大大提高了检测效率。<本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测牛奶和奶粉中地塞米松残留量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)配制标准品溶液：首先制备标准储备液，称取适量的地塞米松标准品，用甲醇配制成浓度为10μg/L的标准储备液，于-18℃冰箱中保存；然后将标准储备液用甲醇配制成浓度为1000μg/mL的混合标准工作液，于4℃冰箱中保存；制作标准曲线时将标准工作液用空白基质溶液配制成浓度分别为1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL、20ng/mL的标准品溶液备用；(2)待测样品前处理：A.提取：称取牛奶或奶粉2.00g试样于50mL离心管中，回收过程中另加入1000ng/mL地塞米松标准溶液20μL，1％醋酸乙腈溶液15mL；涡旋混匀5min，超声提取15min，再涡旋混匀5min，在转速为4000r/min的离心机中离心5min；B.净化：将上清液全部转移到准备好的净化管中，所述净化管中包括10g无水硫酸钠、0.5gC
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、0.2gPSA；涡旋混匀5min，转速为4000r/min离心机中离心5min；吸取7.5mL上清液于10mL离心管中，于40℃水浴中氮气吹干；C.复溶：向吹干的离心管中加入0.5mL含0.1％甲酸的10％甲醇水，超声30S，涡旋混匀5min，过0.22um滤膜，待上机测试；(3)将前处理好的样液用液相色谱-串联质谱仪定量分析，对待测样品进行定性和定量检测，得到牛奶和奶粉中地塞米松残留的含量。2.根据权利要求1所述的检测牛奶和奶粉中地塞米松残留量的方法，其特征在于，步骤(3)具体如下：A、将步骤(1)配制的不同浓度的地塞米松标准工作曲线，用液相色谱-串联质谱仪分析检测，进样体积为5.0μL，获得标准品溶液的总离子流图、定量离子色谱图和定性离子对色谱图；B、取5.0μL待测样品溶液进样，用液相色谱-串联质谱仪分析检测，得到待测样品溶液的总离子流图、定量离子对色谱图和定性离子对色谱图；C、...
【专利技术属性】
技术研发人员：许文涛，高素兰，刘清亮，孙艳丽，
申请(专利权)人：山东拜尔检测股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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