一种控制何首乌特异质肝毒性的方法技术

本申请公开一种用于控制何首乌特异质肝毒性的方法，所述方法包括以下步骤：大黄素-8-O-葡萄糖苷给药剂量的确定；大黄素-8-O-葡萄糖苷溶液的制备；通过灌胃给予大鼠所述大黄素-8-O-葡萄糖苷溶液，采集血浆和肝脏标本；进行指标检测；采用SPSS软件进行统计分析。本申请还提供大黄素-8-O-葡萄糖苷在制备不引起特异质肝损伤的药物中的用途以及大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷在评价特异质肝损伤中的用途。本申请还提供大黄素-8-O-葡萄糖苷的安全含量限度以控制何首乌的肝损伤风险。的安全含量限度以控制何首乌的肝损伤风险。的安全含量限度以控制何首乌的肝损伤风险。

【技术实现步骤摘要】
一种控制何首乌特异质肝毒性的方法


[0001]本专利技术涉及药材安全与质量控制领域，具体涉及一种何首乌特异质肝毒性的安全质量控制方法。

技术介绍

[0002]何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根，临床应用有生首乌和制首乌的差异，生用燥湿、润肠通便，制用补肝肾、益精血、乌发。其临床应用广泛，传统不认为是有毒的中药。然而，近年来有关何首乌及其制剂致肝损伤事件频发，我国以及韩国、日本、英国等国家均有何首乌肝损伤相关的病例报道，其安全性问题引起了国内外广泛关注。

技术实现思路

[0003]以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。
[0004]本申请人前期通过临床病例分析，发现何首乌的肝损伤具有典型的特异质属性，其特异质属性可能与机体的炎症活化状态密切相关，并基于此建立了内毒素复制的炎症应激大鼠肝损伤评价模型。众所周知，何首乌所含化合物种类繁多，主要有二苯乙烯类、蒽醌类、黄酮类、鞣质类等。查阅文献可知，目前关于何首乌肝毒性的物质基础研究取得了一定进展，主要集中在蒽醌类和二苯乙烯类。本申请人前期通过目标组分敲出/敲入策略，在建立的免疫应激大鼠模型上筛选出何首乌提取物中产生肝毒性作用的乙酸乙酯部位，经质谱鉴定该部位主要含有反式二苯乙烯苷(TSG)和大黄素-8-O-葡萄糖苷(EG)。何首乌中含有大黄素，至于大黄素糖苷EG的肝损伤作用是否与大黄素有关，还不得而知，目前也没有相关文献报道。此外，何首乌的经典炮制理论“生用气寒，性敛，有毒；制熟气温，无毒”以及现代实验研究均表明炮制可以消除或降低何首乌的肝毒性，而炮制后TSG和EG含量均明显降低。
[0005]综上分析，EG、TSG很可能与何首乌的肝损伤相关。鉴于蒽醌类成分毒性报道较多，故本申请重点考察EG的肝损伤作用，同时也评价TSG联合EG给药的肝损伤情况。客观评价二者与何首乌特异质肝毒性的相关性，并结合临床病例分析探讨其可能的安全限度，为从物质基础角度建立何首乌肝损伤风险控制手段以及提高何首乌临床安全用药水平提供参考。
[0006]具体地，一种用于控制何首乌特异质肝毒性的方法，所述方法包括：
[0007](1)大黄素-8-O-葡萄糖苷给药剂量的确定；
[0008](2)大黄素-8-O-葡萄糖苷溶液的制备：按照大黄素-8-O-葡萄糖苷的给药剂量计算所需大黄素-8-O-葡萄糖苷的量，采用0.5％质量分数的羧甲基纤维素钠溶液溶解，4℃贮存备用；
[0009]任选地，还包括反式二苯乙烯苷溶液的制备：按照反式二苯乙烯苷的给药剂量计算所需反式二苯乙烯苷的量，采用0.5％质量分数的羧甲基纤维素钠溶液涡旋溶解，4℃贮存备用；以及
[0010]大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷的混合溶液的制备：按照大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷的给药剂量计算所需大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷的量，采用0.5％羧甲基纤维素钠溶液涡旋溶解，4℃贮存备用；
[0011](3)给予大鼠所述大黄素-8-O-葡萄糖苷溶液：
[0012]通过灌胃给予大鼠所述大黄素-8-O-葡萄糖苷溶液；
[0013]任选地，还包括给予所述反式二苯乙烯苷溶液以及大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷的混合溶液，采集血浆和肝脏标本；
[0014](4)进行指标检测检测；
[0015](5)采用SPSS软件进行统计分析。
[0016]在本申请中，在步骤(1)中，大黄素-8-O-葡萄糖苷给药剂量可以根据临床上何首乌的累积中毒剂量来计算。
[0017]在本申请中，大黄素-8-O-葡萄糖苷的给药剂量可以为8mg/kg-128mg/kg，优选地16mg/kg-64mg/kg。
[0018]在本申请中，反式二苯乙烯苷的给药剂量可以为500mg/kg。
[0019]在本申请中，大黄素-8-O-葡萄糖苷的给药剂量可以为16mg/kg-64mg/kg，反式二苯乙烯苷的给药剂量可以为500mg/kg。
[0020]在本申请中，优选地大黄素-8-O-葡萄糖苷的给药剂量可以为64mg/kg，反式二苯乙烯苷的给药剂量可以为500mg/kg。
[0021]在本申请中，所述内毒素可以为细菌脂多糖。
[0022]在本申请中，可以使用戊巴比妥钠麻醉大鼠。
[0023]在本申请中，内毒素的给药剂量可以为2.8mg/kg。
[0024]在本申请中，大黄素-8-O-葡萄糖苷的给药剂量为可以64mg/kg，反式二苯乙烯苷的给药剂量可以为500mg/kg，内毒素的给药剂量可以为2.8mg/kg。
[0025]在本申请中，所述指标检测可以包括血浆转氨酶检测、肝组织病理学检测、肝组织细胞凋亡检测和血浆炎性细胞因子检测。
[0026]在本申请中，血浆转氨酶的检测可以包括谷丙转氨酶、谷草转氨酶的检测。
[0027]在本申请中，肝组织病理学的检测可以包括采集大鼠肝组织，用通用型组织固定液固定，常规病理切片，苏木精-伊红染色法染色，在光学显微镜下观察肝组织病理学改变并采集图像。
[0028]在本申请中，肝组织细胞凋亡的检测可以包括采集大鼠肝组织，用通用型组织固定液固定，常规病理切片，荧光染色，在光学显微镜下观察肝细胞凋亡情况并采集图像，计算肝细胞凋亡率。
[0029]在本申请中，血浆炎性细胞因子的检测可以包括检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)以及白介素-10(IL-10)的含量。
[0030]在本申请中，采用SPSS软件进行统计分析，实验数据以表示，计量资料采用单因素方差分析，显著性概率水平P＜0.05或P＜0.01。
[0031]本申请还提供大黄素-8-O-葡萄糖苷在制备不引起特异质肝毒性的药物中的用途，其中，不引起特异质肝毒性的大黄素-8-O-葡萄糖苷的剂量为8-mg/kg-32mg/kg。
[0032]在本申请中，基于何首乌的总重量，大黄素-8-O-葡萄糖苷的含量可以为≤0.17％。
[0033]在本申请中，基于何首乌的总重量，大黄素-8-O-葡萄糖苷的含量可以为0.04％-0.17％。
[0034]现行中药质控成分的限量范围主要是根据数批样品量的大小分布而人为地设定，缺少药效毒理试验或临床试验支持。如20批中药中，有80％的批次成分量超过(或低于)1.0％，则往往会制定其含量不得少于(或高于)1.0％的限量规定。由于缺少药效毒理试验或临床试验支持，成分限量范围与中药安全性和有效性实际上缺乏关联。而本申请的含量限度是根据何首乌临床累积中毒剂量以及动物实验数据综合得出，与毒性关联密切。
[0035]本申请还提供大黄素-8-O-葡萄糖苷的安全含量限度以控制何首乌的肝损伤风险。
[0036]在本申请中，基于何本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于控制何首乌特异质肝毒性的方法，所述方法包括：(1)大黄素-8-O-葡萄糖苷给药剂量的确定；(2)大黄素-8-O-葡萄糖苷溶液的制备：按照大黄素-8-O-葡萄糖苷的给药剂量计算所需大黄素-8-O-葡萄糖苷的量，采用0.5％质量分数的羧甲基纤维素钠溶液溶解，4℃贮存备用；任选地，还包括反式二苯乙烯苷溶液的制备：按照反式二苯乙烯苷的给药剂量计算所需反式二苯乙烯苷的量，采用0.5％质量分数的羧甲基纤维素钠溶液涡旋溶解，4℃贮存备用；以及大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷的混合溶液的制备：按照大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷的给药剂量计算所需大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷的量，采用0.5％羧甲基纤维素钠溶液涡旋溶解，4℃贮存备用；(3)给予大鼠所述大黄素-8-O-葡萄糖苷溶液：通过灌胃给予大鼠所述大黄素-8-O-葡萄糖苷溶液；任选地，还包括给予所述反式二苯乙烯苷溶液以及大黄素-8-O-葡萄糖苷和反式二苯乙烯苷的混合溶液，采集血浆和肝脏标本；(4)进行指标检测；(5)采用SPSS软件进行统计分析。2.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤(4)中，所述指标检测包括：血浆转氨酶检测、肝组织病理学检测、肝组织细胞凋亡检测以及血浆炎性细胞因子检测。3.根据权利要求1所述的方法，其中，大黄素-8-O-葡萄糖苷的给药剂量为8mg/kg-128mg/kg，优选地16mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：马永刚，
申请(专利权)人：北京圆融科技有限公司，
类型：发明
国别省市：