用于鉴定百合倍性的微卫星DNA分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术涉及DNA分子标记技术领域，具体涉及用于鉴定百合倍性的微卫星DNA分子标记及其应用。本发明专利技术提供用于鉴定百合倍性的微卫星DNA分子标记，其包含9个微卫星DNA分子标记J1

【技术实现步骤摘要】
用于鉴定百合倍性的微卫星DNA分子标记及其应用


[0001]本专利技术涉及DNA分子标记
，具体涉及用于鉴定百合倍性的微卫星DNA分子标记及其应用。

技术介绍

[0002]百合(Lilium spp.)是单子叶植物亚纲百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)所有种类的总称，是世界著名的球根花卉，可用于切花、盆花和园林绿化，而且药用和食用历史十分悠久。
[0003]百合育种有一百多年的历史，几乎每年都有新品种不断涌现出。百合育种的亲本材料除野生资源外，大量的栽培品种成为主要的亲本材料。国际上通行的百合品种分类主要釆用英国皇家园艺学会(Royal Horticultural Society，RHS)和北美百合学会(North American Lily Society，NALS)指定的分类系统，即根据百合不同栽培品种与其原始亲缘种或杂种的遗传衍生关系、花色、花型、姿态特征等进行分类(龙雅宜,张金政.百合属植物资源的保护与利用[J].植物资源与环境,1998(01):40-44.)。目前百合主要的现代栽培品种群如下：亚洲百合杂种系(Asiatic Hybrids，简称A)、东方百合杂种系(Oriental Hybrids，简称O)、麝香百合杂种系(Longiflorum Hybrids，简称L)、喇叭杂种系(Trumpet and Aurelian Hybrids，简称T)、纯白百合杂种系(Candidum Hybrids)、美洲百合杂种系(American Hybrids)、轮叶百合杂种系(Martagon Hybrids)、其他杂种系[如麝亚百合杂种系(Longiflorum Asiatic Hybrids，简称LA)、东喇百合杂种系OT、麝东百合杂种系LO等]。
[0004]现代百合商业品种中，各杂种系多起源于组内杂交，亚洲百合杂种系(A)来自于卷瓣组(Sinomartagon)，东方百合杂种系来自于具叶柄组(Archelirion)，麝香百合杂种系来自于喇叭组(Leucolirion)，除了亚百系列部分品种为三倍体或四倍体(Zhou S J.Aneuploidy in Lily Breeding[J].Acta Horticulturae.2014,(1027):149-154.)，这些品种大多为二倍体。近年来，LA(亚洲百合
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麝香百合)、LO(麝香百合
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东方百合)、OT(东方百合
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喇叭百合)等组间杂种系越来越受市场青睐，这些杂种多是通过远缘杂交、以及F1加倍或2n配子的诱导后再反复杂交获得的，致使品种的倍性多样。现有研究表明，LA杂种系主要为三倍体(李克虎,周桂雪,任桂玲,张线线,郭方其,周树军.百合品种染色体倍性观察[J].园艺学报.2011,38(5):970-976；霍辰思,白锦荣,窦晓莹,郎利新,孔滢,尚宏忠.8个LA百合品种的核型分析[J].山西农业大学学报(自然科学版).2018,38(3):57-62.)；LO品种现有少数报道为三倍体(李克虎,周桂雪,任桂玲,张线线,郭方其,周树军.百合品种染色体倍性观察[J].园艺学报.2011,38(5):970-976；Van Tuyl J M,Arens P.Lilium:Breeding history of the modern cultivar assortment[J].Acta horticulturae.2011,900.)；OT百合既有二倍体、三倍体也有四倍体(Emsweller S L,Uhring J.Lilium
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'Black Beauty'—diploid and amphidiploid[J].Lily Year Book.1966,29:45-47.；李克虎,周桂雪,任桂玲,张线线,郭方其,周树军.百合品种染色体倍性观察[J].园艺学报.2011,38(5):970-976；周桂雪.亚洲百合品种倍性调查与倍性间杂交分析[D].浙江大学硕士学位论
文,2011；于雪,张铭芳,封紫,袁晓娜,贾桂霞.6个东方百合品种的染色体核型分析[J].广东农业科学.2012,10:137-144.；)。因此，百合品种的倍性鉴定已成为目前百合育种首要解决的关键问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种用于鉴定百合倍性的微卫星DNA(SSR)分子标记，本专利技术的另一目的是提供该微卫星DNA分子标记的应用。
[0006]为实现上述目的，本专利技术通过对多个品种的百合进行转录组测序，以转录组测序得到的序列为参考，对拼接组装得到的Unigenes进行SSR位点的识别定位；对筛选得到的含SSR位点的Unigene序列设计引物，保证SSR位点侧翼序列长度≥50bp；进一步对设计得到的引物进行排序和比较，从两万多对引物中，筛选得到151对多态性高的引物。利用15个不同品种的百合对筛选得到的151对引物进行进一步筛选，使用Touchdown PCR程序初筛，共筛选得到69对引物，合成含M13接头的引物，进一步复筛，复筛主要利用两步法PCR程序，最终选择了43对多态性较高、较稳定的核心引物进行后续试验。利用筛选得到的43对核心引物、以290个百合不同品种及野生种的基因组DNA为模板进行SSR-PCR扩增，筛选得到条带清晰、较稳定、多态性高、可用于百合倍性鉴定的微卫星标记9个，其编号分别为J1-044、J2-080、J3-091、J4-094、J5-096、J6-098、J7-117、J8-123、J9-167，其引物序列分别如SEQ ID NO.1-18所示。
[0007]基于上述发现，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供用于鉴定百合倍性的微卫星DNA分子标记，其包含微卫星DNA分子标记J1-044、J2-080、J3-091、J4-094、J5-096、J6-098、J7-117、J8-123、J9-167中的一个或多个的组合；其中，J1-044由SEQ ID NO.1-2所示引物扩增得到，J2-080由SEQ ID NO.3-4所示引物扩增得到，J3-091由SEQ ID NO.5-6所示引物扩增得到，J4-094由SEQ ID NO.7-8所示引物扩增得到，J5-096由SEQ ID NO.9-10所示引物扩增得到，J6-098由SEQ ID NO.11-12所示引物扩增得到，J7-117由SEQ ID NO.13-14所示引物扩增得到，J8-123由SEQ ID NO.15-16所示引物扩增得到，J9-167由SEQ ID NO.17-18所示引物扩增得到。
[0009]以上所述的引物序列具体如下：
[0010]SEQ ID NO.1：J1-044F:5'-CAGTATAATTAGTGACGTGCCTGG-3'
[0011]SEQ ID NO.2：J1-044R:5'-TCAATACTCTCACAATCCTCCAAA-3'
[0012]SEQ ID NO.3：J2-080F:5'-GGAG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于鉴定百合倍性的微卫星DNA分子标记，其特征在于，其包含微卫星DNA分子标记J1-044、J2-080、J3-091、J4-094、J5-096、J6-098、J7-117、J8-123、J9-167中的一个或多个的组合；其中，J1-044由SEQ ID NO.1-2所示引物扩增得到，J2-080由SEQ ID NO.3-4所示引物扩增得到，J3-091由SEQ ID NO.5-6所示引物扩增得到，J4-094由SEQ ID NO.7-8所示引物扩增得到，J5-096由SEQ ID NO.9-10所示引物扩增得到，J6-098由SEQ ID NO.11-12所示引物扩增得到，J7-117由SEQ ID NO.13-14所示引物扩增得到，J8-123由SEQ ID NO.15-16所示引物扩增得到，J9-167由SEQ ID NO.17-18所示引物扩增得到。2.根据权利要求1所述的微卫星DNA分子标记，其特征在于，其包含J1-044、J2-080、J3-091、J4-094、J5-096、J6-098、J7-117、J8-123和J9-167。3.用于扩增权利要求1或2所述的微卫星DNA分子标记的引物或引物组合，其特征在于，其为选自SEQ ID NO.1-18所...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾桂霞，周艳萍，李介文，汪莲娟，余鹏程，何恒斌，高雪，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：