鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的特异性引物和探针、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的特异性引物、探针及试剂盒，并提供了一种基于非标记探针高分辨率熔解曲线的呼伦贝尔短尾羊群体中纯合子、杂合子个体的鉴定方法。通过设计的非标记探针放大了纯合子和杂合子之间熔解曲线Tm值信号差异，取代传统测序，作为呼伦贝尔短尾羊基因分型的手段之一。本发明专利技术的鉴定方法操作简便，反应时间短，具有极高的灵敏性和特异性，可检测出呼伦贝尔羊群体中纯合子、杂合子个体。杂合子个体。杂合子个体。

【技术实现步骤摘要】
鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的特异性引物和探针、试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的特异性引物和探针、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]呼伦贝尔短尾羊是生长在我国呼伦贝尔地区的肉用绵羊品种之一，短而肥厚的尾部是该品系独特的标志。我们利用基因组重测序技术筛选到与脊椎发育相关的T/Brachyury基因作为候选基因，并确定在呼伦贝尔短尾羊群体中存在稳定T/Brachyury基因c.G334T突变，并证明与“短尾”这一具有经济价值的性状相关。在绵羊分子育种中，纯合子个体相对于杂合子后代性状表现稳定，因而近年来，人们更倾向于筛选种群中纯合个体作为主要的繁育对象。
[0003]传统测序主要以sanger测序法、Taqman探针基因分型鉴定为基础，与具有商业价值相关性状的SNP位点关联作为依据，Sanger法是根据化学试剂处理末段DNA片段，造成碱基的特异性切割，产生一组具有各种不同长度的DNA链的反应混合物，经凝胶电泳分离。化学切割反应：包括碱基的修饰：碱基从其糖环上转本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的特异性引物和探针，其特征是，序列如下：上游引物：5
’-
TGCGCCCCTTCCTTTTCAG-3
’
下游引物：5
’-
GGGGGAGTCGGGGTGGATGTAG-3
’
探针：5
’-
GCTTGCCCCAGGGCACCCA-C3 Spacer-3
’
。2.根据权利要求1所述的特异性引物和探针，其特征在于，所述探针为非标记探针，3
’
端用C3 Spacer封闭。3.一种鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的试剂盒，包括权利要求1或2所述的特异性引物及探针，其特征在于，还包括如下成分：PCR反应混合液，呼伦贝尔短尾羊基因组DNA，呼伦贝尔短尾羊T/Brachyury基因纯合子、杂合子所制备的标准品质粒。4.根据权利要求3所述的一种鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应混合液包括HRM AnaiysisPreMix（2X）及RNase-Free ddH2O。5.一种鉴定呼伦贝尔短尾羊纯合子、杂合子的方法，包括如下步骤，其特征在于，所述荧光定量PCR反应体系包括权利要求1或2所述的特异性引物和探针：(a)提取待测呼伦贝尔短尾羊血液基因组DNA样品；(b)荧光定量PCR反应体系扩增呼伦贝尔短尾羊Brachyury/T基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹贵方，杨光，宋永利，窦傲蕾，马腾，智达夫，苏红，刘默凝，杨宏新，霍雨佳，李喜和，何亭漪，杨燕燕，达来，李秀男，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：