用于肿瘤特异性T细胞免疫疗法的IL-13受体α2(IL13RA2)嵌合抗原受体制造技术

本文提供的方法和组合物的一些实施方式涉及特异性结合至IL‑13α2(IL13Ra2)受体的人细胞外结构域的嵌合抗原受体(CAR)、包含此类CAR的细胞、以及靶向癌细胞(例如实体瘤的细胞)的基于细胞的免疫疗法的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于肿瘤特异性T细胞免疫疗法的IL-13受体α2(IL13RA2)嵌合抗原受体相关申请的交叉引用本申请要求2018年3月14日提交的名称为“IL-13RECEPTORALPHA2(IL13RA2)CHIMERICANTIGENRECEPTORFORTUMORSPECIFICTCELLIMMUNOTHERAPY”的美国临时申请No.62/643055的优先权，将其以引用的方式在此明确地整体并入。序列表的引用本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表作为名称为SCRI169WOSEQLIST的文件提供，创建于2019年3月12日，大小约为62Kb。以引用的方式将序列表的电子格式中的信息明确地整体并入本文。
本文提供的方法和组合物的一些实施方式涉及特异性结合IL-13α2(IL13Ra2)受体的人细胞外结构域的嵌合抗原受体(CAR)、包含此类CAR的细胞、以及靶向癌细胞(例如实体瘤的细胞)的基于细胞的免疫疗法的方法。
技术介绍
尽管在对脑癌的了解方面有了显著的进步，但在过去十年中，死亡率保持稳定，并且迫切需要新的创新疗法。迄今为止，T细胞免疫疗法已成为有前途的癌症疗法，报告了患B细胞恶性肿瘤的患者在给予了靶向CD19的T细胞CAR后得到完全缓解的卓越的临床数据对此予以了支持。然而，仍然需要进一步和改进的T细胞免疫疗法。
技术实现思路
本文提供的方法和组合物的一些实施方式包括编码嵌合抗原受体的核酸，所述嵌合抗原受体包含：结合IL-13α2(IL13Rα2)受体和/或与IL-13α2(IL13Rα2)受体相互作用的配体结合结构域；配体结合结构域和跨膜结构域之间的多肽间隔区；跨膜结构域；和细胞内信号转导区。在一些实施方式中，配体结合结构域包含：具有氨基酸序列SEQIDNO：20的重链互补决定区1(CDR1)，或其保守变异体；具有氨基酸序列SEQIDNO：21的重链互补决定区2(CDR2)，或其保守变异体；和/或具有氨基酸序列SEQIDNO：22的重链互补决定区3(CDR3)，或其保守变异体。在一些实施方式中，配体结合结构域包含：具有氨基酸序列SEQIDNO：23的轻链互补决定区1(CDR1)，或其保守变异体；具有氨基酸序列SEQIDNO：24的轻链互补决定区2(CDR2)，或其保守变异体；和/或具有氨基酸序列SEQIDNO：25的轻链互补决定区3(CDR3)，或其保守变异体。在一些实施方式中，配体结合结构域包含重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含与氨基酸序列SEQIDNO：18具有至少90％同一性的多肽。在一些实施方式中，配体结合结构域包含轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含与氨基酸序列SEQIDNO：19具有至少90％同一性的多肽。在一些实施方式中，其中，配体结合结构域包含：具有氨基酸序列SEQIDNO：20的重链CDR1；具有氨基酸序列SEQIDNO：21的重链CDR2；和/或具有氨基酸序列SEQIDNO：22的重链CDR3。在一些实施方式中，配体结合结构域包含：具有氨基酸序列SEQIDNO：23的轻链CDR1；具有氨基酸序列SEQIDNO：24的轻链CDR2；和/或具有氨基酸序列SEQIDNO：25的轻链CDR3。在一些实施方式中，配体结合结构域包含VH结构域，所述VH结构域包含具有氨基酸序列SEQIDNO：18的多肽。在一些实施方式中，配体结合结构域包含具有氨基酸序列SEQIDNO：19的VL结构域。在一些实施方式中，配体结合结构域是抗体片段，例如抗原结合片段。在一些实施方式中，配体结合结构域是单链可变片段(scFv)。在一些实施方式中，scFv包含VL-VH取向(orientation)。在一些实施方式中，单链可变片段(scFv)包含与核苷酸序列SEQIDNO：61具有至少95％同一性的序列。在一些实施方式中，单链可变片段(scFv)包含核苷酸序列SEQIDNO：61。在一些实施方式中，间隔区包含氨基酸序列X1PPX2P。在一些实施方式中，间隔区域(spacerregion)包含人抗体的铰链区的一部分，或其修饰变体。在一些实施方式中，间隔区为15个氨基酸以下，但不小于1个或2个氨基酸。在一些实施方式中，间隔区包含与氨基酸序列SEQIDNO：09具有至少95％同一性的序列，由与氨基酸序列SEQIDNO：09具有至少95％同一性的序列组成，或基本上由与氨基酸序列SEQIDNO：09具有至少95％同一性的序列组成。在一些实施方式中，间隔区包含氨基酸序列SEQIDNO：09或其保守置换物(substitutions)，由氨基酸序列SEQIDNO：09或其保守置换物组成，或基本上由氨基酸序列SEQIDNO：09或其保守置换物组成。在一些实施方式中，间隔区包含IgG4铰链间隔区(S)，由IgG4铰链间隔区(S)组成，或基本上由IgG4铰链间隔区(S)组成。在一些实施方式中，间隔区包含IgG4铰链-CH3间隔区(M)，由IgG4铰链-CH3间隔区(M)组成，或基本上由IgG4铰链-CH3间隔区(M)组成。在一些实施方式中，间隔区包含IgG4铰链-CH2(L234D、N297A)-CHE间隔区(L)，由IgG4铰链-CH2(L234D、N297A)-CHE间隔区(L)组成，或基本上由IgG4铰链-CH2(L234D、N297A)-CHE间隔区(L)组成。在一些实施方式中，细胞内信号转导区包含初级信号转导结构域和共刺激信号转导结构域，任选地包含CD3ζ的全部或部分与共刺激结构域的组合，所述共刺激结构域选自于如下信号转导结构域所组成的组：CD27、CD28、4-1BB、OX-40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、NKG2C和B7-H3，以及它们的组合。在一些实施方式中，细胞内信号转导区域包含CD3ζ的信号转导部分和4-1BB的信号转导部分。在一些实施方式中，跨膜结构域包括CD28跨膜结构域(CD28tm)。一些实施方式还包括编码标志物序列的核酸。在一些实施方式中，标志物序列为截短的受体，并且任选地是EGFRt、HER2t或CD19t。一些实施方式还包括配置用于甲氨蝶呤选择的二氢叶酸还原酶转基因。在一些实施方式中，二氢叶酸还原酶转基因为二氢叶酸还原酶双突变体(DHFRdm)。在一些实施方式中，二氢叶酸还原酶双突变体包含氨基酸突变L22F和F31S。本文提供的方法和组合物的一些实施方式包括表达载体，所述表达载体包含本文提供的任一实施方式中的核酸。在一些实施方式中，载体为病毒载体。在一些实施方式中，载体为慢病毒或腺病毒载体。本文提供的方法和组合物的一些实施方式包括由本文提供的任一实施方式的核酸编码的嵌合抗原受体(CAR)多肽。本文提供的方法和组合物的一些实施方式包括宿主细胞，所述宿主细胞包含本文提供的任一实施方式所述的核酸。在一些实施方式中，宿主细胞为CD8+T细胞毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种编码嵌合抗原受体的核酸，所述嵌合抗原受体包含：/n配体结合结构域，所述配体结合结构域结合至IL-13α2(IL13Rα2)受体和/或与IL-13α2(IL13Rα2)受体相互作用；/n多肽间隔区，所述多肽间隔区位于所述配体结合结构域和跨膜结构域之间；/n所述跨膜结构域；以及/n细胞内信号转导区。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180314 US 62/643,0551.一种编码嵌合抗原受体的核酸，所述嵌合抗原受体包含：
配体结合结构域，所述配体结合结构域结合至IL-13α2(IL13Rα2)受体和/或与IL-13α2(IL13Rα2)受体相互作用；
多肽间隔区，所述多肽间隔区位于所述配体结合结构域和跨膜结构域之间；
所述跨膜结构域；以及
细胞内信号转导区。


2.如权利要求1所述的核酸，其中，所述配体结合结构域包含：
重链互补决定区1(CDR1)或其保守变异体，所述重链互补决定区1具有氨基酸序列SEQIDNO：20；
重链互补决定区2(CDR2)或其保守变异体，所述重链互补决定区2具有氨基酸序列SEQIDNO：21；和/或
重链互补决定区3(CDR3)或其保守变异体，所述重链互补决定区3具有氨基酸序列SEQIDNO：22。


3.如权利要求1或2所述的核酸，其中，所述配体结合结构域包含：
轻链互补决定区1(CDR1)或其保守变异体，所述轻链互补决定区1具有氨基酸序列SEQIDNO：23；
轻链互补决定区2(CDR2)或其保守变异体，所述轻链互补决定区2具有氨基酸序列SEQIDNO：24；和/或
轻链互补决定区3(CDR3)或其保守变异体，所述轻链互补决定区3具有氨基酸序列SEQIDNO：25。


4.如权利要求1-3中任一项所述的核酸，其中，所述配体结合结构域包含重链可变(VH)结构域，所述重链可变结构域包含与氨基酸序列SEQIDNO：18具有至少90％同一性的多肽。


5.如权利要求1-4中任一项所述的核酸，其中，所述配体结合结构域包含轻链可变(VL)结构域，所述轻链可变结构域包含与氨基酸序列SEQIDNO：19具有至少90％同一性的多肽。


6.如权利要求1-5中任一项所述的核酸，其中，所述配体结合结构域包含：
具有氨基酸序列SEQIDNO：20的重链CDR1；
具有氨基酸序列SEQIDNO：21的重链CDR2；和/或
具有氨基酸序列SEQIDNO：22的重链CDR3。


7.如权利要求1-6中任一项所述的核酸，其中，所述配体结合结构域包含：
具有氨基酸序列SEQIDNO：23的轻链CDR1；
具有氨基酸序列SEQIDNO：24的轻链CDR2；和/或
具有氨基酸序列SEQIDNO：25的轻链CDR3。


8.如权利要求1-7中任一项所述的核酸，其中，所述配体结合结构域包含VH结构域，所述VH结构域包含具有氨基酸序列SEQIDNO：18的多肽。


9.如权利要求1-8中任一项所述的核酸，其中，所述配体结合结构域包含具有氨基酸序列SEQIDNO：19的VL结构域。


10.如权利要求1-9中任一项所述的核酸，其中，所述配体结合结构域是抗体片段，例如抗原结合片段。


11.如权利要求1-10中任一项所述的核酸，其中，所述配体结合结构域是单链可变片段(scFv)。


12.如权利要求1-11中任一项所述的核酸，其中，所述scFv包含VL-VH取向。


13.如权利要求1-12中任一项所述的核酸，其中，所述单链可变片段(scFv)包含与核苷酸序列SEQIDNO：61具有至少95％同一性的序列。


14.如权利要求1-13中任一项所述的核酸，其中，所述单链可变片段(scFv)包含核苷酸序列SEQIDNO：61。


15.如权利要求1-14中任一项所述的核酸，其中，所述间隔区包含氨基酸序列X1PPX2P。


16.如权利要求1-15中任一项所述的核酸，其中，所述间隔区域包括人抗体的铰链区的一部分，或其修饰变体。


17.如权利要求1-16中任一项所述的核酸，其中，所述间隔区为15个氨基酸或更少，但不少于1个或2个氨基酸。


18.如权利要求1-17中任一项所述的核酸，其中，所述间隔区包含与氨基酸序列SEQIDNO：09具有至少95％同一性的序列、由与氨基酸序列SEQIDNO：09具有至少95％同一性的序列组成或基本上由与氨基酸序列SEQIDNO：09具有至少95％同一性的序列组成。


19.如权利要求1-18中任一项所述的核酸，其中，所述间隔区包含氨基酸序列SEQIDNO：09或其保守置换物、由氨基酸序列SEQIDNO：09或其保守置换物组成或基本上由氨基酸序列SEQIDNO：09或其保守置换物组成。


20.如权利要求1-19中任一项所述的核酸，其中，所述间隔区包含IgG4铰链间隔区(S)、由IgG4铰链间隔区(S)组成或基本上由IgG4铰链间隔区(S)组成。


21.如权利要求1-20中任一项所述的核酸，其中，所述间隔区包含IgG4铰链-CH3间隔区(M)、由IgG4铰链-CH3间隔区(M)组成或基本上由IgG4铰链-CH3间隔区(M)组成。


22.如权利要求1-21中任一项所述的核酸，其中，所述间隔区包含IgG4铰链-CH2(L234D、N297A)-CHE间隔区(L)、由IgG4铰链-CH2(L234D、N297A)-CHE间隔区(L)组成或基本上由IgG4铰链-CH2(L234D、N297A)-CHE间隔区(L)组成。


23.如权利要求1-22中任一项所述的核酸，其中，所述细胞内信号转导区包含初级信号转导结构域和共刺激信号转导结构域，任选地包含CD3ζ的全部或部分与共刺激结构域的组合，所述共刺激结构域选自于由以下信号转导结构域所组成的组：CD27、CD28、4-1BB、OX-40、CD30、CD40、PD-1、ICOS、LFA-1、CD2、CD7、NKG2C和B7-H3，以及它们的组合。


24.如权利要求23所述的核酸，其中，所述细胞内信号转导区包含CD3ζ的信号转导部分和4-1BB的信号转导部分。


25.如权利要求1-24中任一项所述的核酸，其中，所述跨膜结构域包括CD28跨膜结构域(CD28tm)。


26.如权利要求1-25中任一项所述的核酸，所述核酸进一步包含编码标志物序列的核酸。


27.如权利要求26所述的核酸，其中，所述标志物...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾科莫·坦佩拉，迈克尔·C·延森，
申请(专利权)人：西雅图儿童医院DBA西雅图儿童研究所，
类型：发明
国别省市：美国;US