CLIC4在制备放射治疗鼻咽癌制剂中的应用制造技术

本发明专利技术为CLIC4在制备放射治疗鼻咽癌制剂中的应用，属于生物医学技术领域，涉及CLIC4作为蛋白标志物在制备预测鼻咽癌光子辐射耐受制剂中应用；本发明专利技术运用细胞存活克隆形成实验检测辐射耐受细胞与敏感细胞在细胞不同光子剂量下的存活能力差异，结果显示，相同剂量下，鼻咽癌辐射耐受细胞的克隆形成能力显著强于辐射敏感细胞，即鼻咽癌辐射耐受细胞辐射敏感性低。所述的CLIC4可作为蛋白标志物制备预测鼻咽癌光子辐射耐受制剂，以及制备判断鼻咽癌放疗预后情况制品和制备抑制鼻咽癌细胞辐射耐受药物和用于筛选增加肿瘤细胞辐射敏感性的潜在药物。

【技术实现步骤摘要】
CLIC4在制备放射治疗鼻咽癌制剂中的应用
本专利技术涉及生物医学
，涉及CLIC4作为蛋白标志物的新用途，具体涉及CLIC4作为蛋白标志物在制备预测鼻咽癌光子辐射耐受制剂中应用；尤其涉及CLIC4的表达用于制备在鼻咽癌光子辐射敏感性差异以及其在鼻咽癌放疗效果预测和治疗制品中的应用。
技术介绍
现有技术公开了鼻咽癌是发生在鼻咽侧壁和顶部的恶性肿瘤，发病率在耳鼻咽喉恶性肿瘤中居于第一位，临床研究显示，鼻咽癌主要好发于东南亚,特别是中国华南地区。实践显示，放射治疗是治疗鼻咽癌的首选方法之一。随着科学技术的进步，立体定向放疗技术的应用越来越广泛，据统计，早期鼻咽癌的放疗后5年生存率达到了90％多，晚期生存率也达到了70％多，但遗憾的是，放疗耐受会导致治疗效果差和早期复发，因此，寻找鼻咽癌产生光子耐受的基因/蛋白对今后鼻咽癌治疗的发展具有非常重要的实践指导意义。近年来，随着经济的发展和科技的进步，TMT(TandemMassTag)差异蛋白质组学定量分析技术应用越来越广泛。本专利技术的研究退队通过将TMT标记、高效液相色谱分级技术以及基于质谱的定量蛋白质组学技术等一系列前沿技术的有机结合，对有关样本进行定量蛋白组的研究，之后对包含定量信息的蛋白质进行了系统的生物信息学分析，包括蛋白注释、功能分类、功能富集及基于功能富集的聚类分析，并综合以上信息，结合临床基因芯片筛选出可能的辐射敏感性差异相关的分子标志物，将为今后鼻咽癌预后相关标志物的研究提供理论基础和科学依据。本专利技术通过质谱结果筛选出在鼻咽癌辐射耐受细胞株与辐射敏感细胞株中差异表达的基因，显示CLIC4在鼻咽癌辐射耐受株细胞中的表达明显高于鼻咽癌辐射敏感株细胞中的表达，检索Pubmed及相关数据库发现，CLIC4在鼻咽癌辐射敏感性中的功能未见报道。基于现有技术的基础与现状，本申请的专利技术人拟提供CLIC4作为蛋白标志物的新用途，具体涉及CLIC4作为蛋白标志物在制备预测鼻咽癌光子辐射耐受制剂中应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是基于现有技术的基础与现状，提供CLIC4作为蛋白标志物的新用途，具体涉及CLIC4作为蛋白标志物在制备预测鼻咽癌光子辐射耐受制剂中应用。本专利技术通过质谱结果筛选出在鼻咽癌辐射耐受细胞株与辐射敏感细胞株中差异表达的基因CLIC4，结果显示CLIC4在鼻咽癌辐射耐受株细胞中的表达明显高于鼻咽癌辐射敏感株细胞中的表达。更具体的，本专利技术取待测样本，然后分析比较待测样本与正常对照中CLIC4的表达量，CLIC4的表达量越高，鼻咽癌细胞的光子辐射敏感性越差，耐受性越强。本专利技术中，所述的待测样本可以是细胞样本，组织样本，或者细胞、组织的蛋白抽提物；正常对照可以是正常人的样本，较好的是取自患者本人肿瘤组织周边的组织或者细胞样本；检测时，通常采用相关抗体等检测样本中CLIC4含量；实验结果用三次独立实验的平均值和标准差表示，用双侧t检验来比较差异；p＜0.01认为具有统计学差异；所有数据采用SPSSV13.0软件或者具备类似统计功能的软件分析。本专利技术的CLIC4是细胞内氯离子通道蛋白，其序列及相关信息可以参考Genbank数据库。本专利技术进行了实验，其中，先对鼻咽癌细胞系(即鼻咽癌辐射敏感株CNE-1,CNE-2)进行γ射线照射，分割照射累计剂量至60Gy，建立辐射耐受株(CNE-1R,CNE-2R)；接着利用TMT技术，分析鼻咽癌辐射耐受株与辐射敏感株中的差异蛋白，结果显示CLIC4在鼻咽癌辐射耐受株中的表达高于辐射敏感株；其次，结合临床基因芯片，验证CLIC4在鼻咽癌放疗抵抗样本组中的表达显著高于放疗敏感样本组；本专利技术中，在细胞水平，证实CLIC4在鼻咽癌辐射耐受株中的表达高于辐射敏感株，结果表明，本专利技术的CLIC4可作为蛋白标志物用于制备预测鼻咽癌光子辐射敏感性的制剂。本专利技术中，运用细胞存活克隆形成实验检测辐射耐受细胞与敏感细胞在细胞不同光子剂量下的存活能力差异，结果显示，相同剂量下，鼻咽癌辐射耐受细胞的克隆形成能力显著强于辐射敏感细胞，即鼻咽癌辐射耐受细胞辐射敏感性低。本专利技术中，运用qRT-PCR和westernblot技术对鼻咽癌辐射耐受细胞与敏感细胞中CLIC4的表达进行检测，结果显示，鼻咽癌辐射耐受细胞中的CLIC4的mRNA和蛋白水平均明显高于辐射敏感细胞。本专利技术中，运用shRNA显著下调鼻咽癌辐射耐受细胞和辐射敏感细胞中的CLIC4，结果显示，CLIC4下调后细胞株的辐射敏感性均提高。本专利技术还提供了CLIC4在制备抑制鼻咽癌细胞辐射耐受制品中的应用，所述的CLIC4可以作为筛选鼻咽癌细胞辐射耐受药物的药靶；降低CLIC4表达量的物质可作为抑制肿瘤细胞侵袭药物的候选药物。本专利技术同时提供了IAA94(Indanyloxyaceticacid94，R(+)-IAA-94)是一类潜在的氯离子通道蛋白抑制剂，可以抑制CLIC4及其同家族氯离子蛋白的表达，进一步可以制备作为临床鼻咽癌放疗时增加肿瘤细胞辐射敏感性的潜在药物。本专利技术运用了ROS荧光探针检测技术对CLIC4表达发生改变时细胞内ROS的改变进行检测，结果显示，CLIC4高表达细胞在受到辐射后ROS的水平上升较弱，反之，敲低细胞内CLIC4后，细胞在受到辐射后ROS的水平明显上调，表明CLIC4通过抑制细胞内ROS水平促进细胞辐射耐受，进一步，本专利技术的CLIC4可以制备作为筛选鼻咽癌辐射增敏的药物的药靶。本专利技术提供CLIC4作为蛋白标志物的新用途，尤其CLIC4作为蛋白标志物在制备预测鼻咽癌光子辐射耐受制剂中应用。本专利技术通过质谱结果筛选出在鼻咽癌辐射耐受细胞株与辐射敏感细胞株中差异表达的基因CLIC4，经试验，结果显示CLIC4在鼻咽癌辐射耐受株细胞中的表达明显高于鼻咽癌辐射敏感株细胞中的表达。进一步，所述的CLIC4可作为蛋白标志物用于制备预测鼻咽癌光子辐射敏感性的制剂，以及采用降低CLIC4表达量的物质用于制备抑制肿瘤细胞侵袭药物的候选药物，和，所述的CLIC4可以制备作为筛选鼻咽癌辐射增敏的药物的药靶。本专利技术的实施例中以鼻咽癌细胞为模型，但是，本专利技术也可以应用于其他一些肿瘤，。因此CLIC4的特性及其与胞内ROS代谢通路作用的分子机制可以为肿瘤辐射抵抗的基础研究和辐射增敏药物的研发提供新的思路。附图说明图1显示克隆形成实验说明gamma射线0、2、4、6Gy照射下，鼻咽癌辐射耐受株(CNE-1R、CNE-2R)与辐射敏感株(CNE-1、CNE-2)的剂量存活曲线。图2显示qRT-PCR结果中的CLIC4在CNE-1R、CNE-2R和CNE-1、CNE-2中的相对表达。图3显示蛋白印迹实验结果中的CLIC4在CNE-1R、CNE-2R和CNE-1、CNE-2中的表达。图4显示qRT-PCR结果中的CNE-1R、CNE-2R和CNE-1、CNE-2细胞受到光子照射(4Gy)后，CLIC4的相对表达情况。图5显示shRNA干扰后，qRT-PCR结果中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CLIC4作为蛋白标志物在制备预测鼻咽癌光子辐射耐受制剂中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.CLIC4作为蛋白标志物在制备预测鼻咽癌光子辐射耐受制剂中的用途。


2.CLIC4在制备判断鼻咽癌放疗预后情况制品中的应用。


3.CLIC4在制备抑制鼻咽癌细胞辐射耐受药物中的应用，其中，所述的CLIC4作为筛选鼻咽癌细胞辐射耐受药物的药靶。
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【专利技术属性】
技术研发人员：邵春林，朱琳，陈倩萍，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31