抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法技术

本发明专利技术涉及一种抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，具体包括以下步骤：S1抗体标准品或样品的抗原中和当量的确定：将已知纯度和浓度的抗原用基质进行梯度稀释，向每个不同浓度的梯度稀释液中分别加入等量的抗体标准品或含有抗体的样品，反应后，用第一抗体检测试剂对每个混合液进行抗体检测确定抗体标准品或样品的抗原中和当量；S2样品的抗体滴度的确定：将步骤S1中含有抗体的样品用基质进行梯度稀释，用第二抗体检测试剂对每个稀释度的梯度稀释液进行抗体检测确定抗体滴度；S3抗体检测试剂最低检出限的获得：将确定的样品的抗原中和当量与确定的样品的抗体滴度进行相乘计算，获得第二抗体检测试剂的最低检出限。

【技术实现步骤摘要】
抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法
本专利技术涉及医学检测
，尤其涉及一种抗体标准品的赋值以及抗体检测试剂最低检出限的确定的方法。
技术介绍
体外诊断（InVitroDiagnosis,IVD）医疗器械是通过对人体的样品（血液、体液、组织等）进行检测而获取临床诊断信息的产品，包括试剂、校准品、控制物质、设备或系统。诊断试剂是检测患者是否患病和病情程度的基本工具之一，其结果是否准确直接影响到医生的诊断以及患者的身体健康和生命安全。而随着现代医学科技的进步，对于医学检验的结果提出了更加精准的要求，从而对体外诊断产品的质量要求也越来越高。标准物质（如国际标准、国家标准、企业标准和临床应用的校准品等）的制备及其量值溯源是获得精准测定结果的前提条件。由于抗体的储存稳定性差，即使深低温保存亦会随着保存时间的延长，而活性逐渐降低；而且，抗体的活性多用相对的稀释滴度表示，很难客观精准量化。因此，各种抗体的标准品或参考物质的制备十分困难。目前国内外均缺乏有关抗体标准品的商品供应，给抗体检测试剂的生产和应用带来了许多难以克服的困难。另一方面，抗体检测试剂的一个重要的性能参数是检出限。检出限是指生物样品按照分析方法的要求进行处理并检测，能区分于噪声的以特定置信水平报告被测量存在的最低值，它也被用来指最小可检测浓度，可见检出限也是一个量化指标。由于缺乏抗体的标准品，抗体检测试剂的最低检出限也无从精准确定。因此，有必要开发一种能够准确定量抗体的方法。虽然抗体的活性不稳定，但是和抗体对应的抗原通常比较稳定，而且可以准确定量。利用抗原可以和抗体发生中和反应（中和反应是抗原决定簇和抗体识别端Fab的反应），可根据抗体需要多少抗原来中和其活性来定量抗体活性，也就是给抗体赋值。我们把单位体积基质（如血清）中的抗体需要多少相应的抗原来中和称作抗体的“抗原中和当量（NeutralizedAntigenEquivalent，NAE）”。用抗原中和当量的大小来定量抗体的多少，抗体的抗原中和当量越大表示在单位体积基质中的抗体越多。借此，我们就可以定量抗体，给抗体标准物质赋值，确定抗体检测试剂的最低检出限。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是，提供一种抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，此方法能解决目前市面上抗体检测试剂最低检出限不能定值或定值不准确的问题，也可以作为抗体标准品活性的赋值方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：该抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，具体包括以下步骤：S1抗体标准品或样品的抗原中和当量的确定：将已知纯度和浓度的抗原用基质进行梯度稀释，获得多个不同浓度的梯度稀释液；向每个不同浓度的梯度稀释液中分别加入等量的抗体标准品或含有抗体的样品，反应后，用第一抗体检测试剂对每个混合液进行抗体检测，从而确定抗体标准品或样品的抗原中和当量；所述步骤S1抗体标准品或样品的抗原中和当量的确定的方法即是一定体积中抗体量的赋值方法。其中一定体积中抗体标准品或样品中抗体的抗原中和当量的计量单位以其中抗体可中和抗原的质量-体积浓度表示，为了特别明确质量-体积单位中的质量数是相应中和抗原的量，故而在质量单位后面加上“NAE”如：1ngNAE/mL、1μgNAE/mL、1mgNAE/mL等。基质，指标本中除分析物以外的一切成分。以血清胆固醇（Chol）测定而言，就是指Chol以外血清中的一切成分。由于抗原或抗体一般存在于血清中，所以本专利技术的基质具体指“已知纯度和浓度的抗原”中除了“抗原”之外的血清成分（或稀释用缓冲液成分）；以及“抗体标准品或含有抗体的样品”中除了“抗体标准品”与“抗体”之外的血清成分（或稀释用缓冲液成分）。本专利技术进一步改进在于，还包括以下步骤S2样品的抗体滴度的确定：将所述步骤S1中含有抗体的样品用基质进行梯度稀释，获得不同稀释度的梯度稀释液；用第二抗体检测试剂对每个稀释度的梯度稀释液进行抗体检测，从而确定样品的抗体滴度；S3抗体检测试剂最低检出限的获得：将所述步骤S1中确定的样品的抗原中和当量与所述步骤S2中确定的样品的抗体滴度进行相乘计算，获得第二抗体检测试剂的最低检出限。采用上述技术方案，抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法首先确定抗体标准品或样品的抗原中和当量（A）；再确定样品的抗体的滴度（B）；从而抗体检测试剂最低检出限=A*B；因为抗原通常是稳定的，可定量的，可以和抗体发生中和反应，而中和反应是抗原决定簇和抗体识别端Fab的反应，再使用特异性抗体检测试剂来测定其抗体的最低检出限；其中步骤S1中的采用的抗原是已知纯度和浓度的，进行梯度稀释后加入等量的抗体标准品或含有抗体的样品，样品可以是混合样品，可以用原样品，可适当准确稀释，反应后进行检测，在所有梯度稀释度中会有一个稀释度出现阳性反应，而出现阳性反应的前一个较高浓度的稀释度的抗原量即为抗体标准品或样品的抗原中和当量，若样品为稀释后的样品，需考虑稀释因素；其中步骤S2中的样品的抗体滴度采用与步骤S1中相同的含有抗体的样品通过梯度稀释后进行检测，在所有梯度稀释度中会有一个稀释度出现阴性反应，而出现阴性反应的前一个较高浓度的稀释液的稀释度即为该样品的抗体的滴度。其中步骤S1中的第一抗体检测试剂与所述步骤S2中的第二抗体检测试剂可以是不同种检测试剂，步骤S1所用的第一抗体检测试剂可以是步骤S2中所用的第二抗体检测试剂的高一级的、更加精准、检出限更低的检测试剂。本专利技术进一步改进在于，还包括步骤S4抗体检测试剂的最低检出限的确认：将至少三个含有抗体的样品，按照步骤S1~S3获得第二抗体检测试剂的最低检出限，若获得的含有抗体的样品的最低检出限和步骤S3中获得的最低检出限一致，则将含有抗体的样品分别稀释至最低检出限的浓度，进行多次重复检测，若阳性率均≥90%，则第二抗体检测试剂的最低检出限通过确认。分别选择不同来源具有代表性的至少3个临床含待测抗体的样品进行确认，首先确定抗原中和当量（A）；确定抗体的滴度（B）；从而抗体检测试剂最低检出限=A*B；再将含抗体的样品稀释至最低检出限的浓度，确认通过步骤S1~S3获得的最低检出限是否准确。本专利技术进一步改进在于，还包括步骤S5抗体检测试剂的最低检出限的验证：将至少三个含有抗体的样品稀释至最低检出限的浓度，进行多次重复检测，若达到90%～95%阳性检出率，则最低检出限通过验证。选择具有时间和区域特征性的至少3个临床样品（且与步骤S4中最低检出限确认所使用的样品不同），优选进行20次重复检测，这样通过验证可以进一步确认通过步骤S1~S3获得的抗体检测试剂的最低检测出限是否准确。作为本专利技术的优选技术方案，所述步骤S1中的抗原的梯度稀释的稀释度分别为：1：2、1：4、1：8、1；16、1：32、1：64、1：128和1：256。作为本专利技术的优选技术方案，所述步骤S1中向每个梯度稀释液中分别加入等量的抗体标准品或含有特异抗体的样品，经37℃反应30min，后对每个混合液分别用第一抗体检测试剂进行检测，当检测结果中某个稀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：/nS1抗体标准品或样品的抗原中和当量的确定：将已知纯度和浓度的抗原用基质进行梯度稀释，获得一系列不同浓度的梯度稀释液；向每个不同浓度的稀释液中分别加入等量的抗体标准品或含有抗体的样品，反应后，用第一抗体检测试剂对每个混合液进行抗体检测，从而确定抗体标准品或样品的抗原中和当量。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1抗体标准品或样品的抗原中和当量的确定：将已知纯度和浓度的抗原用基质进行梯度稀释，获得一系列不同浓度的梯度稀释液；向每个不同浓度的稀释液中分别加入等量的抗体标准品或含有抗体的样品，反应后，用第一抗体检测试剂对每个混合液进行抗体检测，从而确定抗体标准品或样品的抗原中和当量。


2.根据权利要求1所述的抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，其特征在于，还包括以下步骤：
S2样品的抗体滴度的确定：将所述步骤S1中含有抗体的样品用基质进行梯度稀释，获得一系列不同稀释度的梯度稀释液；用第二抗体检测试剂对每个稀释度的稀释液进行抗体检测，从而确定样品的抗体的滴度；
S3抗体检测试剂最低检出限的获得：将所述步骤S1中确定的样品的抗原中和当量与所述步骤S2中确定的样品的抗体滴度进行相乘计算，获得第二抗体检测试剂的最低检出限。


3.根据权利要求2所述的抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，其特征在于，还包括步骤S4抗体检测试剂的最低检出限的确认：将至少三个含有抗体的样品，按照步骤S1~S3获得第二抗体检测试剂的最低检出限，若获得的含有抗体的样品的最低检出限和步骤S3中获得的最低检出限一致，则将含有抗体的样品分别稀释至最低检出限的浓度，进行多次重复检测，若阳性率均≥90%，则第二抗体检测试剂的最低检出限通过确认。


4.根据权利要求3所述的抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，其特征在于，还包括步骤S5抗体检测试剂的最低检出限的验证：将至少三个含有抗体的样品稀释至最低检出限的浓度，进行多次重复检测，若达到90%～95%阳性检出率，则第二抗体检测试剂的最低检出限通过验证。


5.根据权利要求1所述的抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，其特征在于，所述步骤S1中抗原的梯度稀释的稀释度分别为：1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128和1：256。


6.根据权利要求5所述的抗体标准品赋值和抗体检测试剂最低检出限确定的方法，其特征在于，所述步骤S1中向每个不同浓度的抗原稀释液中分别加入等量的抗体标准品或含有特异抗体的样品，经37℃反应30min，然后对每个混合液分别用第一抗体检测试剂进行检测，当检测结果中某个稀...

【专利技术属性】
技术研发人员：许行尚，杰弗瑞·陈，王鹏，
申请(专利权)人：南京岚煜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32