本发明专利技术公开一种稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，本发明专利技术中R1试剂为50‑300mmol/L磷酸盐缓冲液、0.5‑2.0g/L吐温20、0.5‑50.0g/L PEG8000、10‑50mmol/L NaCl，溶剂为纯化水；R2试剂为50‑300mmol/L缓冲液、0.1‑2.0％乳胶微球、20‑50mg/L IgG4抗体、0.1‑1.0mg/L EDC、0.1‑1.0mg/L NHS、1％甘油、2％D‑海藻糖、1.0‑5.0g/L BSA、0.05‑0.2％PC300，溶剂为纯化水。本发明专利技术还提供试剂盒的制备方法。本发明专利技术的有益效果为：试剂盒在机稳定性延长至15天，避免不必要的试剂浪费。
【技术实现步骤摘要】
一种稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒
本专利技术涉及医学及生物化学
，具体涉及一种稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒。
技术介绍
免疫球蛋白(IgG)是血液中除白蛋白外最丰富的蛋白，由通过二硫键连接的两条轻链和两条重链组成，呈“Y”型。IgG是血清中免疫球蛋白的的主成分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75％。IgG有IgG1、IgG2、IgG3和IgG44个亚型，其中IgG4是体内最主要的抗体，具有抗病毒、中和病毒、抗菌及免疫调节的功能。同时IgG4在新生儿抗感染、一些自身抗体免疫病等过程中发挥着十分重要的作用。IgG4是罕见的免疫球蛋白g亚型，对靶抗原的亲和力低，不能结合血清补体C1q，与Fc受体的亲和力低，不能激活经典补体途径和活化细胞因子，可抑制其他亚型免疫复合物的形成。其中IgG4相关性疾病是今年来广泛关注的一种系统性疾病，其以病变部位肿胀，受累组织大量淋巴浆细胞特别是IgG4阳性浆细胞浸润，席纹状纤维化为特点，常伴血清IgG4增高，但也很正常。目前研究发现IgG4相关性疾病可累及各个器官，例如胰腺(自发性胰腺炎)、泪腺(米库利兹病)、腹膜后(腹膜后纤维化)、主动脉(主动脉瘤、主动脉炎)、心脏(缩窄性心包炎)，及冠状动脉周假瘤等。由于IgG4相关性心血管疾病明显影响患者的预后，故其的早期诊断及治疗尤为重要。1、IgG4相关性疾病与淋巴瘤：IgG4相关性疾病与淋巴瘤的发生关系密切，尤其以黏膜相关淋巴组织(mucosa-associatedlymphoidtissue，MALT)结外边缘区B细胞淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤最为多见。2、IgG4相关性疾病与其他类型恶性肿瘤：IgG4相关性疾病可能引起疾病发生部位或全身其他部位的除血液性恶性肿瘤之外的其他类型的肿瘤，如IgG4相关性疾病的桥本甲状腺炎能够引起甲状腺乳头状瘤的发生。3、IgG4相关性疾病与既往发生的恶性肿瘤：恶性肿瘤可能是IgG4相关性疾病发生发展的诱因之一，且几乎所有的恶性肿瘤的发生部位都不同于IgG4相关性疾病的患病部位。目前测定血清免疫球蛋白G4的方法主要有酶联免疫法和单向免疫扩散法。1、酶联免疫法：此方法基本为手工操作，检测时间为90min以上，极难大规模开展；2、单向免疫扩散法：此方法操作繁琐复杂，检测时间在5h以上，难以及时出检测结果。公开号为CN106771251A的专利申请公开兼顾特异性和灵敏度的免疫球蛋白G4亚型IgG4检测试剂盒，该试剂盒有效消除了HAMA和RF干扰。但是现有的试剂盒开瓶后会极大影响试剂盒的稳定性，影响检测结果，同时易造成试剂盒的浪费。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于现有技术中的试剂盒开瓶后会极大影响试剂盒的稳定性，影响检测结果，同时易造成试剂盒的浪费。本专利技术通过以下技术手段实现解决上述技术问题的：一种稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，包括R1试剂和R2试剂；所述R1试剂主要由以下浓度的原料制成：50-300mmol/L磷酸盐缓冲液、0.5-2.0g/L吐温20、0.5-50.0g/L聚乙二醇-8000、10-50mmol/LNaCl，溶剂为纯化水；所述R2试剂主要由以下浓度的原料制成：50-300mmol/L缓冲液、0.1-2.0％乳胶微球、20-50mg/L免疫球蛋白G4抗体、0.1-1.0mg/L1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.1-1.0mg/LN-羟基丁二酰亚胺、1％甘油、2％D-海藻糖、1.0-5.0g/L牛血清白蛋白、0.05-0.2％PC300，溶剂为纯化水。有益效果：本专利技术中的试剂盒在R2试剂中加入甘油和D-海藻糖，使这二种成分相互叠加，以达到现有技术的测定试剂盒的在机稳定性可延长至15天，能极大程度利用好试剂，避免不必要的试剂浪费，有利于该方法学的试剂在临床上的推广和应用。优选地，所述R2试剂中的缓冲液包括磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、Tris缓冲液或HEPES缓冲液。优选地，所述R2试剂中的缓冲液为磷酸盐缓冲液。有益效果：当R2、R1试剂中的缓冲液为磷酸盐缓冲液时，整个反应的缓冲体系，是重组IgG4抗体最佳的保存液和反应缓冲液。优选地，所述R1试剂与R2试剂的体积比为4:1。优选地，所述乳胶微球的粒径为100-250nm。优选地，所述R1试剂主要由以下浓度的原料制成：50mmol/L磷酸盐缓冲液、0.5g/L吐温20、0.5g/L聚乙二醇-8000、10mmol/LNaCl，溶剂为纯化水。优选地，所述R1试剂主要由以下浓度的原料制成：300mmol/L磷酸盐缓冲液、2.0g/L吐温20、50.0g/L聚乙二醇-8000、50mmol/LNaCl，溶剂为纯化水。优选地，所述R2试剂主要由以下浓度的原料制成：50mmol/L磷酸盐缓冲液、0.1％乳胶微球、20mg/L免疫球蛋白G4抗体、0.1mg/L1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.1mg/LN-羟基丁二酰亚胺、1％甘油、2％D-海藻糖、1.0g/L牛血清白蛋白、0.05％PC300，溶剂为纯化水。优选地，所述R2试剂主要由以下浓度的原料制成：300mmol/L磷酸盐缓冲液、2％乳胶微球、50mg/L免疫球蛋白G4抗体、1mg/L1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1mg/LN-羟基丁二酰亚胺、1％甘油、2％D-海藻糖、5g/L牛血清白蛋白、0.2％PC300，溶剂为纯化水。优选地，所述R1试剂的制备方法包括以下步骤：将磷酸盐溶于纯化水，制得磷酸盐缓冲液，将吐温2-溶于磷酸盐缓冲液中，然后继续加入聚乙二醇-8000、NaCl，溶解后，即制得R1试剂。优选地，所述R2试剂的制备方法包括以下步骤：(1)将磷酸盐溶于纯化水制得磷酸盐缓冲液，将乳胶微球溶于磷酸盐缓冲液，搅拌后，制得A缓冲液；(2)将免疫球蛋白G4抗体溶于磷酸盐缓冲液，搅拌后，制得B缓冲液；(3)将A缓冲液与B缓冲液混合，于37℃混合1-2h；(4)然后将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基丁二酰亚胺加入步骤(3)的缓冲液中，于37℃混合2-5h；(5)将步骤(4)中混合后的缓冲液离心，去除上清液后，将沉淀物重悬于磷酸盐缓冲液中，然后加入甘油、D-海藻糖、牛血清白蛋白、PC300，搅拌后，于室温放置1-5h，即制得R2试剂。本专利技术的优点在于：本专利技术中的试剂盒在R2试剂中加入甘油和D-海藻糖，使这二种成分相互叠加，以达到现有技术的测定试剂盒的在机稳定性可延长至15天，能极大程度利用好试剂，避免不必要的试剂浪费，有利于该方法学的试剂在临床上的推广和应用。本专利技术中的试剂盒能够实现全自动检测，检测时间缩短为10min，且分析灵敏度高，线性范围广，稳定性好，适合大批量检测。本专利技术中的试剂盒利用乳胶微球包被IgG4抗体，与含有IgG4抗原的样品混合时，形成乳胶微球-抗体-抗原复合物，从本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，其特征在于：包括R1试剂和R2试剂；/n所述R1试剂主要由以下浓度的原料制成：50～300mmol/L磷酸盐缓冲液、0.5-2.0g/L吐温20、0.5-50.0g/L聚乙二醇-8000、10-50mmol/L NaCl，溶剂为纯化水；/n所述R2试剂主要由以下浓度的原料制成：50～300mmol/L缓冲液、0.1-2.0％乳胶微球、20-50mg/L免疫球蛋白G4抗体、0.1-1.0mg/L 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.1-1.0mg/L N-羟基丁二酰亚胺、1％甘油、2％D-海藻糖、1.0-5.0g/L牛血清白蛋白、0.05-0.2％PC300，溶剂为纯化水。/n
【技术特征摘要】
1.一种稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，其特征在于：包括R1试剂和R2试剂；
所述R1试剂主要由以下浓度的原料制成：50～300mmol/L磷酸盐缓冲液、0.5-2.0g/L吐温20、0.5-50.0g/L聚乙二醇-8000、10-50mmol/LNaCl，溶剂为纯化水；
所述R2试剂主要由以下浓度的原料制成：50～300mmol/L缓冲液、0.1-2.0％乳胶微球、20-50mg/L免疫球蛋白G4抗体、0.1-1.0mg/L1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.1-1.0mg/LN-羟基丁二酰亚胺、1％甘油、2％D-海藻糖、1.0-5.0g/L牛血清白蛋白、0.05-0.2％PC300，溶剂为纯化水。
2.根据权利要求1所述的稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，其特征在于：所述R1试剂与R2试剂的体积比为4:1。
3.根据权利要求1所述的稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，其特征在于：所述乳胶微球的粒径为100-250nm。
4.根据权利要求1所述的稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，其特征在于：所述R1试剂主要由以下浓度的原料制成：50mmol/L磷酸盐缓冲液、0.5g/L吐温20、0.5g/L聚乙二醇-8000、10mmol/LNaCl，溶剂为纯化水。
5.根据权利要求1所述的稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，其特征在于：所述R1试剂主要由以下浓度的原料制成：300mmol/L磷酸盐缓冲液、2.0g/L吐温20、50.0g/L聚乙二醇-8000、50mmol/LNaCl，溶剂为纯化水。
6.根据权利要求1所述的稳定性增强的人免疫球蛋白G4试剂盒，其特征在于：所述R2试剂中的缓冲液包括...
【专利技术属性】
技术研发人员：董燕群，梁忠柱，徐运，朱雨，胡苗苗，吴泽东，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。