唾液代谢标志物在早期诊断口腔扁平苔藓的应用制造技术

提供一种唾液代谢标志物在早期诊断口腔扁平苔藓的应用，本发明专利技术提供一种辅助诊断口腔扁平苔藓的唾液代谢标志物，唾液代谢标志物由3‑磷酸甘油、2‑氨基‑1，3，4‑十八烷三醇和次黄嘌呤组成。本发明专利技术还提供一种口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法，其包括：步骤一、获取训练病例集；步骤二、采集受试者的唾液样本，对唾液样本进行超高效液相色谱‑四极杆/静电场轨道阱串联高分辨质谱分析，得到患病受试者和健康受试者的多个差异代谢物；步骤三、利用变量权重重要性排序和受试者工作特征曲线，从多个差异代谢物确定口腔扁平苔藓的辅助诊断模型。本发明专利技术提供一种辅助诊断模型，其在诊断口腔扁平苔藓上具有无创、准确度高的优点。

【技术实现步骤摘要】
唾液代谢标志物在早期诊断口腔扁平苔藓的应用
本专利技术涉及医疗
，尤其涉及一种唾液代谢标志物在早期诊断口腔扁平苔藓的应用。
技术介绍
口腔扁平苔藓(Orallichenplanus,OLP)是一种常见口腔黏膜疾病，在口腔黏膜病中发病率很高，一定的性别和年龄分布特点，最常影响的是中年女性。其病损进展缓慢，可引起巨大疼痛，而这些病损很少会自发缓解。OLP的口腔黏膜病损常常对称发作，可发生在唇、颊、舌、口底等任何部位，以双颊部最为多见，多为白色或灰白色花纹，这些花纹增大并结合形成网状、环状、树枝状的图案，也可以形成白色斑块，同时在病损区域还可并存充血、糜烂、溃疡、萎缩等临床表现。于临床就诊的患者常常自述口腔黏膜有干燥、发涩、烧灼感，无法耐受食用辛辣、温度高的食物。研究表明，长期不愈糜烂型OLP有恶变的几率，但恶变率一直存在争议，约有0.5-2％的OLP患者可转化为恶性病变，WHO将OLP列为“癌前状态”。近年来，代谢组学在口腔黏膜疾病诊断、疾病分型和疾病鉴别等方面的应用日益成为口腔医学领域的研究热点。OLP是最常见的口腔黏膜病之一，与许多口腔黏膜疾病有相似的临床表现。其目前的诊断方法有创，且误诊率高，因此，对OLP新诊断方法的研究得到了国内外学者们的广泛关注。唾液是一种容易获得的生物液体，主要由腮腺、颌下腺和舌下腺分泌，由于其在疾病相关生物标志物开发中的广泛价值已得到越来越多的关注。最近的研究已经在唾液中发现了各种代谢物，这些代谢物可以为诊断、监测和研究几种疾病的发病机制提供潜在的生物标志物。唾液代谢组学在口腔粘膜疾病中的研究表明，以人唾液为基础的代谢组学是诊断口腔粘膜疾病的有力手段，是对临床检测的补充，有助于提高疾病的诊断和预后。如何得到一种新的、无创、且更准确的方法早期辅助诊断OLP，筛选出较理想的可用于诊断OLP的生物标志物，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供一种辅助诊断口腔扁平苔藓的唾液代谢标志物，所述唾液代谢标志物由3-磷酸甘油、2-氨基-1，3，4-十八烷三醇和次黄嘌呤组成。本专利技术另一专利技术提供一种口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法，其包括：步骤一、获取训练病例集，所述训练病例集中的受试者包括患病受试者和健康受试者；步骤二、采集所述受试者的唾液样本，对所述唾液样本进行超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱串联高分辨质谱分析，得到所述患病受试者和所述健康受试者的多个差异代谢物；步骤三、利用变量权重重要性排序和受试者工作特征曲线，从多个所述差异代谢物确定3-磷酸甘油、2-氨基-1，3，4-十八烷三醇和次黄嘌呤为口腔扁平苔藓的辅助诊断模型。在某些实施方式中，所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中，所述辅助诊断模型的曲线下面积、敏感度和特异性分别为0.921、74.4％和95.2％；所述辅助诊断模型的截断值为0.681。在某些实施方式中，所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中，所述辅助诊断模型中所述3-磷酸甘油的曲线下面积、敏感度和特异性分别为：0.843、97.6％和60.5％；所述2-氨基-1，3，4-十八烷三醇的曲线下面积、敏感度和特异性分别为：0.752、53.5％和92.9％；所述次黄嘌呤的曲线下面积、敏感度和特异性分别为：0.682、90.5％和51.2％。在某些实施方式中，所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中，还包括唾液处理步骤，具体为：收集所述受试者的唾液样本，所述受试者在收集前1h未进食未进水；静置半小时后在4℃、3000rpm转速的条件下离心10min，取上清液，将所述上清液放置在超低温冰箱中保存备用；所述上清液在冰上解冻，吸取100μL所述上清液置于1.5mL离心管中，然后加入0.3mL含内标的甲醇溶液沉淀蛋白，所述内标为：0.05μg/mLL-2-氯代苯丙氨酸和0.5μg/mL酮洛芬；涡旋处理1min后，在4℃条件下，13000rpm离心10min；吸取上清液至进样小瓶中，待质谱进行分析。在某些实施方式中，所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中，所述超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱串联高分辨质谱分析的条件为：采用C18色谱柱，柱温为40℃，以乙腈为流动相A，0.1％甲酸水溶液为流动相B；采用梯度洗脱程序分离：0～0.5min，5％流动相A；0.5～1.0min，5％～60％流动相A；1.0～7.0min，60％～80％流动相A；7.0～9.0min，80～100％流动相A；9.0～11.0min，100％流动相A；11.0～11.2min，100％-5％流动相A；11.2～13.0min，5％流动相A；洗脱程序的流速为0.2mL/min。在某些实施方式中，所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中，将所述超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱串联高分辨质谱系统串联至可加热的电喷雾离子源系统中；辅助气体的温度为300℃，离子源的温度为350℃，毛细管温度为320℃，辅助气体的流量是10arb；扫描范围为：80.00m/z～1200.00m/z；在FullMass/ddms2扫描模式下，以17500的二级质谱分辨率在正离子模式和负离子模式下进行检测；梯度碰撞能量分别为20eV、40eV和60eV；在正离子模式下，喷雾电压为3.50kV，鞘气流速为40arb，在负离子模式下，喷雾电压为2.80kV和鞘气流速为38arb。本专利技术另一方面提供一种上述唾液代谢标志物在辅助诊断口腔扁平苔藓上的应用。本专利技术另一方面提供一种口腔扁平苔藓辅助诊断试剂盒，其包括上述的唾液代谢标志物。有益效果：1.本专利技术所述的辅助诊断口腔扁平苔藓的唾液代谢标志物，该唾液代谢标志物在进行口腔扁平苔藓诊断时，能够达到无创、诊断更准确的目的。2.本专利技术所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法，该诊断模型可成功发现不同样本间代谢物的差异，基于ROC中最高的预测敏感度和特异性，选择0.681作为区分口腔扁平苔藓和健康对照组的最佳截断值。该截断值被用来区分测试集中的不同组，其诊断准确性可达85.5％。附图说明图1是本专利技术所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法的流程图。图2是本专利技术所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中训练集中QC和样本的主成分分析。图3是本专利技术所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中诊断模型在测试集中的受试者工作特征曲线、曲线下面积、95％置信区间、敏感度和特异性。图4是本专利技术所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中3-磷酸甘油在测试集中的受试者工作特征曲线、曲线下面积、95％置信区间、敏感度和特异性。图5是本专利技术所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中2-氨基-1，3，4-十八烷三醇在测试集中的受试者工作特征曲线、曲线下面积、95％置信区间、敏感度和特异性。图6是本专利技术所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法中次黄嘌呤在测试集中的受试者工作特征曲线、曲线下面积、95％置信区间、敏感度和特异性。图7是本专利技术所述的诊断模型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种辅助诊断口腔扁平苔藓的唾液代谢标志物，其特征在于，所述唾液代谢标志物由3-磷酸甘油、2-氨基-1，3，4-十八烷三醇和次黄嘌呤组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种辅助诊断口腔扁平苔藓的唾液代谢标志物，其特征在于，所述唾液代谢标志物由3-磷酸甘油、2-氨基-1，3，4-十八烷三醇和次黄嘌呤组成。


2.一种口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法，其特征在于，包括：
步骤一、获取训练病例集，所述训练病例集中的受试者包括患病受试者和健康受试者；
步骤二、采集所述受试者的唾液样本，对所述唾液样本进行超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱串联高分辨质谱分析，得到所述患病受试者和所述健康受试者的多个差异代谢物；
步骤三、利用变量权重重要性排序和受试者工作特征曲线，从多个所述差异代谢物确定3-磷酸甘油、2-氨基-1，3，4-十八烷三醇和次黄嘌呤为口腔扁平苔藓的辅助诊断模型。


3.根据所述权利要求2所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法，其特征在于，包括：所述辅助诊断模型的曲线下面积、敏感度和特异性分别为0.921、74.4％和95.2％；所述辅助诊断模型的截断值为0.681。


4.根据所述权利要求2所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法，其特征在于，包括：所述辅助诊断模型中所述3-磷酸甘油的曲线下面积、敏感度和特异性分别为：0.843、97.6％和60.5％；所述2-氨基-1，3，4-十八烷三醇的曲线下面积、敏感度和特异性分别为：0.752、53.5％和92.9％；所述次黄嘌呤的曲线下面积、敏感度和特异性分别为：0.682、90.5％和51.2％。


5.根据所述权利要求2所述的口腔扁平苔藓辅助诊断模型构建方法，其特征在于，包括：还包括唾液处理步骤，具体为：
收集所述受试者的唾液样本，所述受试者在收集前1h未进食未进水；
静置半小时后在4℃、3000rpm转速的条件下离心10min，取上清液，将所述上清液放置在超低温冰箱中保存备用；
所述上清液在冰上解冻，吸取100μL所述上清液置于1.5mL离心管中，然后加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵红宇，孙志，王晓霜，左莉华，刘丽伟，师莹莹，李希博，范蕊蕊，刘宁，
申请(专利权)人：郑州大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：河南;41