【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法
本专利技术属于单克隆抗体制备
,具体涉及一种新型冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法。
技术介绍
2019年12月以来,陆续发现了多例不明原因肺炎病例,现已证实为一种新型冠状病毒感染引起的急性呼吸道传染病。基于目前的流行病学调查,潜伏期一般为3-7天,最长不超过14天。此次疫情临床表现以发热、乏力、干咳为主要表现。少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。部分患者仅表现为低热、轻微乏力等,无肺炎表现,多在1周后恢复。世界卫生组织将本次引起病毒性肺炎病例的病原体命名为2019新型冠状病毒,即为SARS-CoV-2病毒,刺突蛋白是SARS-CoV-2的表面膜蛋白,包含两个亚基,S1和S2,S1主要包含一个受体结合域,负责识别细胞表面受体,S2包含膜融合所需的基本元素。现阶段出现的SARS-CoV-2病毒感染能力极强,且未出现有效的药物,能够将SARS-CoV-2病毒进行消除,使得患者仅能凭借自身抵抗力治愈,大大降低了SARS-CoV-2病毒的治愈率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新型冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法。本专利技术要解决的技术问题:现阶段出现的SARS-CoV-2病毒感染能力极强,且未出现有效的药物,能够将SARS-CoV-2病毒进行消除,使得患者仅能凭借自身抵抗力治愈,大大降低了SARS-CoV-2病毒的治愈率。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现:一种新型冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备 ...
【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法,其特征在于:具体包括如下步骤:/n1抗原制备:将Skipe蛋白RBD区域序列,进行全基因合成,亚克隆至真核表达载体,并将表达载体C端添加8*His标签,表达纯化出的刺突蛋白受体结合域SP-RBD-His;/n2动物免疫:用刺突蛋白受体结合域SP-RBD-His对Balb/c小鼠进行免疫,每只Balb/c小鼠每次免疫50μg,免疫3次,每次间隔时间两周;/n3细胞融合:取第三次免疫后1周的小鼠脾脏,将小鼠脾细胞分离成单细胞悬液,与处于对数期的小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按1:1比例混合,采用细胞融合仪进行细胞融合,融合后细胞铺板至96孔细胞培养板中,添加HAT筛选试剂,培养5天后进行一次全换液;/n4筛选检测:将刺突蛋白受体结合域SP-RBD-His包被至酶标板中,对融合后的细胞上清进行间接ELISA筛选,保留阳性克隆;/n5稳定细胞株建立:对阳性克隆进行亚克隆,直至阳性检出率为100%,扩大培养并冻存保种,得到杂交瘤稳定细胞株;/n6单克隆抗体生产:采用无血清发酵培养杂交瘤稳定细胞株,收集细胞培养上清,利用Prontein A亲和纯化单克隆 ...
【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法,其特征在于:具体包括如下步骤:
1抗原制备:将Skipe蛋白RBD区域序列,进行全基因合成,亚克隆至真核表达载体,并将表达载体C端添加8*His标签,表达纯化出的刺突蛋白受体结合域SP-RBD-His;
2动物免疫:用刺突蛋白受体结合域SP-RBD-His对Balb/c小鼠进行免疫,每只Balb/c小鼠每次免疫50μg,免疫3次,每次间隔时间两周;
3细胞融合:取第三次免疫后1周的小鼠脾脏,将小鼠脾细胞分离成单细胞悬液,与处于对数期的小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按1:1比例混合,采用细胞融合仪进行细胞融合,融合后细胞铺板至96孔细胞培养板中,添加HAT筛选试剂,培养5天后进行一次全换液;
4筛选检测:将刺突蛋白受体结合域SP-RBD-His包被至酶标板中,对融合后的细胞上清进行间接ELISA筛选,保留阳性克隆;
5稳定细胞株建立:对阳性克隆进行亚克隆,直至阳性检出率为100%,扩大培养并冻存保种,得到杂交瘤稳定细胞株;
6单克隆抗体生产:采用无血清发酵培养杂交瘤稳定细胞株,收集细胞培养上清,利用PronteinA亲和纯化单克隆抗体,制得刺突蛋白单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法,其特征在于:所述的Skipe蛋白RBD区域序列:RVQPTESIVRFPNITNLCPFGEVFNATRFASVYAWNRKRISNCVADYSVLYNSASFSTFKCYGVSPTKLNDLCFTNVYADSFVIRGDEVRQIAPGQTGKIADYNYKLPDDFTGCVIAWNSNNLDSKVGGNYNYLYRLFRKSNLKPFERDISTEIYQAGSTPCNGVEGFNCYFPLQSYGFQPTNGVGYQPYRVVVLSFELLHAPATVCGPKKSTNHHHHHHHH。
3.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒刺突蛋白单克隆抗体的制备方法,其特征在于:动物免疫的具体步骤如下:将刺突蛋白受体结合域SP-RBD-His和弗氏完全佐剂以质量比1:1的比例进行混合,制得第一混合液,用混合液对6-8周龄的Balb/c小鼠进行皮下注射,每次注射位点个数为6-8个,每次注射量为50μg,得到初...
【专利技术属性】
技术研发人员:雍金贵,张磊,缪连军,
申请(专利权)人:通用生物系统安徽有限公司,
类型:发明
国别省市:安徽;34
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