本发明专利技术公开了一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，包括如下实施步骤：醇溶蛋白的提取：调整传统的小麦醇溶蛋白提取试剂的主要成分，明确小麦籽粒授粉后蛋白积累规律，实现早期小麦籽粒醇溶蛋白的大量快速提取；B.醇溶蛋白多态性检测：通过凝胶的配置、添加特定剂量的loading buffer、改变电泳液浓度，得到稳定性和分辨率均提高的醇溶蛋白条带。本发明专利技术的方法解决小麦种子纯度鉴定在种子收获后的难题，建立了一套适用于小麦收获前的纯度鉴定方法，为开展小麦种子的纯度鉴定、品种管理以及大面积推广研究提供了有力的技术支持。
【技术实现步骤摘要】
一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法
本专利技术涉及植物检测
，尤其是一种植物籽粒发育早期醇溶蛋白提取和检测技术。
技术介绍
与本专利技术相关和接近的参考文献包括：1.刘会宇,小麦重要农艺性状近等基因导入系的构建及其QTL分析,2010,四川农业大学.2.张英华等.关注国际小麦研究的几个热点.in中国小麦栽培科学学术研讨会.2012.3.王一杰等.,我国小麦生产、消费和贸易的现状分析.中国农业资源与区划,2018.39(5):p.41-50.4.盖钧镒,加快科研单位和种子企业的联合与合作.北京农业,2012(2):p.12-13.5.孙梦和秦榕蔓,韩书荣:种业困境.商周刊,2013(8).6.高雨林和马东,苜蓿种子检验技术.畜牧兽医杂志,2007.26(6):p.63-64.7.胡少华和管晓春,利用水稻幼苗中胚轴长度和芽鞘颜色快速鉴定汕优63种子.种子,1999(6):p.64-64.8.王玉杰,利用玉米杂交种籽粒形态和幼苗芽鞘颜色鉴定种子纯度的几种方法.种子,1998(1):p.76-78.9.杨秀英,利用幼苗芽鞘颜色鉴定玉米杂交种种子纯度.园艺与种苗,2001.21(1):p.51-52.10.张守润,利用幼苗及籽粒形态鉴定玉米品种真实性和纯度研究.甘肃农业科技,2010(4):p.11-14.11.中国近海常见水母类和(虫戎)类的DNA条形码分析及系统发生研究,2010,中国科学院研究生院(海洋研究所).<br>12.丁锐学和胡军祥,SSR技术在作物品种纯度和真伪检验中的探讨.农业科技通讯,2008(6):p.98-98.13.孔祥彬,张春庆,和许子锋,DNA指纹图谱技术在作物品种(系)鉴定与纯度分析中的应用.生物技术,2005.15(4):p.74-77.14.李志勇等.,DNA分子标记技术在农作物品种鉴定上的应用.种子科技,2010.28(10):p.19-21.15.罗黎明等.,DNA分子标记技术在玉米种子纯度鉴定中的应用.生物技术进展,2011.01(1):p.7-13.16.王和勇和陈敏,RFLP,RAPD,AFLP分子标记及其在植物生物技术中的应用.生物学杂志,1999(4):p.24-25.17.郑成超和温孚江,DNA分子标记技术与作物品种纯度鉴定.山东农业大学学报(自然科学版),1997(4):p.499-505.18.王丽红和王良,蛋白质电泳法检验玉米种子纯度常见问题分析.种子科技,2009.27(4):p.34-34.19.王平和贺海生,初探种子纯度检验方法.农民致富之友,2015(23):p.89-89.20.Osborne,T.B.,Theproteinsofthewheatkernel.1907:CarnegieInstitutionofWashington.865-865.21.李硕碧等.,小麦高分子量谷蛋白亚基与加工品质.2001:中国农业出版社.22.Qi,P.F.,etal.,[Biochemicalandmolecularcharacterizationofgliadins].MolecularBiology,2006.40(5):p.713-723.23.Martling,S.E.,S.J.Mulvaney,andC.Cohen,EffectofMoistureContentonViscoelasticPropertiesofHydratedGliadin.CerealChemistry,2004.81(2):p.207-219.24.Khatkar,B.S.,etal.,FunctionalPropertiesofWheatGliadins.II.EffectsonDynamicRheologicalPropertiesofWheatGluten.JournalofCerealScience,2002.35(3):p.307-313.25.Nieto-Taladriz,M.T.,M.R.Perretant,andM.Rousset,EffectofgliadinsandHMWandLMWsubunitsofgluteninondoughpropertiesintheF6recombinantinbredlinesfromabreadwheatcross.Theoretical&AppliedGenetics,1994.88(1):p.81-88.26.陈黎,普通小麦低分子量谷蛋白亚基(LMW-GS)基因克隆及序列分析,2009,四川农业大学.27.刘华等.,小麦种质资源醇溶蛋白指纹图谱数据库的初步建立及应用.作物学报,1999.25(6):p.674-682.28.郎明林和卢少源,适合我国小麦醇溶蛋白“指纹图谱”绘制的改良APAGE分子标记技术.河北农业大学学报,1998(4):p.1-5.29.阎旭东,卢少源,和李宗智,适用于我国小麦醇溶蛋白分析的APAGE方法.河北农业大学学报,1994(1):p.7-10.30.颜启传和黄亚军,我国适用的小麦和大麦种子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定品种.种子,1989(6):p.55-57.31.卢夏茹,普通野生稻种子贮藏蛋白质多态性研究,2015,海南大学.32.杨宝峰,水稻种子贮藏蛋白的多态性研究,2008,浙江师范大学.33.杨天育等.,用A-PAGE鉴定谷子遗传多样性.作物学报,2005.31(1):p.131-133.34.杨延兵等.,谷子籽粒醇溶蛋白提取条件及A-PAGE方法研究.种子,2010.29(1):p.8-10.35.杨延兵等.,不同生态区谷子籽粒醇溶蛋白多态性分析.中国粮油学报,2013.28(4):p.22-26.36.赵勇,小麦籽粒蛋白质组分含量的条件和非条件QTL分析,2014,河北农业大学.小麦是全球最重要的粮食作物，养活了世界上40％的人口，提供全球20％的人类营养所需的热能和蛋白质[1,2]。小麦是我国第二大口粮作物，我国是世界上最大的小麦生产国，也是最大的消费国，小麦生产在保障国家粮食安全和全面食品消费中具有举足轻重的地位[3]。随着科学技术的发展，小麦遗传育种研究取得了丰硕的成果，向着优质、抗病、高产、广适的方向前进，同时根据新修订的《主要农作物品种审定办法》的相关规定，在充分利用现有国家和省级品种比较试验资源的基础上，积极利用社会品种比较试验资源，扩大试验容量，主要包括：育繁推一体化种子企业自主研发品种自行开展的绿色通道试验；企业联合体、科企联合体和科研单位联合体自行开展自由品种的小麦联合体试验；国家小麦良种联合攻关广适性品种试验。这些措施，逐步推进了商业化育种进程的发展[4,5]。育成品种之多，推广面积增大，使得种子公司在良种繁育、推广中必须进一步重视种子纯度的问题，确保种子质量，保证“种植安全”从而保证“粮本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：/nA.醇溶蛋白的提取：调整传统的小麦醇溶蛋白提取试剂的主要成分，明确小麦籽粒授粉后蛋白积累规律，实现早期小麦籽粒醇溶蛋白的大量快速提取；/nB.醇溶蛋白多态性检测：通过凝胶的配置、添加特定剂量的loading buffer、改变电泳液浓度，得到稳定性和分辨率均提高的醇溶蛋白条带。/n
【技术特征摘要】
1.一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
A.醇溶蛋白的提取：调整传统的小麦醇溶蛋白提取试剂的主要成分，明确小麦籽粒授粉后蛋白积累规律，实现早期小麦籽粒醇溶蛋白的大量快速提取；
B.醇溶蛋白多态性检测：通过凝胶的配置、添加特定剂量的loadingbuffer、改变电泳液浓度，得到稳定性和分辨率均提高的醇溶蛋白条带。
2.根据权利要求1所述的一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：步骤A中，所述小麦醇溶蛋白提取试剂包括小麦醇溶蛋白提取buffer、A-PAGEloadingbuffer。
3.根据权利要求2所述的一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：所述小麦醇溶蛋白提取buffer的配方见下表：
4.根据权利要求2所述的一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：所述A-PAGEloadingbuffer的配方见下表：
5.根据权利要求1所述的一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：步骤A中，所述摇床处理工艺是指：将待提取样品中加入小麦醇溶蛋白提取液中，密闭摇床震荡提取1-2h。
6.根据权利要求1所述的一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：步骤B中，所述凝胶的配方及加入顺序见如a表，凝胶buffer配方见b表：
a凝胶配方；100ml，2板胶
1L凝胶buffer配方
7.根据权利要求1所述的一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：步骤A的实施步骤包括：
A-3.样品的准备：将目的种子砸成粉末状，将粉末放置于2.0ml离心管中；
A-4.提取液的配制：按照下表配制醇溶蛋白提取液：
小麦醇溶蛋白提取buffer配方
A-5.醇溶蛋白的提取：
A-5-1.将A-3制备的每个样品中加入A-4制备的蛋白提取液200μl，盖好盖子，摇床震荡提取1.5h；
A-5-2.按照下表配置A-PAGEloadingbuffer，并在A-5-1完成提取的离心管中加入300μlA-PAGEloadingbuffer，将离心管放入离心机，严格配平，12000rpm，离心5min，即得醇溶蛋白；
A-PAGEloadingbuffer配方
8.根据权利要求1所述的一种能够在籽粒发育早期进行小麦种子纯度鉴定的方法，其特征在于：步骤B的实施步骤...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘丹，梁丹，王建贺，冯刚，时晓伟，王从磊，许庆芬，
申请(专利权)人：天津市农作物研究所天津市水稻研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。