【技术实现步骤摘要】
一种检测免疫球蛋白G4时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其制备方法和检测方法
本专利技术属于免疫检测分析技术和纳米生物
，具体涉及一种基于免疫球蛋白G4(IgG4)时间分辨荧光免疫分析试剂盒及其制备方法和检测方法。
技术介绍
免疫球蛋白G是血清中含量最高的免疫球蛋白，它是血液和细胞外液中的主要抗体成分，发挥重要的免疫学作用。在人体中IgG可按重链氨基酸分为4种亚型，分别为IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。在血清中，虽然IgG4的含量在4种亚型中最低(占1％-7％)，尽管如此，IgG4与某些疾病的关联却越来越被重视。2001年，日本学者Hamano等发现，自身免疫性胰腺炎AIP患者血清IgG4水平显著升高，且在AIP的胰腺组织中有大量IgG4阳性浆细胞浸润，该类患者使用糖皮质激素(Glucocorticoids，GCs)后症状得到改善，血清IgG4水平降低。2003年首次由Kamisawa等提出了IgG4系统性疾病的概念，随着研究的深入，此后多部位的类似疾病如硬化性胆管炎、间质性肺炎、肾炎、腹膜后纤维化、炎性假瘤...
【技术保护点】
1.一种检测免疫球蛋白G4时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内包括至少一个试剂架，每个所述的试剂架上包括至少五个试剂条，所述试剂盒内还包括至少二瓶IgG4的校准品；所述试剂条上包括磁珠孔、反应缓冲液孔、铕标冻干孔、检测孔、清洗液孔、增强液孔和若干个预留孔；所述磁珠孔内填充包被IgG4抗体的磁微粒溶液，所述反应缓冲液孔内填充反应缓冲液，所述铕标冻干孔内填充铕标记的IgG4抗体溶液，所述检测孔内填充待检样品，所述清洗液孔内填充清洗液，所述增强液孔内填充增强液。/n
【技术特征摘要】
1.一种检测免疫球蛋白G4时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内包括至少一个试剂架，每个所述的试剂架上包括至少五个试剂条，所述试剂盒内还包括至少二瓶IgG4的校准品；所述试剂条上包括磁珠孔、反应缓冲液孔、铕标冻干孔、检测孔、清洗液孔、增强液孔和若干个预留孔；所述磁珠孔内填充包被IgG4抗体的磁微粒溶液，所述反应缓冲液孔内填充反应缓冲液，所述铕标冻干孔内填充铕标记的IgG4抗体溶液，所述检测孔内填充待检样品，所述清洗液孔内填充清洗液，所述增强液孔内填充增强液。
2.如权利要求1所述的一种检测免疫球蛋白G4时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内包括5～20个试剂架，每个所述的试剂架上设有5个试剂条；所述试剂盒内还包括2瓶IgG4的校准品。
3.如权利要求1所述的一种检测免疫球蛋白G4时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述包被IgG4抗体的磁微粒溶液经直径为50～5000纳米的活化的磁微粒与IgG4抗体连接、洗涤、封闭制备得到；
所述铕标记的IgG4抗体溶液以Eu3+-N2-[P-异氰酸-苄基]-二乙烯三胺四乙酸钠标记IgG4抗体制备得到。
4.如权利要求1所述的一种检测免疫球蛋白G4时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：所述反应缓冲液为pH7.8的50mmol/LTris-HCl含8mmol/LNaCl、0.1％BSA、50μmol/LDTPA、0.1ml/LTween-80和0.1％NaN3；
所述清洗液为含0.48g/L的Tris、12.49g/L的NaCl、1.11g/L的Tween-20，以盐酸调节pH为7.8的缓冲溶液；
所述增强液为含体积浓度为3.6‰的冰醋酸、0.5g/L的醋酸钠、0.05g/L的β-萘甲酰三氟丙酮、0.03g/L的三辛基氧化膦和体积浓度为1‰的TritonX-100的混合溶液；
所述IgG4的校准品为用含2g/L的BSA和1g/L的NaN3的50mmol/L的pH7.8Tris-HCl的反应缓冲液，将IgG4配制成不同浓度的校准品溶液。
5.一种如权利要求1至4中任意一项所述的检测免疫球蛋白G4时间分辨荧光免疫分析试剂盒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下内容：
IgG4校准品溶液的制备：取高浓度的IgG4抗原溶液用含2g/L的BSA和1g/L的NaN3的50mmol/L的pH为7.8的Tris-HCl反应缓冲液配制成不同浓度的校准品溶液，进行分装，2～8℃保存；
包被IgG4抗体的磁微粒溶液的制备：取直径为50～5000nm的四氧化三铁微球用质量浓度为0.5～2％的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)活化，室温混匀4小时后，用0.05mo...
【专利技术属性】
技术研发人员：静亚茹，黄飚，傅凯杰，任志奇，
申请(专利权)人：浙江博实生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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