一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法，包括：(1)向交联透明质酸钠凝胶样品中加入无机酸溶液，于90‑110℃下加热处理15‑60min，加入无机碱溶液，得到处理后的样品溶液；(2)将考马斯亮蓝G250溶于醇类中，加入无机酸和表面活性剂，得到显色液；(3)配制系列标准溶液，加入显色液，测定吸光度，绘制标准曲线；(4)向处理后的样品溶液中加入显色液，测定550‑650nm波长下的吸光度，通过标准曲线确定蛋白残留的含量。本发明专利技术提供的交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法采用自配的显色液，来提高测定体系的稳定性和灵敏度，测定结果准确度高、成本低、稳定性好。

【技术实现步骤摘要】
一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法。
技术介绍
蛋白质是生物最重要的基本组成成分之一，它与营养、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、新陈代谢、物质运转、遗传息息相关。生物提取玻璃酸钠时，相应地会有部分蛋白残留。蛋白量若过多，用于人体会引起排斥反应，引发不良反应。因此，药品生产过程中及终产品都会对蛋白质残留进行严格的控制。目前常用的蛋白质定量测定方法包括：凯式定氮法、考马斯亮蓝法(Bradford法)、双缩脲法、Folin-酚法(Lowry法)、紫外吸收法等。初期透明质酸钠凝胶蛋白残留常用的测定方法Lowry法。Lowry法的优点是灵敏度高，缺点是测定范围窄、使用试剂多、干扰物质多、耗费时间长及反应时间难以控制。因此，近年来开始有研究者采用Bradford法测定透明质酸钠凝胶中蛋白残留。Bradford法灵敏度较高，其最低检测蛋白含量可至1μg，比Lowry法灵敏4倍。而且Bradford法还具有干扰物质少、测定快速、简便、特异性强等优点，现已在生物化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)样品处理：向交联透明质酸钠凝胶样品中加入无机酸溶液，于90-110℃温度下加热处理15-60min，然后加入无机碱溶液，得到处理后的样品溶液；/n(2)显色液配制：将考马斯亮蓝G250溶于醇类中，然后加入无机酸和表面活性剂，得到显色液；/n(3)标准曲线绘制：配制牛血清白蛋白贮备液，并稀释得到系列标准溶液，然后依次向系列标准溶液中加入步骤(2)中所述显色液，测定吸光度，绘制标准曲线；/n(4)蛋白测定：向步骤(1)中所述处理后的样品溶液中加入步骤(2)中所述显色液，测定550-650nm波长下的吸光度，通过标...

【技术特征摘要】
1.一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)样品处理：向交联透明质酸钠凝胶样品中加入无机酸溶液，于90-110℃温度下加热处理15-60min，然后加入无机碱溶液，得到处理后的样品溶液；
(2)显色液配制：将考马斯亮蓝G250溶于醇类中，然后加入无机酸和表面活性剂，得到显色液；
(3)标准曲线绘制：配制牛血清白蛋白贮备液，并稀释得到系列标准溶液，然后依次向系列标准溶液中加入步骤(2)中所述显色液，测定吸光度，绘制标准曲线；
(4)蛋白测定：向步骤(1)中所述处理后的样品溶液中加入步骤(2)中所述显色液，测定550-650nm波长下的吸光度，通过标准曲线确定交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的含量。


2.根据权利要求1所述的一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法，其特征在于，步骤(1)中所述交联透明质酸钠凝胶样品、无机酸溶液和无机碱溶液的用量比为2g:5mL:5mL。


3.根据权利要求1或2所述的一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法，其特征在于，所述无机酸溶液为浓度0.2mol/L-2mol/L的盐酸溶液或硫酸溶液。


4.根据权利要求1或2所述的一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法，其特征在于，所述无机碱溶液为浓度0.2mol/L～2mol/L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。


5.根据权利要求1所述的一种交联透明质酸钠凝胶蛋白残留的快速测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述显色液中考马斯亮蓝G250...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴剑英，卢秀妹，雒智杰，陈峰，张军，刘璐，张军东，
申请(专利权)人：上海昊海生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31