【技术实现步骤摘要】
一种生产病毒的方法及收获液组合物
本专利技术涉及生物
,具体而言,涉及一种生产病毒的方法、以及收获液组合物,更具体而言,涉及一种通过细胞培养来生产病毒的方法、以及用于收获经细胞培养的病毒的收获液组合物。
技术介绍
病毒类生物制品,包括溶瘤病毒药物、病毒类疫苗或重组病毒载体等,其制备过程一般包括:先将毒种接种于未感染的适宜代次的细胞上,当达到一定程度细胞病变时收获感染细胞,通过不同的方式裂解细胞后,收获病毒,然后通过密度梯度离心或层析方式纯化后得到原液,加入一定的缓冲液即成半成品,半成品经冻干或分装后即成为成品。目前病毒类生物制品生产用细胞的大规模培养,主要采用细胞工厂或发酵罐的方式,大部分扩增的病毒在胞内,因此在病毒的收获工艺中需要有效地破碎裂解细胞使病毒释放,并保证病毒颗粒的完整性。而不同的收获工艺对细胞的裂解程度和病毒颗粒的完整性的影响不同。收获方式直接影响病毒滴度,而收获的病毒原液的有效高滴度值是影响成品品质的重要因素。由于痘苗病毒、单纯疱症病毒、水痘带状疱疹病毒、腺病毒等属于细胞内病毒,具有很强的细胞结合活性,所以病毒收获时必须收集并破碎细胞才能得到游离的病毒颗粒。基于慢病毒、逆转录病毒、腺相关病毒的重组病毒载体,目前在实际包装生产过程中,只收获了细胞外的游离病毒,而大量的胞内病毒并没有得到充分的利用。目前在针对这些病毒的大规模生产过程中,大多采用了冻融法来裂解细胞收获胞内病毒。但冻融法存在能耗高、周期长、步骤多、不易放大、产量不稳定的缺点,限制了病毒类生物制品的生产规模。也有通 ...
【技术保护点】
1.一种生产病毒的方法,所述方法包括:/n培养细胞,其中所述细胞为已接种病毒或已转染病毒包装用元件的细胞;以及/n使培养得到的细胞与收获液组合物接触,一步收获病毒,其中所述收获液组合物包含:胰酶、pH缓冲液和任选的核酸酶,并且所述收获液组合物的pH为大于7.5且不超过10.5。/n
【技术特征摘要】
1.一种生产病毒的方法,所述方法包括:
培养细胞,其中所述细胞为已接种病毒或已转染病毒包装用元件的细胞;以及
使培养得到的细胞与收获液组合物接触,一步收获病毒,其中所述收获液组合物包含:胰酶、pH缓冲液和任选的核酸酶,并且所述收获液组合物的pH为大于7.5且不超过10.5。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述收获液组合物中,所述胰酶的浓度为0.01-0.12%(w/v),优选为0.03-0.06%(w/v)。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述收获液组合物中,所述核酸酶的浓度为1-100IU/ml,优选为1-50IU/ml,还优选为1-5IU/ml。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述收获液组合物的渗透压的范围为0-50mOsmol/kg或800-2500mOsmol/kg,优选为0-20mOsmol/kg或1785-2000mOsmol/kg,更优选为1-20mOsmol/kg。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述收获液组合物的pH为8.5-9.5。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述pH缓冲液选自Tris盐缓冲液、碳酸氢钠缓冲液。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述培养是通过细胞瓶、细胞工厂或发酵罐进行的,培养方式包括贴壁培养和悬浮培养。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,当所述培养的方式为贴壁培养时,所述收获液组合物的用量为大于等于35μl收获液组合物/cm2细胞,优选为大于等于70μl收获液组合物/cm2细胞;当所述培养的方式为悬浮培养时,所述收获液组合物的用量为大于等于35μl收获液组合物/105个细胞,优选为大于等于70μl收获液组合物/105个细胞。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述培养得到的细胞与所述收获液组合物接触的时间为5-60分钟。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述细胞选自Vero细胞、293细胞、CEF细胞、Hela细胞。
11.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述病毒包括:痘苗病毒、水痘-带状疱疹病毒、轮状病毒、EV71病毒、甲肝病毒、单纯疱疹病毒、慢病毒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、麻疹病毒、塞姆利基森林病毒、水疱性口炎病毒、脊髓灰质炎病毒、呼肠孤病毒、水疱性口炎病毒、脊髓灰质炎病毒、塞内卡谷病毒、埃可型肠道病毒、柯萨奇病毒、新城疫病毒和马拉巴病毒,优选为有包膜的病毒。
12.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述细胞为293...
【专利技术属性】
技术研发人员:柳云帆,王文波,张立明,陈茜,康三毛,
申请(专利权)人:杭州康万达医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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