一种猪卵巢氧化应激模型及其构建方法和用途技术

本发明专利技术属于氧化应激模型技术领域，具体涉及一种猪卵巢氧化应激模型的构建方法，具体使用溴氰菊酯对性成熟前的母猪进行腹腔内注射，连续注射14天，所述溴氰菊酯的注射剂量为1‑30mg/kg。本发明专利技术首次使用溴氰菊酯作为诱导母猪卵巢氧化损伤的应激源，并建立一种猪卵巢氧化应激模型，可以用于研究猪卵巢氧化损伤的发病机制，对于揭示猪卵巢氧化损伤机制及研发卵巢高效保护药物也具有重要的理论和实际意义。

【技术实现步骤摘要】
一种猪卵巢氧化应激模型及其构建方法和用途
本专利技术属于氧化应激模型
，具体涉及一种猪卵巢氧化应激模型及其构建方法和用途。
技术介绍
随着社会经济的发展，我国养猪的规模化与集约化程度越来越高，但由于对生产力的片面追求，养殖环境与猪生物特性的背离增加，从而造成猪遭受的应激大量增加。大量研究表明，各种应激因素，如冷应激、热应激、束缚应激、药物应激等均可引起机体氧化自由基的升高，诱发氧化应激，而氧化应激是影响母猪繁殖性能的重要因素，卵巢氧化应激不仅会影响卵泡发育和排卵数量，还能降低卵子和胚胎质量及影响早期胚胎发育能力，这些均会导致受胎率和妊娠率降低，进而增加了养殖成本。目前常用的建立猪氧化应激模型的方法主要是注射敌草快和饲喂氧化油脂。但是，敌草快经腹腔注射后会导致猪只出现呕吐、腹泻、厌食等更为严重的应激反应，从而影响了后续的试验结果；而氧化油脂的加工和应用条件很难控制，其产物种类复杂且含量差异较大，研究结果差异很大，作为应激源难以标准化。更为重要的是，敌草快和氧化油脂所构建的模型主要适用于猪只肠道氧化损伤的研究。目前利用模式动物(大鼠和小鼠)建立了卵巢氧化应激模型，所用药物主要是亚砷酸钠和3-硝基丙酸。但是，亚砷酸钠有剧毒，仅能用于模式动物，因此很难应用于家畜；而3-硝基丙酸剂量过大很容易引起中枢神经系统受损，如呕吐、眩晕、阵发性抽搐、眼球偏侧凝视、昏迷，甚至死亡等症状，容易造成试验结果的偏差，目前未见有针对母猪卵巢氧化应激模型的报道。
技术实现思路
本专利技术提供的一种猪卵巢氧化应激模型的构建方法，通过腹腔内注射溴氰菊酯构建了猪卵巢氧化应激模型，为研究猪卵巢氧化损伤的发病机制提供依据。本专利技术提供的一种猪卵巢氧化应激模型的构建方法，使用溴氰菊酯对性成熟前的母猪进行腹腔内注射，连续注射14天，所述溴氰菊酯的注射剂量为1-30mg/kg。上述猪卵巢氧化应激模型的构建过程具体为：选取健康的、性成熟前的半同胞母猪，注射用生理盐水配制的溴氰菊酯溶液，且注射剂量为1-30mg/kg，每日腹腔内注射1次，连续注射14天，所有的受试猪均进行自由采食、饮水。优选的，处理结束后，采集血液，并采集各脏器，检测并记录各脏器指标的变化，所述猪卵巢氧化应激模型判定标准为：ROS水平升高，卵巢组织中的抗氧化酶活性降低，卵巢组织中过氧化产物含量升高，颗粒细胞中ROS水平、凋亡阳性比例和有腔卵泡的闭锁比例增加，颗粒细胞中凋亡关键基因Fas和caspase-3的表达水平升高且活性水平升高，当以上指标的变化导致卵巢中卵泡损伤数量达到20％-25％时猪卵巢氧化应激模型构建成功。优选的，所述各脏器为双侧卵巢及脑、肝、肾、脾组织。优选的，所述双侧卵巢处理为：一侧卵巢分离出颗粒细胞，并进行活性氧检测，另一侧卵巢用4％多聚甲醛进行颗粒细胞凋亡染色分析。优选的，所述脑、肝、肾、脾组织进行匀浆利用比色法进行ROS测定。本专利技术还提供了上述方法构建的猪卵巢氧化应激模型。本专利技术还提供了所述的溴氰菊酯在构建猪卵巢氧化应激模型中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术首次使用溴氰菊酯作为诱导母猪卵巢氧化损伤的应激源，并建立一种猪卵巢氧化应激模型。2、本专利技术通过检测卵巢内颗粒细胞中活性氧(ROS)的水平、抗氧化物酶、凋亡相关基因的表达变化，确定了溴氰菊酯的最佳注射剂量，操作容易、结果稳定、可靠，对猪只不良反应影响小，对卵巢损伤特异性强，可作为猪只卵巢损伤模型的最佳应激源。3、本专利技术构建的猪卵巢氧化应激模型可以用于研究猪卵巢氧化损伤的发病机制。4、本专利技术通过建立猪卵巢氧化应激模型筛选出卵巢高效保护剂，应用于实际生产以提高卵泡发育质量和数量，从而提高母猪PSY水平，这对于揭示猪卵巢氧化损伤机制及研发卵巢高效保护药物具有重要的理论和实际意义。附图说明图1是实施例1中溴氰菊酯对不同组织中ROS水平的影响。图2是实施例1中溴氰菊酯对卵巢组织中的抗氧化酶活性及过氧化产物含量的影响；其中，图2-A表示溴氰菊酯对卵巢组织中的超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响；图2-B表示溴氰菊酯对卵巢组织中的谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性的影响；图2-C表示溴氰菊酯对卵巢组织中的过氧化氢酶(CAT)活性的影响；图2-D表示溴氰菊酯对卵巢组织中过氧化产物丙二醛(MDA)含量的影响。图3是实施例1中溴氰菊酯对卵泡颗粒细胞中ROS水平、颗粒细胞凋亡数量、有腔卵泡闭锁率的影响；其中，图3-A表示溴氰菊酯对卵泡颗粒细胞中ROS水平的影响；图3-B表示颗粒细胞凋亡数量的影响；图3-C表示溴氰菊酯对有腔卵泡闭锁率的影响。图4是实施例1中溴氰菊酯对颗粒细胞中凋亡关键基因Fas和caspase-3的表达水平的影响；其中，图4-A表示溴氰菊酯对颗粒细胞中凋亡关键基因Fas和caspase-3的表达水平；图4-B表示溴氰菊酯对颗粒细胞中caspase-3活性的影响。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件操作，由于不涉及专利技术点，故不对其步骤进行详细描述。实施例1一种猪卵巢氧化应激模型的构建方法，具体过程为：选取24头健康的、体重在35±2.5kg的、性成熟前的半同胞母猪，按照体重相接近的原则分成4个组，每组6个重复，每个重复1头猪，分别设为一个对照组和三个实验组，所述三个实验组分别为：1mg/kg溴氰菊酯组、5mg/kg溴氰菊酯组、10mg/kg溴氰菊酯组，三个试验组按每头用生理盐水配制相应浓度的溶液，对照组注射相同剂量的生理盐水，对照组和试验组分别每日腹腔内注射1次(上午8:00)，连续注射14天，对照组和试验组均进行自由采食、饮水，处理结束后，采集血液，并采集各脏器，检测并记录各脏器指标的变化；表1实验具体分组及处理方式腹腔内注射给药过程为：一人将猪只后腿提起，另一人手持10ml的注射器，选择适宜针头(7-9号针头)，为防止注射器刺入时损伤内脏器官，应将猪后腹部皮肤拉起形成一个倒立三角形，然后从靠近母猪倒数第一至第二对乳头的位置倾斜30度进行进针，在腹部皮下穿刺一小段距离时应进行试探，若未遇阻力，说明针头已成功进入腹腔肠道间隙，注射完药物后，缓缓拔出针头，并轻微旋转针头，防止漏液，注射时的动作要轻柔，防止刺伤腹部器官；每天记录饲料消耗量，在试验第0、7、14天空腹称受试猪个体重，计算每周及全期的平均日增重和平均日采食量，试验结束后，在无菌条件下迅速收集双侧卵巢及脑、肝、肾、脾等组织，在冰冷的生理盐水中清洗3次；从一侧卵巢中分离出颗粒细胞，并进行活性氧(ROS)检测，另一侧卵巢用4％多聚甲醛进行颗粒细胞凋亡染色分析；脑、肝、肾、脾等组织进行匀浆利用比色法进行ROS测定，剩余组织样品进行RNA提取及氧化损伤相关基因定量分析检本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪卵巢氧化应激模型的构建方法，其特征在于，使用溴氰菊酯对性成熟前的母猪进行腹腔内注射，连续注射14天，所述溴氰菊酯的注射剂量为1-30mg/kg。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪卵巢氧化应激模型的构建方法，其特征在于，使用溴氰菊酯对性成熟前的母猪进行腹腔内注射，连续注射14天，所述溴氰菊酯的注射剂量为1-30mg/kg。


2.根据权利要求1所述的猪卵巢氧化应激模型的构建方法，其特征在于，所述溴氰菊酯的注射剂量为5-10mg/kg。


3.根据权利要求2所述的猪卵巢氧化应激模型的构建方法，其特征在于，具体过程为：选取健康的、性成熟前的半同胞母猪，注射用生理盐水配制的溴氰菊酯溶液，且注射剂量为1-30mg/kg，每日腹腔内注射1次，连续注射14天，所有的受试猪均进行自由采食、饮水。


4.根据权利要求3所述的猪卵巢氧化应激模型的构建方法，其特征在于，处理结束后，采集血液，并采集各脏器，检测并记录各脏器指标的变化，所述猪卵巢氧化应激模型判定标准为：ROS水平升高，卵巢组织中的抗氧化酶活性降低，卵巢组织中过氧化产物含量升高，颗粒细胞中ROS水平、凋亡阳...

【专利技术属性】
技术研发人员：张家庆，王献伟，卢清侠，申明，任巧玲，李彦朋，徐泽君，胡言，邢宝松，王璟，陈俊峰，
申请(专利权)人：河南省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41