本发明专利技术公开了一种肾纤维化早期筛查分子标志物，所述分子标志物为miR‑219a‑2‑3p；所述分子标志物与肾纤维化的发生相关。进一步，本发明专利技术提供了将miR‑219a‑2‑3p用于制备肾纤维化的早期筛查试剂盒，可用于诊断miR‑219a‑2‑3p相关的肾纤维化，从而为有针对性地治疗该疾病提供依据。本发明专利技术提供了将miR‑219a‑2‑3p用于制备预防和/或治疗肾纤维化的药物组合物，其中所述miR‑219a‑2‑3p或其模拟物可以促进E‑cadherin表达，抑制Vimentin表达，有利于缓解和/或治疗肾纤维化。
【技术实现步骤摘要】
一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种肾纤维化早期筛查分子标志物及其应用。
技术介绍
慢性肾脏疾病是严重威胁人类健康的常见疾病。肾纤维化(renalfibrosis,RF)是慢性肾病的主要病理特征之一，它是肾脏的功能由健康到损伤，再到损坏，直至功能丧失的渐进过程。肾纤维化的主要特征在于肾小管和肾小管周围毛细血管之间的区域病理性纤维状基质的沉积。在病理条件下，肾小管上皮细胞可分化成间充质细胞和活化的成纤维细胞，最终形成肌成纤维细胞，该过程被称为上皮间质转化(Epithelial–MesenchymalTransition，EMT)。肾脏由于受到创伤、感染、炎症、血循环障碍，以及免疫反应等多种致病因素刺激，其固有细胞受损，发展到后期出现大量胶原沉积和积聚，造成肾实质逐渐硬化，形成瘢痕，直至肾脏完全丧失脏器功能。肾纤维化发生机制较为复杂，与多种因素有关，其中主要与细胞外基质细胞产生细胞的增殖和活化、血管活性物质、细胞因子以及细胞外基质转换失衡有关，肾间质纤维化几乎是所有原发或继发肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径。肾纤维化的程度与患者预后密切相关。随着临床上肾功能的进行性下降，从病理上将肾纤维化分成炎症反应期、纤维化形成期和瘢痕形成期。其中，炎症反应期和纤维化形成期是可逆期，如能在可逆期尽早对肾功能受损的患者做出诊断和干预，这对于减缓和逆转慢性肾病的进程，改善肾脏功能，指导临床治疗，提高肾病患者的生活质量具有重要意义。miRNA(microRNA)是一类长度为20～25个核苷酸的非编码小分子RNA，涉及多种生物学过程，包括对发育时机、凋亡、脂肪代谢和造血细胞分化等的调节，通过影响其靶基因的稳定性或抑制其翻译转录水平来调控细胞的分化、增殖和凋亡。miRNA广泛表达于人体各个组织和器官，在机体的病理生理过程中发挥着广泛的作用；同时，miRNA有显著的组织特异性，不同的组织器官中miRNA的表达强度是截然不同的。研究表明，miRNA在细胞中表达失调会导致肾脏纤维化在内的多种疾病的发生，miRNA在各种原因所致肾间质纤维化进程中有明确的特异性表达，为肾纤维化机制的研究提供了良好的前景和平台，也为肾纤维化治疗的靶点提供新的思路。一些miRNA在肾纤维化患者肾脏和尿液中异常表达，提示miRNA与肾纤维化的发生、发展有关。因此，寻找与肾纤维化发生、发展有关的miRNA，可以为临床上诊断和治疗肾纤维化提供有效的手段。
技术实现思路
为了寻找与肾纤维化发生、发展有关的miRNA，本专利技术目的在于提供一种肾纤维化早期筛查分子标志物—miR-219a-2-3p及其应用。为实现上述目的，本专利技术具体技术方案如下：本专利技术首先提供一种肾纤维化早期筛查分子标志物，所述分子标志物为miR-219a-2-3p；所述分子标志物与肾纤维化的发生相关。在一些实施方式中，所述miR-219a-2-3p在肾纤维化细胞中表达下调。进一步地，本专利技术提供了所述的分子标志物在制备肾纤维化早期筛查试剂盒中的应用。在一些实施方式中，所述试剂盒包含检测miR-219a-2-3p基因表达水平的试剂，以及如何使用所述试剂盒的说明。在一些实施方式中，所述试剂包括用于检测miR-219a-2-3p的引物对或探针。在一些实施方式中，所述检测miR-219a-2-3p的引物的核苷酸序列分别为SEQIDNO:2所示的反转录引物，以及SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的cDNA扩增引物对。更进一步地，本专利技术提供了所述的分子标志物在制备预防和/或治疗肾纤维化药物组合物中的应用。在一些实施方式中，所述药物组合物包含miR-219a-2-3p或其模拟物以及药物可接受的辅料。在一些实施方式中，所述miR-219a-2-3p能促进E-cadherin的表达，降低Vimentin的表达，从而抑制引起肾纤维化的EMT途径发生。E-cadherin(E钙粘蛋白)是细胞黏附分子钙黏蛋白家族中重要成员，其在维持细胞间黏附性、细胞极性及细胞间信息传递方面发挥重要作用。其表达降低或缺失是EMT最显著的特征。Vimentin(波形蛋白)作为中间丝蛋白家族的主要成员，几乎表达于所有正常的间质细胞中，对维持细胞完整性和抵御外界应急的损伤起了重要的作用。是EMT显著标志物。更进一步地，本专利技术提供了miR-219a-2-3p在筛选预防或治疗肾纤维化的候选药物中的应用，所述候选药物能上调细胞或组织中miR-219a-2-3p表达水平。在一些实施方式中，所述候选药物包括miR-219a-2-3p模拟物和/或化合物。基于上述技术方案，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术利用miR-219a-2-3p分子标志物检测肾纤维化不仅能够快速有效的做到早期检测，而且为基因治疗、药物治疗等临床应用提供了治疗靶点和重要依据。本专利技术还公开将miR-219a-2-3p用于制备检测肾纤维化的早期筛查试剂盒，可用于诊断miR-219a-2-3p相关的肾纤维化，从而为有针对性地治疗该疾病提供依据。本专利技术将miR-219a-2-3p用于制备预防和/或治疗肾纤维化的药物组合物，其中所述miR-219a-2-3p或其模拟物可以促进E-cadherin，抑制Vimentin的表达，有利于缓解和/或治疗肾纤维化。附图说明图1为相比正常对照HK-2细胞，在由TGF(转化生长因子)-β诱导的EMT(上皮细胞间充质转化)细胞模型中，肾纤维化HK-2细胞的miR-219a-2-3p的相对表达量显著降低；图2A为通过HE和masson染色观察，未经UOO处理的对照(Ctrl)组小鼠的肾组织细胞具有典型的鹅卵石样形态特征，胞间衔接紧密；经UOO处理小鼠单侧肾组织细胞显示出梭形的形态，细胞间间隙明显，细胞较为瘦缩，类似成纤维细胞的形态；图2B为相比对照大鼠，在肾纤维化模型大鼠组织中，miR-219a-2-3p的相对表达量显著降低；图3为转染miR-219a-2-3pmimic的HK-2细胞中，E-cadherin表达相比对照(Ctrl)细胞明显增加，Vimentin表达相比对照(Ctrl)细胞明显降低，而与肾纤维化不相关的微管蛋白tubulin的表达则没有发生明显变化。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。本专利技术的专利技术人在对肾纤维化的相关研究中发现miR-219a-2-3p在肾纤维化的细胞模型或动物模型中含量显著降低。进一步，专利技术人通过miR-219a-2-3p模拟物(mimic)转染肾纤维化HK-2细胞中，发现miR-219a-2-3pmimic可以促进E-cadherin表达，抑制Vimentin表达，进而有利于缓解和/或治疗肾纤维化对象或患者的肾纤维化。证实了miR-219a-2-3p是与肾纤维化显著相关的标志物。在本专利技术中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种肾纤维化早期筛查分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为miR-219a-2-3p；所述分子标志物与肾纤维化的发生相关。/n
【技术特征摘要】
1.一种肾纤维化早期筛查分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为miR-219a-2-3p；所述分子标志物与肾纤维化的发生相关。
2.如权利要求1所述的分子标志物，其特征在于，所述miR-219a-2-3p在肾纤维化细胞中表达下调。
3.权利要求1或2所述的分子标志物在制备肾纤维化早期筛查试剂盒中的应用。
4.如权利要求3述的应用，其特征在于，所述试剂盒包含检测miR-219a-2-3p基因表达水平的试剂，以及如何使用所述试剂盒的说明。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂包括用于检测miR-219a-2-3p的引物对或探针。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述检测miR-219a-2-3p的引物...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔健，姜薇，赵帆，
申请(专利权)人：河北仁博科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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