XRK3F2在制备治疗白血病的药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及医药领域，特别涉及XRK3F2在制备治疗白血病的药物中的用途。本发明专利技术p62小分子抑制剂XRK3F2对于MLL‑AF9 AML小鼠白血病干祖细胞及人白血病干祖细胞均具有良好的抑制作用，可为日后临床治疗提供新的方法。

【技术实现步骤摘要】
XRK3F2在制备治疗白血病的药物中的用途
本专利技术涉及医药领域，特别涉及XRK3F2在制备治疗白血病的药物中的用途。
技术介绍
白血病是一种常见的血液系统恶行肿瘤，其中急性髓系白血病(AcuteMyeloidLeukemia,AML)是所有白血病中最常见的一类起源于造血干、祖细胞的恶性克隆性造血系统疾病，其愈后较差，肿瘤异质性高，并且在老人及儿童患者中均易出现耐药复发的问题。目前认为，白血病干细胞(leukemiastemcells,LSCs)作为AML中具有干细胞特点的一群肿瘤细胞，不仅是白血病恶性克隆的起源，还是导致白血病耐药及复发的根源。迄今为止，经典的AML治疗方案依然是基于蒽环类药物联合阿糖胞苷的诱导缓解方案(“7+3”化疗方案)及异基因造血干细胞移植。近年来，随着对AML在基因水平上发病机制的深入研究，有多种新型的靶向治疗药物相继问世，如FLT3,IHD1,BCL-2及Hedgehog信号通路抑制剂等。自噬是真核细胞内一种高度保守的通过溶酶体降解途径介导的自身错误折叠蛋白质或受损细胞器及时清除的生理过程，对维持细胞稳态起重要作用。p62/SQSTM1(Sequestosome1)蛋白是一种重要的选择性自噬接头蛋白，在清除泛素化蛋白过程中作为受体参与其中。多项研究表明，细胞内p62异常聚集会导致胶质母细胞瘤、肝癌，乳腺癌及慢性淋巴细胞性白血病等的恶变或进展，在全反式维甲酸治疗成人AML过程中，p62可通过激活NF-κB信号通路对白血病细胞有一定保护作用，而在Hoxa9/Meis1及MN1的AML小鼠模型中的研究表明，敲除p62基因可通过损伤线粒体自噬通路来延缓白血病进展。这些研究结果表明，p62可能是治疗白血病的一个有效靶点。在过去几十年研究中，尽管有大量证据表明自噬是一条很有潜力的靶向杀伤肿瘤细胞的信号通路，也陆续有相关化合物进入临床试验，但此通路相关的特异性调节剂(激动剂或抑制剂)尚未在临床应用。临床上使用的雷帕霉素、氯喹及羟氯喹等几种药物均被认为有激活或抑制自噬的作用，但它们起初的开发并不是因为其自噬调节作用。自噬调节剂在临床应用中的发展障碍之一是药物的特异性。目前多种激活或抑制自噬作用的药物都缺乏特异性，包括对靶点的特异性不高及对不同细胞类型的作用有别。因此，开发靶向单一靶点的自噬通路调节剂对临床药物研究具有重要意义。XRK3F2是一个通过3D同源模建及虚拟筛选分子对接研究发现的一个特异性靶向p62的ZZ结构域的小分子化合物，在多发性骨髓瘤骨病研究中，XRK3F2可有效抑制多发性骨髓瘤的生长及破骨细胞的形成，且不影响正常造血过程。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供了XRK3F2在制备治疗白血病的药物中的用途；XRK3F2的结构式如下所示：本专利技术采用的技术方案为：本专利技术提供了XRK3F2在制备治疗白血病的药物中的用途。本专利技术还提供了XRK3F2在制备治疗耐药白血病的药物中的用途。本专利技术还提供了XRK3F2在制备靶向杀伤白血病干细胞的药物中的用途。本专利技术所具有的有益效果:本专利技术p62小分子抑制剂XRK3F2对于MLL-AF9AML小鼠白血病干祖细胞及人白血病干祖细胞均具有良好的抑制作用，可为日后临床治疗提供新的方法。附图说明图1.实施例2中XRK3F2对人敏感白血病细胞杀伤作用统计分析图；图2.实施例2中XRK3F2对人耐药白血病细胞杀伤作用统计分析图；图3.实施例3中XRK3F2对小鼠原代白血病细胞杀伤作用典型流式图及统计分析图；图4.实施例4中XRK3F2对小鼠原代白血病干细胞一次克隆形成能力的统计分析图及代表性克隆形态图片；图5.实施例4中XRK3F2对小鼠原代白血病干细胞二次克隆形成能力的统计分析图及代表性克隆形态图片；图6.实施例5中XRK3F2对小鼠原代白血病LSCfrequency的统计分析图及小鼠分组实施方案；图7.实施例5中小鼠移植白血病细胞后生存情况统计分析图；图8.实施例6中移植后NOG小鼠骨髓中人白血病细胞植入率水平统计分析图；图9.实施例7XRK3F2对小鼠原代白血病细胞作用机理研究图；图10.实施例8中XRK3F2对小鼠正常骨髓单个核细胞及造血干细胞杀伤作用统计分析图；图11.实施例9中XRK3F2对小鼠正常骨髓造血干细胞克隆形成能力的统计分析图及代表性克隆形态图片。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不限定本专利技术的保护范围。XRK3F2对人白血病细胞系及耐药细胞株的IC50值为6.4-8.8μM，对MLL-AF9AML白血病小鼠模型来源的白血病干细胞的IC50值为6μM，在免疫缺陷小鼠移植人白血病细胞动物模型中的有效浓度为40mg/kg(腹腔注射)。实施例1一种靶向p62的小分子抑制剂XRK3F2，其结构为：实施例2XRK3F2细胞系水平分析，包括如下步骤：采用CCK8法，对XRK3F2对白血病细胞系及耐药性白血病细胞的杀伤活性进行验证，通过IC50分析可知，XRK3F2对白血病细胞系及耐药白血病的杀伤效果明显。1)CCK8法检测XRK3F2对白血病细胞系杀伤的实验方法:(1)从液氮中复苏冻存的肿瘤细胞系(HL60、HL60/ADR、K562、K562/A02)。冻存细胞从液氮中取出后放入37℃水浴中，融化后立即1000转离心8分钟，用新鲜的1640培养基重悬。放入37℃细胞培养箱中进行培养。(2)当细胞处于对数期时，收集一定量的细胞，调节细胞浓度为2.5×104/ml(即5×103cell/孔/90μL)。按照每孔90μL加入至96孔板中，边缘孔用无菌PBS补充。(3)稀释XRK3F2的浓度。原液为20mM，按照稀释浓度每孔加入10μl的XRK3F2，每个浓度设置5个复孔，设置11个浓度，分别为20μM、10μM、5μM、2.5μM、1.25μM、0.625μM、0.3125μM、0.156μM、0.078μM、0.039μM、0μM。(4)将加入XRK3F2后的细胞96孔板放置于37℃细胞培养箱，5％CO2培养72小时。(5)在每孔细胞悬液中加入10μlCCK8溶液(Dojindo)，放入细胞培养箱中继续培养3-4小时。(6)在酶标仪上检测OD450nm，测量各孔的吸光值。(7)根据得出的OD值，用Prism8软件分析，计算得出XRK3F2对肿瘤细胞系的IC50值。HL60：人急性髓系早幼粒细胞系HL60/ADR：人耐阿霉素急性髓系早幼粒细胞系K562：慢性粒细胞白血病细胞系K562/ADR：人耐阿霉素慢性粒细胞白血病细胞系采用以上细胞系，对XRK3F2对敏感及耐药白血病细胞系的效果进行分析。2)结果分析由图1、2可以得知，XRK3F2对HL60和K562细胞的I本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.XRK3F2在制备治疗白血病的药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.XRK3F2在制备治疗白血病的药物中的用途。


2.XRK3F2在制备治疗耐药...

【专利技术属性】
技术研发人员：高瀛岱，李迎辉，李亚芳，杨铭，尹晶晶，王超群，张文姗，何媚，徐惠，
申请(专利权)人：中国医学科学院血液病医院中国医学科学院血液学研究所，
类型：发明
国别省市：天津;12