一种高纯度通用型CAR-T的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物细胞技术领域，具体涉及一种高纯度通用型CAR‑T的制备方法及应用。一种高纯度通用型CAR‑T的制备方法，所述通用型CAR‑T的CAR的表达率为100％。本发明专利技术高纯度通用型CAR‑T的制备方法利用crispr‑cas9技术敲除T细胞TCR的TRAC和HLA‑I的B2M基因，以制备通用型CAR‑T，并且使通用型CAR‑T的CAR的表达率达到100％，减少输注至人体中的CAR(‑)TCR(‑)T细胞量，从而降低不可知的风险。

【技术实现步骤摘要】
一种高纯度通用型CAR-T的制备方法及应用
本专利技术涉及生物细胞
，具体涉及一种高纯度通用型CAR-T的制备方法及应用。
技术介绍
近几年来，肿瘤免疫疗法发展迅速，尤其是过继性细胞疗法(ACT)，即指从病人体内分离出T细胞、NK细胞等免疫细胞，通过体外修饰扩增培养，随后回输入患者体内进行肿瘤治疗的方法。2013年，肿瘤的免疫疗法被Science杂质评为“十大突破”之首。CAR-T和TCR-T是过继性细胞疗法重要的组成部分，尤其CAR-T疗法，在血液肿瘤的治疗上取得了显著的成就，取得了较高的缓解率，典型的CAR结构由三部分组成，胞外识别肿瘤抗原的scFv、铰链和跨膜结构域、胞内共刺激信号和激活结构域。第一代的CAR并不包含胞内共刺激信号，CAR-T细胞的杀伤活性较低且生存时间较短。因此，第二代CAR开始加入共刺激信号如CD28和4-1BB，采用不同的共刺激信号的CAR-T细胞的特性也不尽相同，CD28增强了CAR-T细胞的杀伤活性而4-1BB则增强CAR-T细胞杀伤活性的同时延长了CAR-T细胞的生存时间。随后，出现了共同表达两个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高纯度通用型CAR-T的制备方法，其特征在于，所述通用型CAR-T的CAR的表达率为100％。/n

【技术特征摘要】
1.一种高纯度通用型CAR-T的制备方法，其特征在于，所述通用型CAR-T的CAR的表达率为100％。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法利用crispr-cas9技术敲除T细胞中会引起引起移植物抗宿主反应或者宿主抗移植物反应的基因。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法将表达gRNA的基因和表达CAR的基因放在一个载体上共同转入T细胞。


4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法中基因转入方式为：慢病毒、逆转录病毒、普通质粒载体、附加体载体、纳米递送系统、电转导、转座子和/或其它递送系统。


5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法中cas9蛋白的转入方式为利用AVV病毒、电转导、脂质体和/或转座子的转染方式将cas9蛋白的mRNA或者蛋白或者含cas9基因的质粒转入...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丽雅，谢海涛，薛卫巍，
申请(专利权)人：广东先康达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44