一种重组精氨酸脱亚胺酶突变体、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种重组精氨酸脱亚胺酶突变体、其制备方法及应用。本发明专利技术通过定向进化，对重组精氨酸脱亚胺酶基因(氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示)进行改造，从2万个克隆中筛选得到有益突变，进一步通过组合突变得到最优突变体M15。所述最优突变体M15的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术制备的重组精氨酸脱亚胺酶突变体的酶活性大幅提高，催化效率大幅增加。可用于制备抗肿瘤(抗肝癌、黑色素瘤、前列腺癌)药物。

【技术实现步骤摘要】
一种重组精氨酸脱亚胺酶突变体、其制备方法及应用
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种重组精氨酸脱亚胺酶突变体，其制备方法及其在抗肿瘤方面的应用。
技术介绍
精氨酸脱亚胺酶(Argininedeiminase，ADI，EC3.5.3.6)，能够降解精氨酸，因此被认为是极具潜力的用于治疗精氨酸缺陷型肿瘤的新型抗癌药。目前研究报道，精氨酸脱亚胺酶对肝细胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)、黑素瘤(Melanoma)具有显著的疗效。体内精氨酸可由瓜氨酸合成，正常细胞可以通过尿素循环由精氨酸琥珀酸合成酶(Argininosuccinatesynthetase，ASS)和精氨酸琥珀酸裂解酶(Argininosuccinatelyase，ASL)催化瓜氨酸得到精氨酸；精氨酸缺陷型肿瘤细胞则缺少精氨酸琥珀酸合成酶，不能自我合成精氨酸。而精氨酸是体内重要的氨基酸，参与肽和蛋白质的合成及大量的细胞代谢通路。肿瘤细胞为生存需要大量的精氨酸，必须从血清中获得精氨酸，因此剥夺外源性的精氨酸成为精氨酸缺陷型肿瘤的治疗手段之一。癌症是危害现本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组精氨酸脱亚胺酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组精氨酸脱亚胺酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.根据权利要求1所述的重组精氨酸脱亚胺酶，其特征在于：编码所述的重组精氨酸脱亚胺酶基因的核苷酸序列为SEQIDNO.2。


3.一种重组精氨酸脱亚胺酶突变体，其特征在于：所述重组精氨酸脱亚胺酶突变体是将如SEQIDNO.1所示氨基酸序列的第30位、第37位、第38位、第405位进行单突变或多突变获得的。


4.根据权利要求3所述的重组精氨酸脱亚胺酶突变体，其特征在于：所述重组精氨酸脱亚胺酶突变体为下列之一：(1)第30位甲硫氨酸突变为精氨酸；(2)第37位半胱氨酸突变为赖氨酸；(3)第38位天冬氨酸突变为组氨酸；(4)第405位组氨酸突变为精氨酸；(5)包括(1)-(4)中的任意2-4个突变位点。


5.根据权利要求3所述的重组精氨酸脱亚胺酶突变体，其特征在于：4个位点全部突变的重组精氨酸脱亚胺酶突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。


6.一种如权利要求3所述的重组精氨酸脱亚胺酶突变体的应用，其特征在于，用于制备治疗黑色素瘤、肝癌和前列腺癌的药物。


7.一种如权利要求3所述的重组精氨酸脱亚胺酶突变体的制备方法，其特征在于，将含重组精氨酸脱亚胺酶突变体基因的工程菌经发酵培养后的发酵液离心，收集湿菌体，将湿菌体超声破碎，获得含重组精氨酸脱亚胺酶突变体的粗酶液，通过分离纯化得到重组精氨酸脱亚胺酶突变体。


8.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏李群，陈祎，李恭会，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33