一种产MTSase和MTHase的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种产MTSase和MTHase的方法及应用，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明专利技术通过PCR获得地衣芽孢杆菌来源的鼠李糖诱导启动子和古细菌嗜热硫化叶菌来源的MTSase、MTHase编码基因，并构建重组质粒pBSL‑Prha‑MTSase和pBSL‑Prha‑MTHase；将两个重组质粒分别转化至地衣芽孢杆菌，得到两种重组地衣芽孢杆菌；以两种重组地衣芽孢杆菌为混合发酵菌种，利用鼠李糖诱导发酵生产MTSase和MTHase。本发明专利技术以食品安全的地衣芽孢杆菌为表达宿主，以发酵原料中不常用的鼠李糖作为诱导剂，实现MTSase和MTHase的重组表达，且菌株生长迅速，产酶水平高，生产成本低。

【技术实现步骤摘要】
一种产MTSase和MTHase的方法及应用
本专利技术涉及一种产MTSase和MTHase的方法及应用，属于基因工程和酶工程

技术介绍
海藻糖是一种广泛存在于低等植物、细菌、真菌等生物体中的非还原性二糖。它是麦芽糖的同分异构体，由两分子葡萄糖通过α-1,1-糖苷键相连而成。海藻糖化学性质稳定，不具还原性，不易被酸水解，具有稳定生物膜和蛋白质结构的突出功能，因而广泛应用于生物制剂、医药、食品、化妆品等领域。在食品领域，海藻糖主要作为甜味剂、保鲜剂、抗变性剂、脱水剂被广泛使用。海藻糖早期主要从干酵母中提取，提取工艺复杂，产率低。工业生产海藻糖主要有合成法、发酵法、酶转化法。其中酶转化法具有转化率高、转移性强、作用温和、无污染等优点，被认为是最有发展潜力的海藻糖工业生产方法。酶转化法可分为以葡萄糖、麦芽糖和淀粉为底物三大类。其中以淀粉为底物，依靠麦芽寡糖基海藻糖合成酶(MTSase)和麦芽寡糖基海藻糖水解酶(MTHase)可将直链淀粉转化为海藻糖，原料成本最低。MTSase作用于直链淀粉还原性末端，将α-1,4糖苷键转化为α-1,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产MTSase和MTHase的混合发酵菌种，其特征在于，所述混合发酵菌种是将pBSL-Prha-MTSase和pBSL-Prha-MTHase分别转化到地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)中，得到两种重组地衣芽孢杆菌，将两种重组地衣芽孢杆菌混合得到混合发酵菌种；/n所述pBSL-Prha-MTSase的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；/n所述pBSL-Prha-MTHase的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种产MTSase和MTHase的混合发酵菌种，其特征在于，所述混合发酵菌种是将pBSL-Prha-MTSase和pBSL-Prha-MTHase分别转化到地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)中，得到两种重组地衣芽孢杆菌，将两种重组地衣芽孢杆菌混合得到混合发酵菌种；
所述pBSL-Prha-MTSase的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；
所述pBSL-Prha-MTHase的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。


2.根据权利要求1所述的混合发酵菌种，其特征在于，所述pBSL-Prha-MTSase和pBSL-Prha-MTHase中引入了鼠李糖启动子Prha，所述鼠李糖启动子Prha的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


3.根据权利要求2所述的混合发酵菌种，其特征在于，所述鼠李糖启动子Prha来源于地衣芽孢杆菌ATCC14580、地衣芽孢杆菌ATCC12759、地衣芽孢杆菌ATCC9945、地衣芽孢杆菌ATCC13438或地衣芽孢杆菌ATCC9259。


4.根据权利要求1所述的混合发酵菌种，其特征在于，所述两种重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：石贵阳，李由然，张梁，丁重阳，徐沙，顾正华，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32