一种布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。提供的eryA基因缺失株相较于布鲁氏菌野生株缺失了全部eryA基因，当用作布鲁氏菌疫苗株时，可以通过检测该eryA基因来区分布鲁氏菌野生株和eryA基因缺失株，进而区分布鲁氏菌自然感染和人工免疫，实现对布鲁氏菌病进行有效净化。提供的eryA基因缺失株的构建方法中采用PCR鉴定和单菌落测序验证，可以获得纯的eryA基因缺失的布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株，结果可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株及其构建方法和应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株及其构建方法和应用。
技术介绍
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌(B.melitensis)引起的一种人兽共患传染病。布鲁氏菌感染家畜可引起母畜流产，也可引起其它症状(如子宫炎、睾丸炎和乳腺炎)，人感染该病菌后关节肿大，出现马耳他热症状且不易恢复。布鲁氏菌的主要宿主为羊、牛、猪等。布鲁氏菌Rev.1疫苗(B.melitensisRev.1vaccine)已被证实对山羊具有良好的保护作用，但该疫苗不能通过常规血清学检测和诊断方法来区分自然感染(布鲁氏菌野生株)和人工免疫(布鲁氏菌疫苗株)，因而不能有效对布鲁氏菌病进行净化。
技术实现思路
针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术的一个方面提供一种布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株，其相较于布鲁氏菌Rev.1完全缺失了eryA基因，且能够稳定连续传代。本专利技术另一方面提供了上述的布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株，其特征在于，所述eryA基因缺失株相较于布鲁氏菌Rev.1完全缺失了eryA基因，且能够稳定连续传代。/n

【技术特征摘要】
1.一种布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株，其特征在于，所述eryA基因缺失株相较于布鲁氏菌Rev.1完全缺失了eryA基因，且能够稳定连续传代。


2.权利要求1所述的布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株的构建方法，其包括以下步骤：
1)PCR扩增获得eryA基因的上下游同源臂，分别命名为：eryA-1和eryA-2；
2)PCR扩增获得自杀基因SacB；
3)将步骤1)获得的eryA-1和eryA-2以及步骤2)获得的自杀基因SacB顺序插入pBK-CMV质粒中，获得自杀质粒pBK-CMV-eryA-SacB，命名为pBK-ΔeryA-SacB；
4)将步骤3)获得的自杀质粒pBK-ΔeryA-SacB电转化至布鲁氏菌Rev.1感受态细胞中，筛选获得布鲁氏菌Rev.1的eryA基因缺失株。


3.根据权利要求2所述的方法，步骤1)中用于PCR扩增获得eryA基因的上游同源臂的上下游引物核苷酸序列分别为：SEQIDNO:1所示的eryA-1-F和SEQIDNO:2所示的eryA-1-R，用于PCR扩增获得eryA基因的下游同源臂的上下游引物的核苷酸序列分别为：SEQIDNO:3所示的eryA-2-F和SEQIDNO:3所示的eryA-2-R。


4.根据权利要求2或3所述的方法，步骤2)中用于PCR扩增获得自杀基因Sac...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋前进，刘建奇，赵丹彤，吴梅花，白白音宝力高，关平原，温永俊，
申请(专利权)人：金宇保灵生物药品有限公司，内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15