一种空肠弯曲杆菌外膜囊泡的提取及纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种空肠弯曲杆菌外膜囊泡的提取及纯化方法，包括以下方法：S1培养空肠弯曲杆菌，获得菌液；S2提取菌液外膜囊泡，获得粗提的外膜囊泡；S3采用Optiprep密度梯度离心法纯化粗提的外膜囊泡。本发明专利技术的将超速离心法和Optiprep密度梯度离心法相结合提取纯化空肠弯曲杆菌外膜囊泡，Optiprep梯度离心液浓度为35％的位置回收OMVs。本发明专利技术的方法还优化了空肠弯曲杆菌的培养基和培养条件，提高了空肠弯曲杆菌的生长率，这有利于获得更多的OMVs的，增加了OMVs的量。通过本发明专利技术的方法制备OMVs减少了杂质纯度更高。

【技术实现步骤摘要】
一种空肠弯曲杆菌外膜囊泡的提取及纯化方法
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种空肠弯曲杆菌外膜囊泡的提取及纯化方法。
技术介绍
外膜囊泡(outermembranevesicles,OMVs)是细菌在生长过程中分泌到细胞外的大小为10-300nm的球形微粒，主要存在于革兰氏阴性菌中。其天然成分主要为脂多糖、磷脂、外膜蛋白、内膜蛋白、DNA/RNA、外毒素等。OMVs表现出了丰富多样的生物学功能。首先细菌OMVs对细菌生物膜形成有一定影响作用，能增强细菌生物膜形成能力及维持生物膜的稳定，为研究生物膜的形成机制提供了新角度和新方向。OMVs是分泌在细菌外膜表面的物质，可作为传递工具，携带和运输细菌的毒力因子，比如蛋白质、脂质、脂多糖及其他的活性物质，并将所带的毒力成分传递给宿主细胞，引起宿主细胞的感染。细胞与细胞之间、细胞与环境之间，OMVs能作为独立的分泌系统，传递细菌DNA/RNA、活性蛋白及小的信号分子，促进细胞间及细胞与外界的交流。同时作为一种新型的载体，能将OMVs进行不同的改造，例如将酶、蛋白质等成分包裹进OMVs，让其传递至宿主本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种空肠弯曲杆菌外膜囊泡的提取及纯化方法，其特征在于，包括以下方法：/nS1培养空肠弯曲杆菌，获得菌液；/nS2提取菌液外膜囊泡，获得粗提的外膜囊泡；/nS3采用Optiprep密度梯度离心法纯化粗提的外膜囊泡。/n

【技术特征摘要】
1.一种空肠弯曲杆菌外膜囊泡的提取及纯化方法，其特征在于，包括以下方法：
S1培养空肠弯曲杆菌，获得菌液；
S2提取菌液外膜囊泡，获得粗提的外膜囊泡；
S3采用Optiprep密度梯度离心法纯化粗提的外膜囊泡。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1中培养空肠弯曲杆菌的培养基为MH培养基。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1中培养空肠弯曲杆菌是在微需氧环境中培养，所述微需氧环境为：5％O2，10％CO2，85％N2。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2中提取菌液外膜囊泡具体采用以下方法：将经过滤处理的菌液滤液进行浓缩，浓缩后进行超速离心，获得的沉淀即为粗提的外膜囊泡。


5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述超速离心的参数为：4℃，150000×g，离心3h。


6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述浓缩是将经过滤处理的菌液滤液转移至超滤管中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王涓，聂翔，吴清平，丁郁，张菊梅，马国祥，杨小鹃，曾海燕，
申请(专利权)人：华南农业大学，广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：广东;44