新型肽及其在诊断中的应用制造技术

提供了用于诊断CagA+幽门螺杆菌感染或预测胃癌风险的新型肽。所述肽以高特异性和敏感度结合来自CagA+幽门螺杆菌患者的抗体，并且可以例如在诊断试剂盒中使用。

New peptide and its application in diagnosis

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型肽及其在诊断中的应用
本专利技术涉及来自幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)的CagA蛋白的新型肽。该肽可用于细菌感染的改进的预防、诊断和治疗以及胃癌风险的评估。
技术介绍
幽门螺杆菌是一种通常在胃中发现的细菌。一些幽门螺杆菌(H.pylori)菌株携带编码毒力因子的CagA(cytotoxicity-associatedantigenA，细胞毒性相关抗原A)基因。CagA基因编码作为细菌癌蛋白的1140至1180-氨基酸蛋白CagA，该细菌癌蛋白在感染部位移位到胃上皮细胞中。在移位后，其会影响上皮细胞的细胞内信号通路。携带CagA基因的幽门螺杆菌细菌与胃癌发展的风险增加相关，而且抗CagA抗体的存在与未来胃癌风险的增加相关。早期检测到CagA+幽门螺杆菌感染可促使癌症存活期延长，因为在被感染的个体中消除感染降低了胃癌的风险。因此，识别携带CagA+幽门螺杆菌的个体的方法可以用于诊断高胃癌风险，并因此有助于预防胃癌的发展。但是，针对CagA+幽门螺杆菌感染的现有的血清学方法在临床上并不起作用，主要是因为这些方法的特异性不够。即使在未感染幽门螺杆菌的个体中，或在感染缺乏CagA的幽门螺杆菌菌株的个体中，也存在表明对CagA具有广泛的抗体活性的大量的假阳性样本。因此，特异性和敏感度不足以用于临床上的有效诊断测试(Yamaokaetal,JClinMicrobiol1998:36:3433；Yamaokaetal,Gastroenterology1999:117:745；Figueiredoetal,JClinMicrobiol2001:39:1339)。因此，需要具有改善的诊断特性(例如改善的特异性和敏感度)的针对CagA+幽门螺杆菌的诊断测试。此外，不同幽门螺杆菌分离株之间的DNA序列有很大的差异。某些CagA变体与胃癌风险的相关性更高。因此，能够识别CagA菌株类型也是有用的。还需要特异性结合抗体、特别是结合CagA蛋白的抗体的CagA肽。
技术实现思路
本文提供了有关来自CagA的肽的信息，其可用于与幽门螺杆菌相关的疾病有关的诊断应用，包括识别处于胃癌发生高风险的个体。幽门螺杆菌感染的个体将产生针对幽门螺杆菌蛋白质的抗体，其包括CagA。因此，CagA特异性抗体的存在表明幽门螺杆菌感染。从感染的个体中存在的所有CagA肽中，我们已经1)定义了哪个子集是免疫原性的并引发抗体应答(参见表1，其中蛋白质长度的34％是免疫原性的)。已发现，许多肽也与未感染的患者的血清反应(图1中的白条)。在免疫原性肽的子集中，我们确定了2)具有诊断能力的较小的肽子集；最后，在诊断肽的这一子集中，我们已经3)确定了具有最高诊断能力的肽所共有的关键氨基酸序列。换言之，诊断能力不仅源于被感染的个体中是肽的存在/不存在，而且关键地还源于始终引发未被感染的个体中不存在的抗体应答的免疫原性肽的仅仅一个小子集。通过利用高精度的血清学检测方法，在肽水平而非蛋白质水平上的解析，我们确定了仅在携带CagA+幽门螺杆菌的个体中对其具有强抗体应答的肽，而排除了由于在肽缺乏CagA+幽门螺杆菌感染的个体中的交叉反应抗体应答而引起假阳性的肽。因此，我们已经确定的诊断肽同时具有高的灵敏度和特异性，如通过ROCAUC值确定的那样，将对诊断应用有效。在本专利技术的第一方面，提供了一种肽，该肽包括一种氨基酸序列或由该氨基酸序列组成，所述氨基酸序列选自由SEQIDNO1至SEQIDNO7组成的组。优选地，所述肽由最多25个氨基酸组成，更优选地由15个氨基酸组成，甚至更优选由最多10个氨基酸组成。在一个优选的实施例中，该肽包括一种氨基酸序列或由该氨基酸序列组成，所述氨基酸序列选自由SEQIDNO2-7组成的组，或更优选地选自由SEQIDNO2-5组成的组。这些新型的肽的优点在于：它们可以用于诊断，更具体地，用于诊断CagA阳性的幽门螺杆菌。因此，使用这些肽的诊断导致很少的假阳性。已确定的最小结合区也可用于检测CagA特异性抗体。由于它们很短，因此背景结合(backgroundbinding)会很低。此外，这些肽较短，因此可以低成本地制造。在本专利技术的第二方面，提供了根据本专利技术的第一方面的肽在诊断中的应用。在一个优选的实施例中，诊断是幽门螺杆菌感染的诊断，更具体地为CagA阳性的幽门螺杆菌，或用于胃癌的风险的预测。在本专利技术的第三方面，提供了一种试剂盒，其包含根据本专利技术的第一方面的肽或根据本专利技术的第二方面的肽的混合物。该试剂盒优选是用于诊断的试剂盒，更具体地，是用于诊断CagA阳性的幽门螺杆菌的试剂盒或用于预测胃癌的风险的试剂盒。在本专利技术的第四方面，提供了一种诊断方法，该方法包括以下步骤：a)从受试者中分离或提供样品，b)使所述样品与本专利技术所述的肽或本专利技术所述的肽的混合物接触，和c)检测样品中的抗体与肽的特异性结合。在一个优选的实施例中，该方法用于检测幽门螺杆菌感染或预测胃癌的风险。在本专利技术的第五方面，提供了一种预防受试者中的胃癌的方法，其包括以下步骤：1)进行本专利技术所述的诊断，和2)治疗受试者中的幽门螺杆菌CagA+感染。该方法可以包括以下步骤：使用本文的诊断方法确定受试者患有幽门螺杆菌感染，并随后治疗该感染。该治疗可涉及施用选自一类抗生素中的一种抗生素，该类抗生素选自由大环内酯类、β-内酰胺类、硝基咪唑类、四环素类和氟喹诺酮类组成的组。该治疗可涉及施用来自所述类别的两种抗生素，其中，这两种抗生素来自不同类别。该治疗还可以包括向受试者施用质子泵抑制剂，优选与抗生素组合。在本专利技术的第六方面，提供了一种检测来自受试者的样品中的幽门螺杆菌CagA结合抗体的方法，该方法包括使生物样品与根据本专利技术的第一方面的肽接触和检测样品中的抗体与肽的结合。样品可以是血液、血清、血浆样品或组织样品，例如胃组织样品。在本专利技术的第七方面，提供了根据本专利技术的第一方面的至少两种肽的混合物。这样的混合物的优点在于，其可以以有效的方式用于检测幽门螺杆菌的两个或更多个不同的CagA阳性菌株。该混合物可以与本专利技术所述的肽相同的方式使用。附图说明图1：使用肽微阵列分析确定CagA的18个不同的线性B细胞表位。每个肽(n＝1172个肽)的阵列得分显示为CagA序列(x轴)中起始位置处的竖直条。黑色条是来自感染幽门螺杆菌的个体的血清的结果，白色条是来自未感染幽门螺杆菌的个体的血清的结果。重要的是，许多肽也显示出与未感染的个体(白色条)的血清的反应性。图2：从18个确定的CagA表位(n＝1144肽)测试的所有肽的ROCAUC水平。图2a：以箱形图显示的结果，包括中间值、四分位范围和异常值。图2b：示出了每个单独的肽的结果，按表位分组。在2a和2b中，无用诊断的AUC(AUC＝0.5)用水平虚线表示。图3：包含关键序列基序的所有肽的ROCAUC得分。数据作为中间值、四分位范围和异常值显示。如果仅测试一种肽，则仅显示中间值(水平线)。序列基序名称与表4的序列名称相同：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包括氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列选自由SEQ ID NO 1至SEQ ID NO 7组成的组，所述肽由最多25个氨基酸组成。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170224 SE 1750203-01.一种包括氨基酸序列的肽，所述氨基酸序列选自由SEQIDNO1至SEQIDNO7组成的组，所述肽由最多25个氨基酸组成。


2.根据权利要求1所述的肽，其中，所述序列选自由SEQIDNO2-7组成的组。


3.一种根据权利要求1或2所述的肽，用于诊断。


4.根据权利要求3所述的用于诊断的肽，其中，所述诊断是幽门螺杆菌感染的诊断或胃癌的风险的预测。


5.根据权利要求3或4所述的用于诊断的肽，其中，所述肽选自由SEQIDNO2至SEQIDNO5组成的组。


6.根据权利要求3-5中任一项所述的用于诊断的肽，其中，所述肽包括最多十个氨基酸。


7.根据权利要求3-5中任一项所述的用于诊断的肽，其中，所述肽由选自SEQIDNO1至SEQIDNO7的氨基酸序列组成。


8.一种包括根据权利要求1至7中任一项所述的肽的试剂盒。


9.一种诊断方法，包括以下步骤：
a)提供来自受试者的样品，
b)使所述样...

【专利技术属性】
技术研发人员：布鲁尔·塞缪尔·伦丁，
申请(专利权)人：比奥托梅私人有限公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU