人工重组的染色体及其用途制造技术

本申请文件中的公开内容涉及人工重组的染色体及其用途，并且更具体而言，涉及通过两条以上的染色体的重组产生的人工重组的染色体以及使用包含所述染色体的细胞进行的转基因动物的生产。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】人工重组的染色体及其用途
本申请文件中的公开内容涉及人工重组的染色体及其用途，更具体而言，涉及通过两条以上的染色体的重组产生的人工重组的染色体以及使用包含该染色体的细胞进行的转基因动物的生产。
技术介绍
转基因动物可通过表达编码外源蛋白的DNA或使内源基因失活来促进遗传工程的发展。通常，为了产生转基因动物，将编码外源蛋白的DNA插入动物细胞的基因组中，并使用由此生成的细胞来产生动物。此处，为了将编码外源蛋白的DNA插入动物细胞的基因组中，使用了包含编码外源蛋白的DNA的载体，并且为了产生该载体，克隆了编码外源蛋白的DNA。
技术实现思路
技术问题通常，为了产生转基因动物，将编码外源蛋白的DNA插入动物细胞的基因组中，并使用由此生成的细胞来产生动物。此处，为了将编码外源蛋白的DNA插入动物细胞的基因组中，使用了包含编码外源蛋白的DNA的载体，并且为了生产该载体，克隆了编码外源蛋白的DNA。根据编码外源蛋白的DNA的大小，该方法使用一种或两种以上的载体。例如，当编码外源蛋白的DNA的大小为数万个碱基或更多时，将编本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种产生包含一条或多条人工重组的染色体的细胞的方法，所述方法包括：/ni)制备第一靶细胞和第二靶细胞，/n其中，所述第一靶细胞包含第一靶染色体，并且所述第二靶细胞包含第二靶染色体，/n此处，所述第一靶染色体包含第一部分、第一重组酶识别序列(第一RRS)和第一片段，其中，所述第一RRS位于所述第一部分和所述第一片段之间，/n此处，所述第二靶染色体包含第二部分、第二重组酶识别序列(第二RRS)和第二片段，其中，所述第二RRS位于所述第二部分和所述第二片段之间；/nii)使用所述第二靶细胞产生一个或多个微细胞，/n其中，所述一个或多个微细胞包含第二靶染色体或其片段，/n此处，所述第二靶染色体的片...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20190412 US 62/833,4891.一种产生包含一条或多条人工重组的染色体的细胞的方法，所述方法包括：
i)制备第一靶细胞和第二靶细胞，
其中，所述第一靶细胞包含第一靶染色体，并且所述第二靶细胞包含第二靶染色体，
此处，所述第一靶染色体包含第一部分、第一重组酶识别序列(第一RRS)和第一片段，其中，所述第一RRS位于所述第一部分和所述第一片段之间，
此处，所述第二靶染色体包含第二部分、第二重组酶识别序列(第二RRS)和第二片段，其中，所述第二RRS位于所述第二部分和所述第二片段之间；
ii)使用所述第二靶细胞产生一个或多个微细胞，
其中，所述一个或多个微细胞包含第二靶染色体或其片段，
此处，所述第二靶染色体的片段包含所述第二RRS和所述第二片段；
iii)使用所述第一靶细胞和所述一个或多个微细胞产生融合细胞，
其中，所述融合细胞包含所述第一靶染色体和所述第二靶染色体、或所述第一靶染色体和所述第二靶染色体的片段；以及
iv)通过用位点特异性重组酶(SSR)处理所述融合细胞来产生包含人工重组的染色体的细胞，
其中，所述SSR通过识别存在于所述第一靶染色体中的所述第一RRS和存在于所述第二靶染色体中的所述第二RRS的配对来诱导重组，
此处，通过重组将存在于所述第一靶染色体中的所述第一片段交换为存在于所述第二靶色体中的所述第二片段，
由此，产生具有所述第一部分和所述第二片段的第一人工重组的染色体。


2.如权利要求1所述的方法，其中，所述包含一条或多条人工重组的染色体的细胞进一步包含第二人工重组的染色体，
此处，所述第二人工重组的染色体包含所述第二部分和所述第一片段。


3.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一部分包含位于所述第一靶染色体的两侧的端粒末端中的一个。


4.如权利要求3所述的方法，其中，所述第一片段包含位于所述第一靶染色体的两侧的端粒末端中的另一个。


5.如权利要求1所述的方法，其中，所述第二部分包含位于所述第二靶染色体的两侧的端粒末端中的一个。


6.如权利要求5所述的方法，其中，所述第二片段包含位于所述第二靶染色体的两侧的端粒末端中的另一个。


7.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一RRS是选自loxP和loxP变体中的一种，
其中，所述第二RRS是选自loxP和loxP变体中的一种，
此处，所述第一RRS能够与所述第二RRS配对。


8.如权利要求7所述的方法，其中，所述SSR是Cre重组酶，
此处，所述SSR能够识别所述第一RRS和所述第二RRS。


9.如权利要求1所述的方法，其中，所述第一RRS是选自FRT、attP、attB、ITR及其变体中的一种，
其中，所述第二RRS是选自FRT、attP、attB、ITR及其变体中的一种，
此处，所述第一RRS能够与所述第二RRS配对。


10.如权利要求9所述的方法，其中，所述SSR是选自翻转酶(FLP)、整合酶和转座酶中的一种，
此处，所述SSR能够识别第一RRS和第二RRS。


11.如权利要求1所述的方法，其中，所述包含一条或多条人工重组的染色体的细胞可经历有丝分裂或减数分裂。


12.如权利要求1所述的方法，其中，包含所述第一人工重组的染色体的所述细胞不含所述第二靶染色体。


13.一种产生包含一条或多条人工重组的染色体的细胞的方法，所述方法包括：
i)制备第一靶细胞和第二靶细胞，
其中，所述第一靶细胞包含第一靶染色体，并且所述第二靶细胞包含第二靶染色体，
其中，所述第一靶染色体包含第一部分、第一重组酶识别序列(第一RRS)、第一片段、第二重组酶识别序列(第二RRS)和第二部分，
此处，所述第一部分包含位于所述第一靶染色体的两侧的端粒末端中的一个，并且所述第二部分包含位于所述第一靶染色体的两侧的端粒末端中的另一个，
此处，所述第一片段位于所述第一RRS和所述第二RRS之间，
其中，所述第二靶染色体包含第三部分、第三重组酶识别序列(第三RRS)、第二片段、第四重组酶识别序列(第四RRS)和第四部分，
此处，所述第三部分包含位于所述第二靶染色体的两侧的端粒末端中的一个，而第四部分包含位于所述第二靶染色体的两侧的端粒末端中的另一个，
此处，所述第二片段位于所述第三RRS和所述第四RRS之间；
ii)使用所述第二靶细胞产生一个或多个微细胞，
其中，所述一个或多个微细胞包含所述第二靶染色体或其片段，
此处，所述第二靶染色体的片段包含所述第三RRS、所述第二片段和所述第四RRS；
iii)使用所述第一靶细胞和所述一个或多个微细胞产生融合细胞，
其中，所述融合细胞包含所述第一靶染色体和所述第二靶染色体、或所述第一靶染色体和所述第二靶染色体的片段；以及
iv)通过用位点特异性重组酶(SSR)处理所述融合细胞来产生包含人工重组的染色体的细胞，
其中，所述SSR通过识别存在于所述第一靶染色体中的所述第一RRS和存在于所述第二靶染色体中的所述第三RRS的配对、以及存在于所述第一靶染色体中的所述第二RRS和存在于所述第二靶染色体中的所述第四RRS的配对来诱导重组，
此处，通过重组将存在于所述第一靶染色体中的所述第一片段交换为存在于所述第二靶染色体中的所述第二片段，
由此，产生包含所述第一部分、所述第二片段和所述第二部分的第一人工重组的染色体。


14.如权利要求13所述的方法，其中，所述包含一条或多条人工重组的染色体的细胞进一步包含第二人工重组的染色体，
此处，所述第二人工重组染色体包含所述第三部分、所述第一片段和所述第四部分。


15.如权利要求13所述的方法，其中，所述第一部分包含第一靶染色体的着丝粒。


16.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴昌圭，朴淳翼，姜镐珍，崔爱珍，
申请(专利权)人：株式会社湖美宝，
类型：发明
国别省市：韩国;KR