一种胎儿地中海贫血致病基因的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及基因检测技术领域，尤其指一种胎儿地中海贫血致病基因的方法和试剂盒，包括分离磁珠、PCR反应体系、胶体金检测试纸和稀释液，所述PCR反应体系包括PCR反应液、高保真DNA聚合酶和引物混合液，所述PCR反应液包括dNTP、MgCl

【技术实现步骤摘要】
一种胎儿地中海贫血致病基因的方法和试剂盒
本专利技术涉及基因检测
，尤其指一种胎儿地中海贫血致病基因的方法和试剂盒。
技术介绍
地中海贫血又称海洋性贫血，是一组遗传性溶血性贫血疾病。由于遗传的基因缺陷致使血红蛋白中一种或一种以上珠蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病理状态。缘于基因缺陷的复杂性与多样性，使缺乏的珠蛋白链类型、数量及临床症状变异性较大。地中海贫血广泛分布于世界许多地区，东南亚即为高发区之一。我国广东、广西、四川多见，长江以南各省区有散发病例，北方则少见。一般来说，如果两名属同一类型的地中海贫血患者结合，便有机会生下重型贫血患者。要想有效预防本病，需抽血进行肽链检测和基因分析，若证实本身和配偶同属β型极轻型或轻型地贫患者，子女将有四分之一的机会完全正常、二分之一的机会成为轻型贫血患者，四分之一的机会成为中型或重型贫血患者。鉴于本病缺少根治的方法，临床中、重型预后不良，故在婚配方面医生应向有阳性家族史或患者提出医学建议，进行婚前检查和胎儿产前基因诊断，避免下一代患儿的发生。针对胎儿地中海贫血致病基因的检测现有技术存在操作复杂、成本高的缺点。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的技术问题，本专利技术提供提供一种低成本、操作简单的胎儿地中海贫血致病基因的方法和试剂盒。为了达成上述技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一种胎儿地中海贫血致病基因的方法，包括以下步骤：(1)胎儿游离DNA富集和分离，取孕妇外周血，加入分离磁珠进行胎儿游离DNA富集，富集完成后，采用洗涤液对分离磁珠进行洗涤，再采用洗脱液对分离磁珠进行洗脱，洗脱完成后，收集上清液即分离得到胎儿游离DNA；(2)PCR扩增，向PCR管中加入PCR反应液、高保真DNA聚合酶、引物混合液和步骤(1)分离得到的胎儿游离DNA，进行PCR扩增，得到PCR扩增反应产物；其中，所述PCR反应液包括dNTP、MgCl2和PCR缓冲液；所述引物混合液包括正向引物和反向引物；(3)快速层析检测，将步骤(2)得到的PCR扩增反应产物滴加在快速检测试纸的一端，反应液在快速检测试纸的表面泳动层析；其中，所述快速检测试纸包括胶体金检测试纸；所述胶体金检测试纸设置有包被有捕获抗体的检测线和标记有检测抗体的纳米金；所述检测线设置有不少于8条。(4)检测结果判读，通过检测线的显色情况，判断胎儿地中海贫血致病基因的携带情况。进一步地，所述捕获抗体为抗地中海贫血致病基因单克隆抗体，所述地中海贫血致病基因包括β珠蛋白突变基因和α珠蛋白突变基因。进一步地，所述检测抗体为抗地中海贫血致病基因单克隆抗体，所述地中海贫血致病基因包括β珠蛋白突变基因和α珠蛋白突变基因。进一步地，所述胶体金检测试纸宽度不小于8mm。进一步地，所述分离磁珠为所及磁珠。进一步地，包括分离磁珠、PCR反应体系、胶体金检测试纸和稀释液，所述PCR反应体系包括PCR反应液、高保真DNA聚合酶和引物混合液，所述PCR反应液包括dNTP、MgCl2和PCR缓冲液，所述胶体金检测试纸设置有包被有捕获抗体的检测线和标记有检测抗体的纳米金，所述检测线设置有不少于8条。进一步地，所述稀释液为PCR扩增产物稀释液，所述PCR扩增产物稀释液用于将PCR扩增产物稀释一定倍数后滴加至胶体金检测试纸一端检测。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：本专利技术采用分离磁珠实现孕妇外周血中的胎儿游离DNA分离，并利用胶体金试纸进行地中海贫血致病基因扩增产物检测，通过检测线的显色情况快速判断致病基因携带情况，替代了现有技术高成本的基因测序，使胎儿地中海贫血检测操作更简单，检测成本更低。具体实施方式以下对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。实施例11.1快速检测试纸制备筛选主要的地中海贫血致病基因8种，包括β珠蛋白突变基因和α珠蛋白突变基因，并根据β珠蛋白突变基因和α珠蛋白突变基因制备单克隆抗体，将抗β珠蛋白突变基因的单克隆抗体和抗α珠蛋白突变基因单克隆抗体标记作为捕获抗体和检测抗体，并将捕获抗体宝贝在检测试纸的NC膜表面，将检测抗体标记在纳米金颗粒表面，并将标记好的纳米金颗粒喷在快速检测试纸的一端的垫片上；检测线设置有8条。1.2胎儿游离DNA分离采集孕妇外周血500微升，加入羧基化磁珠，混匀3min，使羧基化磁珠充分吸附孕妇外周血中的胎儿，采用50％的乙醇水对磁珠进行反复洗涤三次，然后采用pH8.0的Tris缓冲液进行洗脱，收集洗脱后的上清液，得到胎儿游离DNA。1.3PCR扩增向PCR管中加入dNTP5微升、MgCl23微升、PCR缓冲液10微升、高保真DNA聚合酶2微升、正向引物2微升、反向引物2微升和水6微升，采用PCR仪进行扩增检测，扩增程序如下表：1.4快速层析检测将得到的PCR扩增反应产物采用0.02XPBS缓冲液稀释5倍后，滴加3滴在快速检测试纸的一端，反应液在快速检测试纸的表面泳动层析。1.5结果分析层析反应15min后，通过检测线的显色情况，判断胎儿地中海贫血致病基因的携带情况，当检测线的出现显色时，则对应的致病基因为阳性。从以上实施例可以看出，本专利技术胎儿地中海贫血致病基因的检测方法成本低、速度快，能够用于地中海贫血致病基因的快速筛查。以上所述仅为本专利技术的优选实施例，并非因此限制本专利技术的专利范围，凡是利用本专利技术说明书内容所作的简单修改或变换，或直接或间接运用在其他相关的
，均同理包括在本专利技术的专利保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胎儿地中海贫血致病基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)胎儿游离DNA富集和分离，取孕妇外周血，加入分离磁珠进行胎儿游离DNA富集，富集完成后，采用洗涤液对分离磁珠进行洗涤，再采用洗脱液对分离磁珠进行洗脱，洗脱完成后，收集上清液即分离得到胎儿游离DNA；/n(2)PCR扩增，向PCR管中加入PCR反应液、高保真DNA聚合酶、引物混合液和步骤(1)分离得到的胎儿游离DNA，进行PCR扩增，得到PCR扩增反应产物；/n其中，所述PCR反应液包括dNTP、MgCl

【技术特征摘要】
1.一种胎儿地中海贫血致病基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)胎儿游离DNA富集和分离，取孕妇外周血，加入分离磁珠进行胎儿游离DNA富集，富集完成后，采用洗涤液对分离磁珠进行洗涤，再采用洗脱液对分离磁珠进行洗脱，洗脱完成后，收集上清液即分离得到胎儿游离DNA；
(2)PCR扩增，向PCR管中加入PCR反应液、高保真DNA聚合酶、引物混合液和步骤(1)分离得到的胎儿游离DNA，进行PCR扩增，得到PCR扩增反应产物；
其中，所述PCR反应液包括dNTP、MgCl2和PCR缓冲液；
所述引物混合液包括正向引物和反向引物；
(3)快速层析检测，将步骤(2)得到的PCR扩增反应产物滴加在快速检测试纸的一端，反应液在快速检测试纸的表面泳动层析；
其中，所述快速检测试纸包括胶体金检测试纸；
所述胶体金检测试纸设置有包被有捕获抗体的检测线和标记有检测抗体的纳米金；
所述检测线设置有不少于8条。
(4)检测结果判读，通过检测线的显色情况，判断胎儿地中海贫血致病基因的携带情况。


2.根据权利要求1所述的胎儿地中海贫血致病基因的方法，其特征在于，所述捕获抗体为抗地中海贫血致病基因单克隆抗体，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈文成，王春芳，元辉雄，常正义，农雪娟，胡仁统，雷茗，许桂丹，黄华佗，
申请(专利权)人：右江民族医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：广西;45