一种检测慢性病精准用药基因的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种检测慢性病精准用药基因的试剂盒及检测方法，所述试剂盒包括42种药物相关的106种基因中197个突变位点的检测试剂。针对突变位点，设计扩增引物和单碱基延伸引物，通过多重PCR和多重单碱基延伸反应后，进行质谱分析其特异性的产物，判定每一个位点的基因型，并根据数据库指导用药。本发明专利技术提供的试剂盒特异性强、灵敏度高，相比二代测序，本发明专利技术降低了检测成本和数据分析的复杂度，在中等数量的基因标记检测上更具优势。可应用于科研、药物疗效研究、慢性疾病相关调查、以及慢性疾病临床用药指导。

【技术实现步骤摘要】
一种检测慢性病精准用药基因的试剂盒
本专利技术属于基因检测
，具体涉及一种检测慢性病精准用药基因的试剂盒。
技术介绍
慢性病已成为当今世界死亡的主要原因，以高血压、脑卒中和冠心病为代表的心血管等慢性疾病，严重危害人类健康；同时统计也显示，有63％的死亡源于慢性病，预计2030年这一比例将上升至75％。《中国居民营养与慢性病状况报告(2015)》数据显示，我国慢性病死亡率为533/10万，占总死亡人数的86.6％，远高于全球水平，老年人群尤其是高龄老人是慢性病的高发人群。慢性病进程难以估计、多数不可治愈等临床特点决定了大部分慢性病患者需要长期甚至终身服药，然而老年慢性病患者中普遍存在患有多种慢性病需要同时服用多种药物的情况。在治疗过程中多种处方药物的使用会导致药物治疗相关问题，包括多重用药、不合理处方、依从性差以及不良药物反应增加等，这些问题的存在增加了老年慢性病患者的用药安全隐患。我国卫生部药品不良反应监测中心的数据显示：住院病人中，每年约有19.2万人死于药品不良反应，不良反应发生率为10％-20％；家庭用药不良反应需要住院治疗的病人则多达250万人，约占5％(世界卫生组织WHO在发展中国家的调查资料)。除药物不良反应外，降压药的药物无效利用率高达50％，降糖药的药物无效利用率为43％，降脂药的无效利用率为38.5％。为增加用药安全性，在为老年人提供药物治疗方案时，必须了解老年人慢性病的临床用药特点，并针对存在问题提出相应的应对措施，才能提高老年慢性病治疗的安全性和有效性。随着精准医疗的兴起，基因检测技术不断发展，其应用领域逐渐扩大，尤其在慢病精准用药领域，可以帮助患者实现真正意义上的“一人一药、一人一量”。通过对人体基因的解读，分析肌体药物代谢能力，可实现“量体裁衣”式的治疗，不仅可以减少同一种疾病药物的服用种类，还有助于提高药物疗效、降低药物不良反应，同时减轻患者的痛苦和经济负担。慢性病精准用药基因检测属于药物基因组学的一个产品，目前，国内外在针对基因位点检测共有五种技术手段：1)第一代基因测序，即桑格(sanger)测序法，针对已知基因位点，多用于科学研究；2)第二代测序法，也称高通量测序技术，针对已知及未知基因位点，多用于科学研究；3)核酸质谱法，针对已知基因位点，多用于商业化产品；4)荧光定量PCR，针对已知位点，多用于低浓度样本的检测，如肿瘤靶向药用药前的基因检测；或者检测位点少的基因检测产品，如叶酸基因位点检测(目前已知的产品仅含3个叶酸相关位点)；5)数字PCR，针对已知位点，用于浓度极低的样本的检测，多用于科学研究和肿瘤靶向药用药前的基因检测。以上现有技术手段中，目前针对个体化用药的基因检测产品采用一代测序，二代测序和核酸质谱技术。中国专利201910614761.9中公开了一种高血压精准用药相关基因的多态性检测试剂盒及方法，所述试剂盒包括反应液I，反应液II，反应液III。所述的反应液I包括PCR缓冲体系及酶，反应液II包括ACE、CYP2D6、ADRB1基因检测引物及相应荧光探针，反应液III包括NPPA、AGTR1、CYP3A5、CYP2C9基因检测引物及相应荧光探针。该试剂盒可以种快速、精准系统地检测高血压用药相关基因多态性。中国专利201710485408.6中公开了一种心脑血管疾病精准用药基因检测固相PCR试剂盒，包括PCR反应液混合液及12联排管或96孔PCR反应板构成，所述PCR反应液混合液包括引物组、热启动DNA聚合酶和PCR反应缓冲液。其引物组针对多个心脑血管疾病精准用药基因靶标。但其均未克服多种慢性病需要同时服用多种药物的情况下多重用药、不合理处方、依从性差以及不良药物反应增加等问题。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术将慢性病临床常用的六大类、16小类药物汇总，具体包括：高血压(利尿剂类、钙离子拮抗剂、β受体拮抗剂、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂、血管紧张素Ⅰ转化酶抑制剂)；降血脂药(他汀类、贝特类)；抗凝血类药物(香豆素类抗凝剂、血小板聚集抑制剂、Xa因子抑制剂)；降血糖药(双胍类、噻唑烷二酮类、促胰岛素分泌剂)；抗心功能不全药(抗心律失常、洋地黄类强心苷药)；止痛药(吗啡)，共涉及42种药及其相关基因位点，检测位点全面，结果准确，药物选择多样，价格低廉，检测结果终身可用。一方面，本专利技术提供了一种慢性病精准用药基因的检测方法，包括以下步骤：(1)通过文本和数据挖掘获取慢性病精准用药基因多态性位点信息；(2)确定位点权重，并建立药物作用效果评估系统；(3)根据位点具体序列信息，设计包含位点信息DNA片段的扩增引物和用于位点基因型检测的延伸引物；(4)对受检者的DNA进行多重PCR扩增和遗传位点的单碱基延伸反应；(5)通过核酸质谱检测延伸产物，确定多态性位点的具体基因型；(6)根据步骤(2)所述药物作用效果评估系统对受检者具体基因型进行评估进而推导出推荐用药、正常用药和谨慎用药种类；(7)根据基因检测结果及评分的统计分析，得出个体化的评估结果。所述的步骤(1)慢性病精准用药基因位点分布信息如下：所述的步骤(2)中药物作用效果评估系统是通过文本和数据挖掘获得与药物应答效果、不良反应和代谢速率相关的基因多态性位点，基于不同基因型携带人群之间比较的结果；根据文献中的关键内容将不同基因型经药物效果对比后分为应答效果好/差/不良反应风险高/低、代谢速率慢/中/快；再根据受检者基因型的药物作用评估结果，将这42种药物进行分类，分为推荐用药、正常用药和谨慎用药。所述的基因多态性位点相关药物包括降压药类，共包括19种药物的85个多态性位点，分别为：1)呋塞米3个位点：rs4961，rs5063，rs1529927；2)氢氯噻嗪6个位点：rs4149601，rs16960228，rs7297610，rs1799752，rs12795437，rs880054；3)螺内酯6个位点：rs4961，rs4341，rs1799998，rs1042713，rs1799752，rs4343；4)氯噻酮4个位点：rs5065，rs3025058，rs4291，rs11122576；5)氨氯地平7个位点：rs776746，rs4646438，rs2238032，rs4291，rs2740574，rs2246709，rs5065；6)硝苯地平5个位点：rs1123617，rs3745009，rs1048101，rs4987161，rs776746；7)美托洛尔16个位点：rs35742686，rs3892097，rs5030655，rs5030656，rs1058164，rs1065852，rs1135840，rs28371706，rs16947，rs1801252，rs1024323，rs1801253，rs1801058，rs28371725，rs61736512，rs59421388；8)卡维地洛3个位点：r本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组用于慢性病精准用药基因检测的基因多态性位点组合，其特征在于，所述的基因多态性位点相关药物为降压药类，共包括19种药物的85个多态性位点，分别为：/n1)呋塞米3个位点：rs4961，rs5063，rs1529927；/n2)氢氯噻嗪6个位点：rs4149601，rs16960228，rs7297610，rs1799752，rs12795437，rs880054；/n3)螺内酯6个位点：rs4961，rs4341，rs1799998，rs1042713，rs1799752，rs4343；/n4)氯噻酮4个位点：rs5065，rs3025058，rs4291，rs11122576；/n5)氨氯地平7个位点：rs776746，rs4646438，rs2238032，rs4291，rs2740574，rs2246709，rs5065；/n6)硝苯地平5个位点：rs1123617，rs3745009，rs1048101，rs4987161，rs776746；/n7)美托洛尔16个位点：rs35742686，rs3892097，rs5030655，rs5030656，rs1058164，rs1065852，rs1135840，rs28371706，rs16947，rs1801252，rs1024323，rs1801253，rs1801058，rs28371725，rs61736512，rs59421388；/n8)卡维地洛3个位点：rs4148323，rs3892097，rs1065852；/n9)厄贝沙坦5个位点：rs1057910，rs72558187，rs1367117，rs5370，rs1801701；/n10)奥美沙坦2个位点：rs2306283，rs4149056；/n11)洛沙坦11个位点：rs1045642，rs1934969，rs1057910，rs72558187，rs28371686，rs9332131，rs7900194，rs10752271，rs10737062，rs3814995，rs12721226；/n12)维拉帕米7个位点：rs1024323，rs11039149，rs12221497，rs2279238，rs4742610，rs11124945，rs2229109；/n13)缬沙坦2个位点：rs250917，rs2540923；/n14)依那普利9个位点：rs1799752，rs4149056，rs2306283，rs495828，rs5522，rs1042714，rs1799722，rs2070744，rs699947；/n15)卡托普利3个位点：rs1799752，rs2106809，rs5186；/n16)赖诺普利6个位点：rs1799752，rs1799722，rs3025058，rs11122576，rs12143842，rs200148；/n17)福辛普利1个位点：rs1799752；/n18)贝那普利8个位点：rs1805087，rs1801133，rs1799998，rs7079，rs5051，rs1042713，rs2229437，rs1799752；/n19)培哚普利5个位点：rs5186，rs1799752，rs275651，rs12050217，rs5182；/n所述的基因多态性位点相关药物为降血脂药类，共包括5种药物的36个多态性位点，分别为：/n1)辛伐他汀13个位点：rs2032582，rs4149056，rs1719247，rs1346268，rs5882，rs4823613，rs717620，rs2003569，rs4149081，rs1137101，rs708272，rs705379，rs11716445；/n2)普伐他汀9个位点：rs4149015，rs17244841，rs20455，rs2306283，rs4149056，rs708272，rs3025058，rs4986790，rs1800591；/n3)瑞舒伐他汀6个位点：rs2231142，rs4149056，rs4693075，rs1736557，rs1205，rs2808630；/n4)非诺贝特7个位点：rs2727786，rs1800795，rs3135506，rs964184，rs4238001，rs2241883，rs2230808；/n5)阿托伐他汀8个位点：rs7412，rs20455，rs4693075，rs4149056，rs662799，rs2306283，rs56101265，rs6535454；/n所述的基因多态性位点相关药物为降糖药类，共包括6种药物的23个多态性位点，分别为：/n1)二甲双胍7个位点：rs11212617，rs12943590，rs36056065，rs2...

【技术特征摘要】
1.一组用于慢性病精准用药基因检测的基因多态性位点组合，其特征在于，所述的基因多态性位点相关药物为降压药类，共包括19种药物的85个多态性位点，分别为：
1)呋塞米3个位点：rs4961，rs5063，rs1529927；
2)氢氯噻嗪6个位点：rs4149601，rs16960228，rs7297610，rs1799752，rs12795437，rs880054；
3)螺内酯6个位点：rs4961，rs4341，rs1799998，rs1042713，rs1799752，rs4343；
4)氯噻酮4个位点：rs5065，rs3025058，rs4291，rs11122576；
5)氨氯地平7个位点：rs776746，rs4646438，rs2238032，rs4291，rs2740574，rs2246709，rs5065；
6)硝苯地平5个位点：rs1123617，rs3745009，rs1048101，rs4987161，rs776746；
7)美托洛尔16个位点：rs35742686，rs3892097，rs5030655，rs5030656，rs1058164，rs1065852，rs1135840，rs28371706，rs16947，rs1801252，rs1024323，rs1801253，rs1801058，rs28371725，rs61736512，rs59421388；
8)卡维地洛3个位点：rs4148323，rs3892097，rs1065852；
9)厄贝沙坦5个位点：rs1057910，rs72558187，rs1367117，rs5370，rs1801701；
10)奥美沙坦2个位点：rs2306283，rs4149056；
11)洛沙坦11个位点：rs1045642，rs1934969，rs1057910，rs72558187，rs28371686，rs9332131，rs7900194，rs10752271，rs10737062，rs3814995，rs12721226；
12)维拉帕米7个位点：rs1024323，rs11039149，rs12221497，rs2279238，rs4742610，rs11124945，rs2229109；
13)缬沙坦2个位点：rs250917，rs2540923；
14)依那普利9个位点：rs1799752，rs4149056，rs2306283，rs495828，rs5522，rs1042714，rs1799722，rs2070744，rs699947；
15)卡托普利3个位点：rs1799752，rs2106809，rs5186；
16)赖诺普利6个位点：rs1799752，rs1799722，rs3025058，rs11122576，rs12143842，rs200148；
17)福辛普利1个位点：rs1799752；
18)贝那普利8个位点：rs1805087，rs1801133，rs1799998，rs7079，rs5051，rs1042713，rs2229437，rs1799752；
19)培哚普利5个位点：rs5186，rs1799752，rs275651，rs12050217，rs5182；
所述的基因多态性位点相关药物为降血脂药类，共包括5种药物的36个多态性位点，分别为：
1)辛伐他汀13个位点：rs2032582，rs4149056，rs1719247，rs1346268，rs5882，rs4823613，rs717620，rs2003569，rs4149081，rs1137101，rs708272，rs705379，rs11716445；
2)普伐他汀9个位点：rs4149015，rs17244841，rs20455，rs2306283，rs4149056，rs708272，rs3025058，rs4986790，rs1800591；
3)瑞舒伐他汀6个位点：rs2231142，rs4149056，rs4693075，rs1736557，rs1205，rs2808630；
4)非诺贝特7个位点：rs2727786，rs1800795，rs3135506，rs964184，rs4238001，rs2241883，rs2230808；
5)阿托伐他汀8个位点：rs7412，rs20455，rs4693075，rs4149056，rs662799，rs2306283，rs56101265，rs6535454；
所述的基因多态性位点相关药物为降糖药类，共包括6种药物的23个多态性位点，分别为：
1)二甲双胍7个位点：rs11212617，rs12943590，rs36056065，rs2282143，rs316019，rs628031，rs578427；
2)罗格列酮3个位点：rs10509681，rs...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁峰，王盼盼，
申请(专利权)人：美思睿北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11