一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法技术

本发明专利技术涉及莲子心含量测定技术领域，特别是涉及一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，包括：步骤一、将莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱对照品分别适量配成一系列浓度的对照品溶液，再进行高效液相检测确定检测限和定量限；步骤二、将莲子心醇提物配制成供试样品溶液，在色谱柱为extend‑C18色谱柱、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μL的色谱条件下进行高效液相检测，通过峰面积计算莲子心生物碱含量。本发明专利技术提供的检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法具有专属性、线性范围、准确度、稳定性和重复性良好的优点，可以用于定量分析，同时耐用性良好。

【技术实现步骤摘要】
一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法
本专利技术涉及莲子心含量测定
，特别是涉及一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法。
技术介绍
莲子心是《中国药典》收录的草药，药用来源为睡莲科植物莲的成熟种子中间的绿色胚根(莲心)，取出，晒干。莲子心其味清苦，但却具有极好的降压去脂之效。异名薏(《尔雅》)，苦薏(《本草图经》)，莲薏(《纲目》)，莲心(《本草再新》)。为睡莲科植物莲的成熟种子的绿色胚芽。主产湖南、湖北、江西、福建、江苏、浙江等地。性味苦，寒。清心，去热，止血，涩精。治心烦，口渴，吐血，遗精，平和五脏之气。莲子心为成熟莲子种仁内的绿色胚芽，民间常用以泡茶饮，有清心火，止遗精的作用，对心肾不交、阴虚火旺的失眠患者，食之最宜。从临床应用上看，莲子心适用于轻度失眠人群，如不见效，可适当使用安定控制，但长期服用安定对身体有较大伤害。另外，失眠患者应该培养起较好的生活习惯，如晚饭后多散步，平常多运动等等，这些对于睡眠的恢复均有很好的帮助。莲子心主要含有生物碱、黄酮和多糖等多种活性成分。莲子心生物碱成分主要为莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱和莲心季铵碱等、具有降血压、抗心律失常、抗血小板聚集、抗癌等药理作用。因此，建立准确检测莲子心生物碱含量的方法具有非常重要的意义。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，用于解决现有技术中莲子心生物碱含量测定不准确的问题，提供的检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法具有专属性、线性范围、准确度、稳定性和重复性良好的优点，可以用于定量分析，同时耐用性良好。为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术的第一方面，提供一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法包括如下步骤：步骤一、将莲心碱对照品、异莲心碱对照品和甲基莲心碱对照品分别适量配成一系列浓度的莲心碱对照品溶液、异莲心碱对照品溶液和甲基莲心碱对照品溶液，在色谱柱为extend-C18色谱柱、流动相A为水和三乙胺的体积比为1000：(0.9～1.1)的混合溶液、流动相B为为乙腈和甲醇的体积比为1：(0.99～1.01)的混合溶液、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μL的色谱条件下，分别量取不同浓度的莲心碱对照品溶液、异莲心碱对照品溶液和甲基莲心碱对照品溶液进行高效液相检测，当S/N≈3时为检测限，当S/N≈10时作为定量限；步骤二、将莲子心醇提物配制成一系列浓度的莲子心生物碱供试样品溶液，在色谱柱为extend-C18色谱柱、流动相A为水和三乙胺的体积比为1000：(0.9～1.1)的混合溶液、流动相B为为乙腈和甲醇的体积比为1：(0.99～1.01)的混合溶液、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μL的色谱条件下进行高效液相检测，通过峰面积计算出试样品溶液中莲子心生物碱含量。于本专利技术的一实施例中，步骤一和步骤二中流动相A和流动相B在洗脱过程中的体积配比具体如表2所示：时间/min流动相A/％流动相B/％0901058020205050252080352080表2流动相A和流动相B的体积配比。于本专利技术的一实施例中，所述步骤一和步骤二中流动相A为水和三乙胺的体积比为1000：1的混合溶液、流动相B为为乙腈和甲醇的体积比为1：1的混合溶液。于本专利技术的一实施例中，所述步骤一和步骤二中所述色谱柱的柱温30℃，色谱柱长度为250mm，色谱柱内径为4.6mm，色谱柱填料颗粒直径为5μm。于本专利技术的一实施例中，所述步骤二中莲子心醇提物的制备过程为：取莲子心试样粉碎后过20目筛，取499～501mg的莲子心粉末置于25mL容量瓶中，加入质量分数为70～100％的甲醇后超声25～35min，冷却至室温后静置至少30min，再用质量分数为70～100％的甲醇定容至25mL，再经过0.45微米的微孔滤膜过滤，取续滤液即为莲子心醇提物。于本专利技术的一实施例中，所述步骤二中莲子心醇提物的制备过程为：取莲子心试样粉碎后过20目筛，取500mg的莲子心粉末置于25mL容量瓶中，加入甲醇后超声30min，冷却至室温后静置30min，再用甲醇定容至25mL，再经过0.45微米的微孔滤膜过滤，取续滤液即为莲子心醇提物。于本专利技术的一实施例中，所述步骤二中莲子心醇提物的制备过程为：取莲子心100重量份，用4～6倍于莲子心质量的50～95％乙醇回流提取2～3次，每次1～2h，过滤，合并滤液，减压浓缩到莲子心质量的1.5～2.5倍即得醇提液，将100重量份的732型阳离子交换树脂装入内径为60mm的玻璃柱内，加入醇提液，732型阳离子交换树脂充分吸附2～3h后，用10～15BV的蒸馏水以4～6BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用10～15BV的95％乙醇以2～3BV/h的流速洗脱，再用10～15BV的含氨水5％的95％乙醇以2～3BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥后即得莲子心醇提物。于本专利技术的一实施例中，所述步骤二中莲子心醇提物的制备过程为：取莲子心100重量份，用6倍于莲子心质量的95％乙醇回流提取3次，每次1h，过滤，合并滤液，减压浓缩到莲子心质量的2.0倍即得醇提液，将100重量份的732型阳离子交换树脂装入内径为60mm的玻璃柱内，加入醇提液，732型阳离子交换树脂充分吸附3h后，用15BV的蒸馏水以6BV/h的流速洗去水溶性杂质，再用15BV的95％乙醇以3BV/h的流速洗脱，再用15BV的含氨水5％的95％乙醇以3BV/h的流速洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥后即得莲子心醇提物如上所述，本专利技术的一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，具有以下有益效果：莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱三个组分在该色谱条件下各峰的分离度均大于1.5，可以有效地分离，专属性良好；莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的定量限分别为91.3μg，124.7μg和269.3μg，结果良好；莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的检测限分别为47.1μg，62.3μg和135.2μg，结果良好；三个主要的生物碱成分在各自的样品范围内，(莲心碱(0.0879mg至1.465mg)、异莲心碱(0.0997mg至1.6623mg)和甲基莲心碱(0.2127mg至3.5446mg))，峰面积和含量之间的线性关系良好，各物质相关系数R2均大于0.998；通过6次平行操作结果，各样品中三个组分的含量RSD为0.23％,0.50％和0.10％，均小于2％，重复性良好；三个组分的对照品混合溶液室温放置12小时，其峰面积和含量没有明显变化，溶液稳定性良好；莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱加样回收率均在80.0％～120.0％范围内且各浓度水平间回收率本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤一、将莲心碱对照品、异莲心碱对照品和甲基莲心碱对照品分别适量配成一系列浓度的莲心碱对照品溶液、异莲心碱对照品溶液和甲基莲心碱对照品溶液，在色谱柱为extend-C18色谱柱、流动相A为水和三乙胺的体积比为1000：(0.9～1.1)的混合溶液、流动相B为为乙腈和甲醇的体积比为1：(0.99～1.01)的混合溶液、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μL的色谱条件下，分别量取不同浓度的莲心碱对照品溶液、异莲心碱对照品溶液和甲基莲心碱对照品溶液进行高效液相检测，当S/N≈3时为检测限，当S/N≈10时作为定量限；/n步骤二、将莲子心醇提物配制成供试样品溶液，在色谱柱为extend-C18色谱柱、流动相A为水和三乙胺的体积比为1000：(0.9～1.1)的混合溶液、流动相B为为乙腈和甲醇的体积比为1：(0.99～1.01)的混合溶液、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μL的色谱条件下进行高效液相检测，通过峰面积计算出试样品溶液中莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的含量。/n...

【技术特征摘要】
1.一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将莲心碱对照品、异莲心碱对照品和甲基莲心碱对照品分别适量配成一系列浓度的莲心碱对照品溶液、异莲心碱对照品溶液和甲基莲心碱对照品溶液，在色谱柱为extend-C18色谱柱、流动相A为水和三乙胺的体积比为1000：(0.9～1.1)的混合溶液、流动相B为为乙腈和甲醇的体积比为1：(0.99～1.01)的混合溶液、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μL的色谱条件下，分别量取不同浓度的莲心碱对照品溶液、异莲心碱对照品溶液和甲基莲心碱对照品溶液进行高效液相检测，当S/N≈3时为检测限，当S/N≈10时作为定量限；
步骤二、将莲子心醇提物配制成供试样品溶液，在色谱柱为extend-C18色谱柱、流动相A为水和三乙胺的体积比为1000：(0.9～1.1)的混合溶液、流动相B为为乙腈和甲醇的体积比为1：(0.99～1.01)的混合溶液、流速为1ml/min、检测波长为282nm、柱温为28～32℃、进样量为20μL的色谱条件下进行高效液相检测，通过峰面积计算出试样品溶液中莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的含量。


2.根据权利要求1所述的一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，其特征在于：所述步骤一和步骤二中流动相A和流动相B在洗脱过程中的体积配比具体如表1所示：









时间/min
流动相A/％
流动相B/％


0
90
10


5
80
20


20
50
50


25
20
80


35
20
80






表1流动相A和流动相B的体积配比。


3.根据权利要求1或2所述的一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，其特征在于：所述步骤一和步骤二中流动相A为水和三乙胺的体积比为1000：1的混合溶液、流动相B为为乙腈和甲醇的体积比为1：1的混合溶液。


4.根据权利要求1或2所述的一种检测莲子心生物碱含量的高效液相检测方法，其特征在于：所述步骤一和步骤二中所述色谱柱的柱温30℃，色谱柱长度为2...

【专利技术属性】
技术研发人员：张少华，张建烽，陆颖，
申请(专利权)人：药昕医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31