一种可与人血中氨基酸及肉碱定量相互溶解免副作用的检测装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种可与人血中氨基酸及肉碱定量相互溶解免副作用的检测装置，所述检测装置包括：试剂盒，所述试剂盒设有多个容器孔，每个容器孔分别放置有氨基酸同位素标准品、酰基肉碱同位素标准品、洗脱溶液瓶、衍生化溶液瓶、萃取溶液瓶、复溶解溶液瓶和流动相瓶；多孔反应板，包括多个反应孔；和衬垫层，所述衬垫层分别置于所述试剂盒顶部和所述多孔反应板底部；以及检测装置使用说明书。根据本发明专利技术的技术方案避免了检测过程中出现互相干扰、误检率等副作用。

【技术实现步骤摘要】
一种可与人血中氨基酸及肉碱定量相互溶解免副作用的检测装置
本专利技术涉及遗传性代谢疾病检测领域，更具体地涉及利用气相色谱和质谱串联在相互溶解的情况下检测人血中氨基酸及肉碱定量的检测装置。
技术介绍
遗传代谢病是因维持机体正常代谢所必需的某些由多肽和(或)蛋白组成的酶、受体、载体及膜泵生物合成发生遗传缺陷，即编码这类多肽(蛋白)的基因发生突变而导致的疾病。其包括氨基酸类及肉碱类遗传代谢病。该类疾病发病后常呈进行性加重，如未能早期识别诊断、干预、治疗，常导致早期夭折或终身残疾，且以神经、智力残疾为最多，会严重影响人口素质，造成家庭和社会的沉重负担。因此开展IEM的早期筛查，实现早期诊断，成为IEM防治的关键，对避免和减少残疾儿童的发生，提高人口素质，推动国民经济发展有着重要的意义。目前，IEM的诊断方法主要有枯草杆菌抑制试验、酶活性测定、气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)、单基因分析等。这些诊断方法用于IEM筛查具有局限性：(1)普遍通量低，一般一次只能检测一种至几十种，不能满足IEM可检出病种的逐年增多，并且需要对遗传性代谢病有准确的预判；(2)不同IEM的检测方法各异，且样本多样，如一些疾病检测蛋白水平、而另一些疾病则检测基因水平，有些疾病需要尿液样本、而另一些则需要血液样本。因此不太适合开展大规模的遗传性代谢病的筛查，亟需要一种能高通量检测IEM多种疾病的技术。LC-MS/MS技术的发展使得这类疾病在发病前进行干预成为可能。它通过同位素内标对新生儿滤纸干血片样本中的氨基酸、酰基肉碱的浓度进行分析，能在2～3min内对1个标本进行几十种代谢产物分析，通过对这些产物的分析，可以对40种左右遗传性代谢病(包括氨基酸代谢紊乱、有机酸代谢紊乱和脂肪酸代谢紊乱性疾病)进行筛查和诊断，大大提高了检测效率。然而，现有技术中虽然有一些针对氨基酸、肉碱的检测方法，但是往往存在较大的系统误差(如转移过程中移液器移液偏差造成体积不准确)、检测灵敏度较低，并且难以同时定量检测氨基酸、肉碱。因此，在本领域中迫切需要一种能够在没有副作用的情况下与人血液中的氨基酸和酰基肉碱互溶从而同时对其进行定量检测的装置。
技术实现思路
1.要解决的技术问题鉴于上述内容，本专利技术所要解决的技术问题包括：1)使血液中的氨基酸和肉碱能够良好地互溶以便于检测；2)能够对溶解的氨基酸和肉碱进行快速、准确的定量检测；3)没有任何其他副作用。2.技术方案一方面，针对上述技术问题，本专利技术提供了一种可与人血中氨基酸及肉碱定量相互溶解免副作用的检测装置，所述检测装置包括：试剂盒，所述试剂盒设有多个容器孔，每个容器孔分别放置有氨基酸同位素标准品、酰基肉碱同位素标准品、洗脱溶液瓶、衍生化溶液瓶、萃取溶液瓶、复溶解溶液瓶和流动相瓶；多孔反应板，包括多个反应孔；和衬垫层，所述衬垫层分别置于所述试剂盒顶部和所述多孔反应板底部；以及检测装置使用说明书，其特征在于，所述氨基酸同位素标准品包含选自以下20种氨基酸中的一种或多种：D4-L-精氨酸、D1-L-瓜氨酸、D5-DL-谷氨酸、D2-L-鸟氨酸、D4-L-甲硫氨酸、D5-L-天门冬氨酸、13C-甘氨酸、D4-氨基丁酸、D3-L-丙氨酸、D3-天冬酰胺、D7-羟脯氨酸、D8-赖氨酸、D6-L-缬氨酸、C7-L-苯丙氨酸、D7-脯氨酸、D5-丝氨酸、D13-L-亮氨酸、D5-色氨酸、D3-蛋氨酸、D8-苯基丙氨酸；所述酰基肉碱同位素标准品包含选自以下12种酰基肉碱中的一种或多种：D2-乙酰基肉碱、D3-棕榈酰肉碱、D3-丁酰基肉碱、D3-己酰肉碱、D3-辛酰基肉碱、D3-月桂酰肉碱、D5-异戊酰基肉碱、D3-肉豆蔻酰肉碱、D3-丙酰基肉碱、D3-癸酰基肉碱、D3-十八酰基肉碱、D3-游离肉碱；所述洗脱溶液包含组分A：5mM甲酸钠+0.05％甲酸水溶液；和组分B：0.07％甲酸乙腈溶液；所述衍生化溶液包含异丙醇和丙酰氯，所述萃取溶液包含乙醇和水，所述复溶解溶液含包丁腈和水，所述流动相包含丙二醇、水和甲酸混合物，其中所述丙二醇、水和甲酸的重量比为(25-30):(25-45):(50-25)。根据前述方面所述的检测装置，所述混合内标物通过所述甲醇溶液制备成混合内标液，其中所述混合内标液中丝氨酸的浓度为100μM，其余氨基酸的浓度为50μM。根据前述方面所述的检测装置，其还包括质控品，所述质控品为正常人的混合血浆。3.有益效果本专利技术是基于如下发现进行的：在对氨基酸和酰基肉碱进行检测的过程中，本专利技术人发现，为了有利于氨基酸和酰基肉碱的溶解，在溶解过程中添加合适的醇和酸溶液，能够使各种氨基酸和酰基肉碱快速溶解，从而有利于进一步加快检测过程。基于以上发现，相比于现有技术，本专利技术的优点在于：(1)根据本专利技术的技术方案能够使多种氨基酸和酰基肉碱快速互溶，从而有利于快速检测；(2)根据本专利技术的技术方案所需的样品量少，检测精度高；(3)根据本专利技术的技术方案避免了检测过程中出现互相干扰、误检率等副作用。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述；显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选，成功开发了一种高效串联质谱法，所述方法采用特定的质谱检测条件，不仅简化操作，并且可以在一次检测中同时定量检测出多种氨基酸和酰基肉碱，且检测结果的灵敏度高，检测结果准确性高。1.检测方法如本文所用，“质谱法”(MS)是指通过它们的质量鉴定化合物的分析技术。MS技术一般包括(1)使化合物电离以形成带电化合物；和(2)检测带电化合物的分子量并计算质荷比(m/z)。化合物可通过任何合适的方式电离并检测。“质谱仪”一般包括电离器和离子检测器。术语“电子电离”如本文所用是指这样的方法，其中气态或蒸汽相中的感兴趣分析物与电子流相互作用。电子与分析物的相互作用产生分析物离子，其然后可用于质谱法技术。术语“化学电离”如本文所用是指这样的方法，其中试剂气体(例如氨)用于电子碰撞，并且分析物离子通过试剂气体离子与分析物分子相互作用而形成。2.实验程序设备、材料和试剂WaterUPLC超高效液相色谱仪和QuattroMicro串联质谱仪均购自美国Waters公司。EVX-119296孔氮吹仪和自动进样系统购自美国ApricotDesigns公司。恒温孵育震荡器得自德国PerkinElmer公司。ALPS热封仪和打孔器购自青岛医疗器械有限公司。试剂和材料购自英国剑桥同位素实验室新生儿筛查氨基酸同位素标准套装A和肉碱及多种酰基肉碱同位素标准套装B。本试剂盒的氨基酸同位素标准品包含20种氨基酸，分别为：D4-L-精氨酸、D1-L-瓜氨酸、D5-DL-谷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可与人血中氨基酸及肉碱定量相互溶解免副作用的检测装置，所述检测装置包括：/n试剂盒，所述试剂盒设有多个容器孔，每个容器孔分别放置有氨基酸同位素标准品、酰基肉碱同位素标准品、洗脱溶液瓶、衍生化溶液瓶、萃取溶液瓶、复溶解溶液瓶和流动相瓶；/n多孔反应板，包括多个反应孔；和/n衬垫层，所述衬垫层分别置于所述试剂盒顶部和所述多孔反应板底部；以及/n检测装置使用说明书，/n其特征在于，所述氨基酸同位素标准品包含选自以下20种氨基酸中的一种或多种：D4-L-精氨酸、D1-L-瓜氨酸、D5-DL-谷氨酸、D2-L-鸟氨酸、D4-L-甲硫氨酸、D5-L-天门冬氨酸、13C-甘氨酸、D4-氨基丁酸、D3-L-丙氨酸、D3-天冬酰胺、D7-羟脯氨酸、D8-赖氨酸、D6-L-缬氨酸、C7-L-苯丙氨酸、D7-脯氨酸、D5-丝氨酸、D13-L-亮氨酸、D5-色氨酸、D3-蛋氨酸、D8-苯基丙氨酸；/n所述酰基肉碱同位素标准品包含选自以下12种酰基肉碱中的一种或多种： D2-乙酰基肉碱、D3-棕榈酰肉碱、D3-丁酰基肉碱、D3-己酰肉碱、D3-辛酰基肉碱、D3-月桂酰肉碱、D5-异戊酰基肉碱、D3-肉豆蔻酰肉碱、D3-丙酰基肉碱、D3-癸酰基肉碱、D3-十八酰基肉碱、D3-游离肉碱；/n所述洗脱溶液包含组分A：5mM甲酸钠+0.05％甲酸水溶液；和组分B：0.07％甲酸乙腈溶液；/n所述衍生化溶液包含异丙醇和丙酰氯，所述萃取溶液包含乙醇和水，所述复溶解溶液含包丁腈和水，所述流动相包含丙二醇、水和甲酸混合物，其中所述丙二醇、水和甲酸的重量比为(25-30):(25-45):(50-25)。/n...

【技术特征摘要】
1.一种可与人血中氨基酸及肉碱定量相互溶解免副作用的检测装置，所述检测装置包括：
试剂盒，所述试剂盒设有多个容器孔，每个容器孔分别放置有氨基酸同位素标准品、酰基肉碱同位素标准品、洗脱溶液瓶、衍生化溶液瓶、萃取溶液瓶、复溶解溶液瓶和流动相瓶；
多孔反应板，包括多个反应孔；和
衬垫层，所述衬垫层分别置于所述试剂盒顶部和所述多孔反应板底部；以及
检测装置使用说明书，
其特征在于，所述氨基酸同位素标准品包含选自以下20种氨基酸中的一种或多种：D4-L-精氨酸、D1-L-瓜氨酸、D5-DL-谷氨酸、D2-L-鸟氨酸、D4-L-甲硫氨酸、D5-L-天门冬氨酸、13C-甘氨酸、D4-氨基丁酸、D3-L-丙氨酸、D3-天冬酰胺、D7-羟脯氨酸、D8-赖氨酸、D6-L-缬氨酸、C7-L-苯丙氨酸、D7-脯氨酸、D5-丝氨酸、D13-L-亮氨酸、D5-色氨酸、D3-蛋氨酸、D8-苯基丙氨酸；
所述酰基肉碱同位素标准品包含选自...

【专利技术属性】
技术研发人员：马宇春，朱玉洁，
申请(专利权)人：江苏食品药品职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32