一种利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法，属于细胞培养技术领域。利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法包括：诱导分化iPSC至iPSC‑MSC并扩增iPSC‑MSC和制备iPSC‑MSC制剂，其中还包括iPSC‑MSC特性的鉴定和iPSC‑MSC制剂的质控。本发明专利技术制备的临床级别间充质干细胞制剂具备为各种病人的个体化需求提供来源无限、质量稳定、同质性高、相对可控的间充质干细胞来源等优势，实现规模产业化，同时具有临床应用市场前景广阔的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法
本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法。
技术介绍
器官组织内及体外培养的间充质干细胞(Mesenchymalstem/stromalcell,MSC)都具有天然的高异质性，既是其发挥多重功能活性的基础，也是影响MSC实验重复性、MSC质量乃至临床疗效的限制因素，给标准化和规范化评估MSC治疗的安全性和有效性造成了更多的变数和困难。基于细胞重编程技术的人诱导多能干细胞(inducedpluripotentstemcell，iPSC)及相关研究，显著提升了对干细胞维持多能性和干性及其分子调控机理的理解，同时也提供一个无限的病人特异性个体化干细胞的来源。随着非整合iPSC诱导技术的改进和优化，目前已可获得不含病毒载体和致瘤基因c-myc的iPSC。iPSC-MSC仍具有iPSC的优势，可从个体皮肤成纤维细胞或各种组织细胞诱导而成，免除异体移植相关的排斥、疾病传输、伦理等相关问题；iPSC从原理上来说可以无限传代，故MSC的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)当人iPSC于6孔板中长至80～90％时，更换iPSC-MSC诱导培养基进行培养8～12d，每2～3d换液一次，获得贴壁细胞，消化，得到iPSC-MSC单细胞；/n2)将所述iPSC-MSC单细胞按8×10

【技术特征摘要】
1.一种利用人诱导多能干细胞制备临床级别间充质干细胞制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)当人iPSC于6孔板中长至80～90％时，更换iPSC-MSC诱导培养基进行培养8～12d，每2～3d换液一次，获得贴壁细胞，消化，得到iPSC-MSC单细胞；
2)将所述iPSC-MSC单细胞按8×104cell/cm2接种至25cm2细胞培养瓶中，定义为iPSC-MSC-P0，更换iPSC-MSC生长培养基进行培养4～7d，每2～3d换液一次，消化，以4×104cell/cm2接种至25cm2细胞培养瓶中，定义为iPSC-MSC-P1，在iPSC-MSC生长培养基中继续培养4～7d，每2～3d换液，消化，以2×104cell/cm2接种至75cm2细胞培养瓶中，以后的每4～7d待细胞长至80～90％时，以1×104cell/cm2接种至175cm2细胞培养瓶，以1:3～1:4传代，得到大量的iPSC-MSC-P3细胞；
所述iPSC-MSC诱导培养基为含体积浓度2～5％人源血小板裂解物、体积浓度1％100×微量非必需氨基酸溶液、体积浓度1％100×谷氨酰胺添加剂、1.0g/LD-葡萄糖的DMEM培养基；
所述iPSC-MSC生长培养基为含体积浓度2～5％人源血小板裂解物、体积浓度1％100×微量非必需氨基酸溶液、体积浓度1％100×谷氨酰胺添加剂、4.5g/LD-葡萄糖的DMEM培养基；
3)将采用临床级别的无血清RecoveryTMCellCultureFreezingMedium冻存液中按1×106～1×1010个/mL的浓度分装所述iPSC-MSC-P3细胞，制备的间充质干细胞制剂保存于细胞库。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)或步骤2)中所述消化用酶为TrypLETMSelect；所述消化的时间为5～8min。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述消化后进行离心；所述离心的转速为1000～1500rpm；所述离心的时间为3～7min。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述培养的温度为36～38℃。


5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：张娟，周光前，
申请(专利权)人：深圳丹伦基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44