一种绒毛膜间充质干细胞分离培养扩增方法技术

本发明专利技术公开了一种绒毛膜间充质干细胞分离培养扩增方法，1)清理，2)处理，3)培养，4)接种传代，本发明专利技术采用的组织块分离法获得的绒毛膜间充质干细胞方法简单，成本低，细胞活性好，纯度高，最终收获细胞浓度高，获得的间充质干细胞操作简便，培养时间短，培养第4～5天即可看到细胞从组织块爬出，整个干细胞分离制备培养工艺能够快速、高效从绒毛组织获取高纯度的间充质干细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种绒毛膜间充质干细胞分离培养扩增方法
本专利技术涉及干细胞分离培养
，尤其涉及一种绒毛膜间充质干细胞分离培养扩增方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体，是动物有机体和各种组织器官的起源细胞。新近的研究表明，众多成体组织中(如骨髓、肌肉、胃肠道、皮肤、视网膜、外周及中枢神经系统等)均存在间充质干细胞。MSCs它来源广泛、易体外分离扩增，具有向三种胚层细胞分化的多向分化潜能；具有低免疫原性、不能刺激产生同种异体免疫反应、不被细胞毒性T细胞和NK细胞杀伤，“归巢”修复作用，肿瘤趋向性以及免疫调节作用。间充质干细胞来源于发育早期的中胚层和外胚层，而胎盘的主体部分为羊膜及绒毛膜中胚层，这在理论上证实了胎盘中含有间充质干细胞的可能性。因此胎盘绒毛膜间充质干细胞(chorionicvillimesenchymalstemcells，CV-MSC)可以从胎盘中扩增获得，从生物学特性、增殖能力、表面标记物都表达间充质干细胞的特性，具备向骨、脂肪分化等细胞系本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绒毛间充质干细胞分离培养扩增方法，其特征在于，包括下列步骤：/n1)清理/n胎儿成功分娩后，无菌条件下获取胎盘组织，用清洗液冲洗胎盘组织表面，清洗去除胎盘组织表明残留的血液与其他杂物；/n2)处理/n将清洗后的胎盘组织，以脐带根部为交叉中心剪十字切口，轻轻剥离羊膜层，将脐带和羊膜分离后，小心分离绒毛膜；/n3)将剥离的绒毛膜置于含双抗100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素的PBS液中反复冲洗去除血块；/n4)培养/n将绒毛膜铺平于平皿内，用无菌组织剪将绒毛膜组织剪碎成大小1～3cm

【技术特征摘要】
1.一种绒毛间充质干细胞分离培养扩增方法，其特征在于，包括下列步骤：
1)清理
胎儿成功分娩后，无菌条件下获取胎盘组织，用清洗液冲洗胎盘组织表面，清洗去除胎盘组织表明残留的血液与其他杂物；
2)处理
将清洗后的胎盘组织，以脐带根部为交叉中心剪十字切口，轻轻剥离羊膜层，将脐带和羊膜分离后，小心分离绒毛膜；
3)将剥离的绒毛膜置于含双抗100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素的PBS液中反复冲洗去除血块；
4)培养
将绒毛膜铺平于平皿内，用无菌组织剪将绒毛膜组织剪碎成大小1～3cm3，将所述组织块平铺于细胞培养皿中，待水分挥发后加入含有10～20％胎牛血清的培养液中进行培养；
5)接种传代
所述绒毛膜组织原代分离培养间充质干细胞生长达到80～90％融合后，即可传代扩增培养，获得绒毛膜间充质干细胞，用0.25％胰酶/EDTA消化细胞，按5000～7000个/cm2接种，接种后4～5天可以达到95％融合，融合95％以上所述间充质干细胞可以扩增至20代次以上。


2.如权利要求1所述的绒毛膜间充质干细胞分离培养扩增方法，其特征在于：所述步骤1)中清洗液含青霉素、链霉素的磷酸盐缓冲液。

【专利技术属性】
技术研发人员：孟明耀，侯宗柳，李琳，刘红岩，李健峰，李磊，顾玉琪，
申请(专利权)人：江苏赛亿细胞技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32