一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC-MSCs衰老培养基的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC

Application of an extracellular vesicle in the preparation of IPSC MSCs aging alleviation medium

【技术实现步骤摘要】
一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC
‑
MSCs衰老培养基的应用


[0001]本专利技术涉及细胞生物学与干细胞
，特别涉及一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC
‑
MSCs衰老培养基的应用。

技术介绍

[0002]细胞衰老在整个生命周期中都可发生，是机体衰老的基本单位。衰老细胞在形态上表现出细胞结构退行性改变，且伴随基因表达改变、细胞周期停滞、复制能力下降、线粒体改变、功能衰退及代谢减缓。
[0003]细胞外囊泡(Exetracellular vesicles，EVs)是细胞分化、活化、衰老、转化等刺激所诱导产生的异质性囊泡，作为一种细胞间通讯的功能性载体，以旁分泌或内分泌方式改变相邻或远处细胞行为，参与维持组织细胞功能和调节细胞内环境稳态，在正常生理过程和疾病病理过程中发挥重要功能。衰老干细胞释放的外泌体与年轻干细胞释放的外泌体具有不同的生物学功能。如：年轻的骨髓间质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)释放的外泌体能使衰老的造血干细胞恢复活力并更新其功能。
[0004]MSCs在再生医学和组织工程领域被广泛用于干细胞治疗，是关键治疗工具之一。MSCs具有自我更新和多系分化的潜能，通过细胞间的相互作用和大量可溶性分子的分泌去发挥抗炎、促增殖、促血管生成、抗纤维化、抗凋亡等功能。在组织工程和细胞治疗中，MSCs需要大规模的细胞培养和长时间的体外细胞培养，而干细胞在体外的连续扩张会导致复制性衰老，而且移植后往往不能得到预期的结果。衰老会削弱MSCs的分化和免疫抑制优势、影响其正常功能、增加其遗传不稳定性风险，还可通过SASP改变MSCs所处的微环境，这一定程度上制约了MSCs基础研究、产业化发展与临床应用。诱导多能干细胞(Induced pluripotent stem cell,iPSC)，在体外可定向诱导分化出多种细胞，具有供体的确切遗传背景和多能性，可实现精确的疾病建模、体外药物测试等，具有广阔医疗应用前景。目前，有效延缓/逆转的人类iPSC来源的MSCs在体外培养中的复制性衰老仍是推进其临床应用和产业发展亟需解决的关键问题。
[0005]因此，现有技术还有待于改进和发展。

技术实现思路

[0006]鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC
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MSCs衰老培养基的应用，旨在解决现有iPSC
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MSCs在体外培养易出现复制性衰老的问题。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC
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MSCs衰老培养基的应用。
[0009]所述的应用，其中，所述细胞外囊泡为第六代iPSC
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MSCs分泌的细胞外囊泡。
[0010]所述的应用，其中，所述细胞外囊泡通过促进iPSC
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MSCs数量增长来缓解iPSC
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MSCs衰老。
[0011]所述的应用，其中，所述细胞外囊泡通过促进iPSC
‑
MSCs迁移来缓解iPSC
‑
MSCs衰老。
[0012]所述的应用，其中，所述细胞外囊泡通过降低iPSC
‑
MSCs线粒体密度来缓解iPSC
‑
MSCs衰老。
[0013]所述的应用，其特征在于，所述细胞外囊泡通过改善iPSC
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MSCs线粒体膜电位状态来缓解iPSC
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MSCs衰老。
[0014]有益效果：本专利技术在体外扩增培养iPSC
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MSCs过程中，通过在培养体系中加入性能好的骨髓间质干细胞分泌的细胞外囊泡，结果发现其可有效缓解iMSC衰老表型。因此本专利技术提供了一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC
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MSCs衰老培养基的应用，通过采用含有细胞外囊泡的培养基在体外培养iPSC
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MSCs，能提高iPSC
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MSCs的产量，更好的维续iPSC
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MSCs优良性能，有利于推动iPSC
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MSCs产业化发展和临床应用。
附图说明
[0015]图1是实施例1中iPSC
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MSCs来源的细胞外囊泡形态特征图；
[0016]图2是实施例1中iPSC
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MSCs来源的细胞外囊泡颗粒粒径分析图；
[0017]图3是实施例1中iPSC
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MSCs来源的细胞外囊泡标志蛋白检测结果图；
[0018]图4是实施例2中iPSC
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MSCs来源的细胞外囊泡促进衰老iPSC
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MSCs细胞数量增长；
[0019]图5是实施例3中iPSC
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MSCs来源的细胞外囊泡有助于衰老iPSC
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MSCs迁移；
[0020]图6是实施例4中iPSC
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MSCs来源的细胞外囊泡降低了衰老iPSC
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MSCs的线粒体密度；
[0021]图7是实施例5中iPSC
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MSCs来源的细胞外囊泡改善了衰老iPSC
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MSCs的线粒体膜电位状态。
具体实施方式
[0022]本专利技术提供一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC
‑
MSCs衰老培养基的应用，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0023]本专利技术提供了一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC
‑
MSCs衰老培养基的应用。
[0024]在本专利技术中，所述细胞外囊泡通过促进iPSC
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MSCs数量增长、促进iPSC
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MSCs迁移、降低iPSC
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MSCs线粒体密度或者改善iPSC
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MSCs线粒体膜电位状态来缓解iPSC
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MSCs衰老。
[0025]优选地，本专利技术中所述细胞外囊泡为第六代iPSC
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MSCs分泌的细胞外囊泡。
[0026]下面通过具体实施例对本专利技术做进一步的解释说明：
[0027]实施例1
[0028]iPSC
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MSCs来源的EV提取和鉴定
[0029]1)、iPSC
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MSCs来源的EV提取：
[0030]将iPSC来源MSCs的第五代细胞传代并接种至T175细胞培养瓶中，使用无血清的hMSC培养基，至于37℃5％CO2培养箱中培养。每日收集细胞上清液，更换新鲜培养基，直至细胞汇合度大于90％。
[0031]将已收集细胞上清液于室温、1000xg离心10min，进行预处理。使用millipo本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞外囊泡在制备缓解iPSC
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MSCs衰老培养基的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细胞外囊泡为第六代iPSC
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MSCs分泌的细胞外囊泡。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细胞外囊泡通过促进iPSC
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MSCs数量增长来缓解iPSC
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MSCs衰老。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述细胞外囊泡通过促进iPSC

【专利技术属性】
技术研发人员：何良格，周光前，
申请(专利权)人：深圳丹伦基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：