一种金属螯合磁性微珠及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种金属螯合磁性微珠及其制备方法和应用，该磁珠采用液液反应，先将硅烷偶联剂与配体天冬氨酸或羧甲基天冬氨酸进行连接，再将连有配基的硅烷偶联剂与二氧化硅层连接，最后螯合金属离子，制成金属螯合磁性微珠。本发明专利技术采用这种方式避免了先将二氧化硅层与硅烷偶联剂连接再与配基连接时硅烷偶联剂的脱落，提高了金属螯合磁性微珠的制备效率及修饰配体的数量，同时也使得磁珠拥有更强的组氨酸标签蛋白选择性和分散稳定性以及化学稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种金属螯合磁性微珠及其制备方法和应用
本专利技术涉及生物材料
，特别涉及一种金属螯合磁性微珠及其制备方法和应用。
技术介绍
蛋白质是最重要的生物大分子之一，在生命系统中是绝大多数功能的执行者。而对目标蛋白质进行纯化和分离是研究蛋白质的基础。因此分离纯化蛋白显得尤为重要。目前分离纯化蛋白质多根据不同蛋白质的分子量、荷电状态、溶解度的不同以及官能团的差异而产生。代表方法有离子交换层析、电泳法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、超滤、凝胶层析、高效液相色谱层析、亲和层析等，此外，亲和层析中的金属螯合层析以其高效率、亲和性强、成本低、稳定性强等特点备受关注。金属螯合层析具有很强的选择性和负载能力，是一种利用在载体上螯合过渡金属离子如Zn2+、Cu2+、Ni2+等分离纯化蛋白质的方法。金属离子存在空轨道可与目标蛋白质上的多种氨基酸如组氨酸、赖氨酸、色氨酸上的活性基团之间配位结合，从而使目标蛋白被吸附到带有金属离子的载体上，再用洗脱液将蛋白洗脱可得到纯化后的目标蛋白。水凝胶、硅胶、羟基磷灰石以及多孔玻璃是目前最常见的金属螯合层析载体，但其有分离本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金属螯合磁性微珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)采用共沉淀法制得四氧化三铁磁珠后，包裹二氧化硅层，得到二氧化硅磁珠；/n2)采用液相-液相合成方法合成配体后，与硅烷偶联剂结合，然后，再将连有配体的硅烷偶联剂连接到所述二氧化硅磁珠上，得到配体修饰的二氧化硅磁珠；/n3)将所述配体修饰的二氧化硅磁珠与金属离子螯合，得到金属螯合磁性微珠。/n

【技术特征摘要】
1.一种金属螯合磁性微珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)采用共沉淀法制得四氧化三铁磁珠后，包裹二氧化硅层，得到二氧化硅磁珠；
2)采用液相-液相合成方法合成配体后，与硅烷偶联剂结合，然后，再将连有配体的硅烷偶联剂连接到所述二氧化硅磁珠上，得到配体修饰的二氧化硅磁珠；
3)将所述配体修饰的二氧化硅磁珠与金属离子螯合，得到金属螯合磁性微珠。


2.根据权利要求1所述的金属螯合磁性微珠的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中采用共沉淀法制得四氧化三铁磁珠后，包裹二氧化硅层，得到二氧化硅磁珠，包括：
将铁盐和亚铁盐溶于除氧去离子水中，加入浓氨水水浴搅拌0.5h后，升温陈化，洗涤，得到四氧化三铁磁珠；
向所述四氧化三铁磁珠中加入去离子水和乙醇，超声分散后，加入浓氨水和正硅酸乙酯，在30℃下水浴搅拌一段时间，得到二氧化硅磁珠。


3.根据权利要求2所述的金属螯合磁性微珠的制备方法，其特征在于，所述铁盐为六水氯化铁；所述亚铁盐为六水硫酸亚铁铵；所述铁盐和所述亚铁盐的物质的量之比为1.8∶1；所述陈化的陈化温度为80-90℃，陈化时间为55-65min；所述30℃水浴搅拌的搅拌时间为12-24h。。


4.根据权利要求1所述的金属螯合磁性微珠的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中采用液相-液相合成方法合成配体后，与硅烷偶联剂结合，然后，再将连有配体的硅烷偶联剂连接到所述二氧化硅磁珠上，得到配体修饰的二氧化硅磁珠，包括：
去离子水冰浴预冷后，逐滴加入硅烷偶联剂，冰浴搅拌水解，再加入氢氧化钠，磁力搅拌溶解后，加入L-天冬氨酸，调节pH至10-11后，于第一设定温度下水浴搅拌第一设定时间，得到Asp配体；
用浓盐酸调节所述Asp配体的pH至3后，加入所述二氧化硅磁珠，混合并超声分散，于第三设定温度下水浴搅拌第三设定时间后，洗涤，得到Asp磁珠。


5.根据权利要求1所述的金属螯合磁性微珠的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中采用液相-液相合成方法合成配体后，与硅烷偶联剂结合，然后，再将连有配体的硅烷偶联剂连接到所述二氧化硅磁珠上，得到配体修饰的二氧化硅磁珠，包括：
去离子水冰浴预冷后，逐滴加入硅烷偶联剂，冰浴搅拌水解，再加入氢氧化钠，磁力搅拌溶解后，加入L-天冬氨酸，调节pH至10-11后，于...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙恩杰，曾凯，程子璐，谢雅君，范瑞文，李呈祥，谢浩，
申请(专利权)人：武汉理工大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42