ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了ADAR1在用于治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用；所述ADAR1是指过表达ADAR1；所述过表达ADAR1通过抑制NLRP3炎性体及炎症反应，从而抑制非酒精性脂肪肝的形成。过表达ADAR1可有效抑制NLRP3炎性体及炎症反应，从而明显改善非酒精性脂肪肝的形成。也说明可以促进ADAR1过表达的ADAR1促进剂可以用于治疗非酒精性脂肪肝疾病药物。

【技术实现步骤摘要】
ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用。
技术介绍
非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD)是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢应激性肝损伤，随着人民生活水平提高及生活方式改变，NAFLD的发病率逐年上升，目前已高达全球总人口的25％，成为全球范围内最常见的慢性肝病，对国民健康和社会发展构成严重威胁。由于其发病率高、发病机制复杂且尚缺乏有效治疗手段，已成为全球代谢领域研究的热点和难点。NAFLD的潜在危害巨大，与肝硬化、肝癌及糖尿病、心血管疾病息息相关，但是目前尚无任何一种药物被FDA批准用于NAFLD的治疗，因此，寻求一种可以用于治疗NAFLD的药物具有重要的临床意义。
技术实现思路
为了解决上述现有技术的不足，本专利技术提供ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用。本专利技术提供的ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用是通过以下技术方案实现的：ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用。进一步地，所述ADAR1是指过表达ADAR1，所述过表达的ADAR1可以通过构建慢病毒质粒或使用ADAR1的促进剂实现。进一步地，所述过表达ADAR1通过抑制NLRP3炎性体及炎症反应，从而抑制非酒精性脂肪肝的形成。一种ADAR1促进剂在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用，所述ADAR1促进剂能够促进ADAR1过表达。本专利技术的技术方案相对于现有技术而言，具有以下有益效果：本专利技术经过实验证明：过表达ADAR1可有效抑制NLRP3炎性体及炎症反应，从而明显改善非酒精性脂肪肝的形成。也说明可以促进ADAR1过表达的ADAR1促进剂可以用于治疗非酒精性脂肪肝疾病药物。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。图1是过表达ADAR1减少高脂小鼠体重增加幅度及肝指数的示意图；图2是过表达ADAR1改善高脂小鼠NAFLD形成的示意图；图3是过表达ADAR1抑制高脂喂养小鼠肝脏组织中炎症因子分泌的示意图；图4是过表达ADAR1增加高脂喂养小鼠肝脏组织中脂质分解相关基因表达的示意图；图5是过表达ADAR1抑制高脂喂养小鼠肝脏组织中脂质合成相关基因表达的示意图；图6是过表达ADAR1抑制高脂喂养小鼠肝脏组织中NLRP3炎性体表达的示意图。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效。本专利技术中未详细说明工作原理属于现有技术和本领域的公知常识，本
的技术人员应当知晓。一、实验材料与方法本专利技术所使用的实验动物为：8-10周龄C57BL/6雄性小鼠，购自上海斯莱克实验动物有限公司；本专利技术所使用的HFD饲料购自江苏南通特洛菲饲料科技有限公司(饲料代码：TP23300)，HFD饮食富含脂肪(60％kcal％)。本专利技术所使用的引物为引物购自由上海生工设计。本专利技术将小鼠分为对照组及高脂组，对照组进一步分为Normal组(空白组)和HFD组(仅喂养HFD组)，高脂组又进一步分为LV-ADAR1组(ADAR1过表达组)及LV-NC组(过表达空载体组)，每组6只，高脂组经HFD饮食诱导16周构建NAFLD模型。实施例1过表达ADAR1减少高脂小鼠体重增加幅度及肝指数高脂(HFD)饮食模拟现代西方饮食结构，其主要的能量摄入来自脂肪，饲喂HFD饮食的动物可模拟NAFLD患者的主要组织病理学特征。本专利技术所使用的实现ADAR1过表达是通过构建ADAR1慢病毒质粒(LV-ADAR1)来实现的。利用化学合成的人ADAR1基因(NM_001111)CDS区序列，得到的产物按polyA法在末端加A，使用序列如SEQID:1和SEQID:2所示的引物对克隆入T载体，T4DNA连接酶与ADAR1连接，转化、摇菌、测序鉴定。脂质体试剂共转染GV287和包装质粒Helper1.0和Helper2.0到293T细胞中，48h后收集细胞培养上清，25000rpm离心1.5h，重组病毒颗粒沉淀重悬于100ulPBS中备用，包装好的成熟病毒及阴性对照分别命名为LV-ADAR1-GFP及LV-GFP。为了测定病毒滴度，使用荧光法系列稀释病毒悬液，感染肝细胞(或巨噬细胞)，感染24h后换液，72h后观察荧光表达情况，荧光细胞数随稀释倍数的增加而减少。根据表达GFP荧光蛋白表达情况，进行滴度分析，计算病毒滴度。采用ADEasyTM系统构建表达人全长ADAR1蛋白的重组慢病毒载体LV-ADAR1，重组慢病毒进行鉴定、扩增后，测定病毒滴度，实验结束前2周使用尾静脉注射方法分别对小鼠尾静脉进行注射LV-ADAR1和LV-NC，注射病毒滴度为1*108TU。实验期间每周测定体重，处死后测定肝重，并计算肝指数(肝重/体重)，取肝脏组织做进一步分析。从图1-a中可看出，与高脂组相比，ADAR1过表达组小鼠体重增加幅度明显减少，从图1-b中可看出，ADAR1过表达组小鼠的肝指数(注：肝指数＝肝重/体重)较高脂组也明显下降。图中，*表示与高脂喂养的模型组小鼠相比p<0.05；#表示与高脂喂养的模型组小鼠相比p<0.05。实施例2过表达ADAR1改善高脂小鼠NAFLD形成通过HE染色对上述实施例1的各组小鼠肝脏进行NAS评分，取各组小鼠肝脏组织，经过甲醛固定后，使用酒精脱水，二甲苯透明，经石蜡包埋后使用冰冻切片机进行切片，经二甲苯脱蜡后进行HE染色。HE染色主要包括苏木精染色，氨水返蓝，伊红染色后使用酒精脱水，二甲苯透明，普通光学显微镜观察拍照，以比较差异各组小鼠肝脏组织脂肪变性、炎症反应及气球样变程度。其中NAS评分依据为3个NAFLD的主要组织病理学特征的半定量评分指标：脂肪变性评分(0-3分)，炎症反应程度评分(0-3分)，气球样变评分(0-2分)。从结果中可见(图2)，过表达ADAR1的高脂喂养小鼠肝脏NAS评分较HFD组明显降低，表现为肝脏脂滴沉积及炎症反应减轻，说明上调ADAR1表达可明显改善高脂喂养所致的NAFLD病理改变。实施例3过表达ADAR1抑制高脂喂养小鼠肝脏组织中炎症因子分泌设计炎症因子IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α的引物，使用Trizolregent(InvitrogenlifeTechnologies,Carlsbad,CA,USA)试剂盒按照操作手册抽提RNA，使用PrimeScriptTMRTReagentKit(Takara，Tokyo，Japan)试剂盒逆转录获得cDNA，使用ThermoScientificSYBRGreenqPCRMast本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用。


2.如权利要求1所述的ADAR1在治疗非酒精性脂肪肝疾病药物中的应用，其特征在于，所述ADAR1是指过表达ADAR1。


3.如权利要求2所述的ADAR1在治疗非酒精...

【专利技术属性】
技术研发人员：王芳，刘宇星，项荣，范亮亮，
申请(专利权)人：中南大学湘雅三医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43