一种预防非洲猪瘟重组伪狂犬病活疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种预防非洲猪瘟重组伪狂犬病活疫苗及其制备，本发明专利技术构建的非洲猪瘟病毒CDV2/P72/BL602基因和能敲除野生型P72基因的sacas9SgRNA序列重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株在BHK细胞株获得可以表达重组CDV2/P72/BL602蛋白抗原，其表达量稳定，同时经过体外细胞模拟实验表明该方法可以干扰病毒复制。以该重组株伪狂病病毒株作为生产毒株，经过悬浮微载体培养获得的表达表达重组CDV2/P72/BL602蛋白抗原制备成活疫苗，可以预防最近流行的非洲猪瘟病毒，还可以做成喷雾饮水形式疫苗减少注射应激反应。

【技术实现步骤摘要】
一种预防非洲猪瘟重组伪狂犬病活疫苗及其制备方法
本专利技术涉及一种预防非洲猪瘟重组伪狂犬病活疫苗及其制备方法，属于兽用生物制品领域。技术背景非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起猪的一种急性、烈性传染病。ASFV可感染家猪、野猪和蜱类，无明显的品种、性别和年龄差异，是唯一一种虫媒传播的DNA病毒。广泛分布的蜱类是重要的储存宿主和传播媒介。接触传播、经食物传播和软蜱吸血传播是本病的主要传播途径，病毒在野猪之间、野猪与家猪之间以及在家猪之间循环传播使得该病难以根除。该病病程短、死亡率高，家猪和欧洲野猪的病死率最高达100％，对养猪业危害巨大，造成巨大的经济损失和社会影响。世界动物卫生组织(OIE)将其列为须通报动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。目前ASF缺乏有效的疫苗，预防要依靠严格的边境检疫、养殖场良好的生物安全措施以及野猪的跨境移动，而一旦暴发则需要采取紧急根除和净化以及区域化管理等措施以控制疫情恢复生产。非洲猪瘟原发于非洲，1957年蔓延至欧洲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预防非洲猪瘟的重组伪狂犬病活疫苗，其特征在于该疫苗是用重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株作为生产种毒制备的；/n所述重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株含有SEQ ID No.1所示的重组序列；/n所述SEQ ID No.1所示的重组序列包括SEQ ID No.2，SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示CDV2/P72/BL602蛋白序列和sacas9SgRNA基因序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种预防非洲猪瘟的重组伪狂犬病活疫苗，其特征在于该疫苗是用重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株作为生产种毒制备的；
所述重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株含有SEQIDNo.1所示的重组序列；
所述SEQIDNo.1所示的重组序列包括SEQIDNo.2，SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示CDV2/P72/BL602蛋白序列和sacas9SgRNA基因序列。


2.如权利要求1所述的一种预防非洲猪瘟的重组伪狂犬病活疫苗，其特征在于所述的该重组伪狂犬病病毒TIE1872V2Sag72株的构建方法，包括：
(1)将非洲猪瘟病毒的(CDV2/P72/BL602)和sacas9SgRNA干扰素区域重组融合连接入真核质粒载体构建重组臂重组质粒；
(2)用脂质体转染的方法将重组臂的真核表达质粒转染至BHK细胞株中；通过流式分选得到表达有CDV2/P72/BL602蛋白的重组病毒；
(3)进行重复低密稀释度铺板克隆筛后获得稳定表达CDV2/P72/BL602蛋白的阳性病毒株，能稳定高效表达CDV2/P72/BL602和sacas9SgRNA蛋白病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晴，周远诚，王彬，高洁，伏显华，冯倩倩，杜继文，李淑萍，
申请(专利权)人：北京中海生物科技有限公司，畜科生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11