与人LAG-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与人LAG3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用。本发明专利技术的与人LAG‑3蛋白结合的抗体是有别于现有LAG‑3抗体的新型抗体分子序列，具有与人LAG3蛋白特异性结合的抗原结合位点，显示了良好的生物学阻断活性。同时，本发明专利技术的抗体能够与BMS986016竞争抗原表位，不仅能够抑制BMS986016与抗原结合，还能促使已与抗原结合的BMS986016发生部分分离；这表明本发明专利技术的与人LAG‑3蛋白结合的抗体和BMS986016与抗原结合的位点不同，本发明专利技术的与人LAG‑3蛋白结合的抗体的结合能够改变抗原构型，推测其对LAG‑3对T细胞的抑制通路的封闭作用优于BMS986016。

【技术实现步骤摘要】
与人LAG-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用
本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种与人LAG-3蛋白结合的抗体及其编码氨基酸序列和应用。
技术介绍
正常情况下，人体免疫系统可以识别并清除肿瘤微环境中的肿瘤细胞，陈和提出的“肿瘤-免疫循环”阐述了肿瘤产生、人体免疫系统清除肿瘤细胞的七个环节：(1)肿瘤抗原释放；(2)肿瘤抗原呈递；(3)启动和激活效应性T细胞；(4)T细胞向肿瘤组织迁移；(5)肿瘤组织T细胞浸润；(6)T细胞识别肿瘤细胞；(7)清除肿瘤细胞。然而，为了生存和生长，肿瘤细胞能够采用不同策略使人体的免疫系统受到抑制、发生异常而保护自身不能被杀伤和清除，从而在抗肿瘤免疫应答的各阶段得以幸存。上述七个环节中任何地方出现异常均可以导致抗肿瘤-免疫循环失效，出现免疫逃逸。肿瘤免疫治疗即是通过恢复免疫系统的抗肿瘤免疫应答能力从而实现利用免疫系统来治疗癌症的一种治疗方法。包括单克隆抗体类免疫检查点抑制剂、治疗性抗体、癌症疫苗、细胞治疗和小分子抑制剂等。LAG-3(Lymphocyte-activationgene3)属于免疫球蛋白超家族，其结构域由胞外区、跨膜区和胞质区三个部分组成，LAG-3的基因定位于12号染色体(12P13)，与CD4分子在染色体上的定位和结构相似。抑制LAG-3能够让T细胞重新获得细胞毒性，从而增强对肿瘤的杀伤效果；同时抑制LAG-3还能够降低调节T细胞抑制免疫反应的功能。因此，LAG-3被认为是一个比其它免疫检查点蛋白更吸引人的靶点。LAG-3是目前免疫检查点二代靶点中，临床数据较多、成药性相对确定的靶点，针对该靶点的抗体药物将来有可能成为重要的抗肿瘤药物。
技术实现思路
本申请的专利技术目的是提供一种与人LAG-3蛋白结合的抗体及其编码基因和应用。为实现上述专利技术目的，本申请的技术方案如下：一种与人LAG-3蛋白结合的抗体，包括轻链可变区和重链可变区中的至少一个氨基酸片段，所述的轻链可变区具有含有如①、②或③组所示氨基酸序列的轻链CDR区：①：与SEQIDNo.1具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.2具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.3具有至少50％同源性的氨基酸序列；②：与SEQIDNo.7具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.8具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.9具有至少50％同源性的氨基酸序列；③：与SEQIDNo.13具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.14具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.15具有至少50％同源性的氨基酸序列；所述的重链可变区具有含有如④或⑤组所示氨基酸序列的重链CDR区：④：与SEQIDNo.4具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.5具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.6具有至少50％同源性的氨基酸序列；⑤：与SEQIDNo.10具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.11具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.12具有至少50％同源性的氨基酸序列。本专利技术采用带有His标签的人LAG-3蛋白的胞外结构域蛋白免疫小鼠，发现免疫小鼠的血清效价可达1:256000，而后通过构建杂交瘤细胞株筛选出与人LAG-3具有高度亲和力的杂交瘤细胞亚克隆，表达获得了本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体。本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体具有与BMS986016相当的抗原亲和力，同时，本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体能够与BMS986016竞争抗原表位，不仅能够抑制BMS986016与抗原结合，还能促使已与抗原结合的BMS986016发生部分分离；这表明本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体和BMS986016与抗原结合的位点不同，本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体的结合能够改变抗原构型，推测其对LAG-3对T细胞的抑制通路的封闭作用优于BMS986016。作为优选，所述的轻链可变区具有如SEQIDNo.13、14和15所示氨基酸序列的轻链CDR区，所述的重链可变区具有如SEQIDNo.4、5和6所示氨基酸序列的重链CDR区。或者，所述的轻链可变区具有如SEQIDNo.7、8和9所示氨基酸序列的轻链CDR区，所述的重链可变区具有如SEQIDNo.10、11和12所示氨基酸序列的重链CDR区。本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体可以是鼠源抗体、人鼠嵌合抗体或人源化抗体。人鼠嵌合抗体和人源化抗体都是在鼠源抗体的基础上进行改造获得的。当所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体为鼠源抗体或人鼠嵌合抗体时，所述的重链可变区具有如SEQIDNo.16或SEQIDNo.18所示的氨基酸序列，所述的轻链可变区具有如SEQIDNo.19或SEQIDNo.21所示的氨基酸序列。当所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体为人鼠嵌合抗体时，人鼠嵌合与人LAG-3蛋白结合的抗体的轻链可变区与上述相同，其轻链恒定区则为人IgGkappaCL区序列；其重链可变区与上述相同，其重链恒定区则为人IgG4S228P的CH1，CH2和CH3区序列。当所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体为全人源化抗体时，为全人源化抗体，该全人源化抗体的重链氨基酸序列如SEQIDNo.23所示，该全人源化抗体的轻链氨基酸序列如SEQIDNo.33所示。或者，为全人源化抗体，该全人源化抗体的重链氨基酸序列如SEQIDNo.34所示，该全人源化抗体的轻链氨基酸序列如SEQIDNo.37所示。本专利技术还提供了所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体的编码基因，以及含有所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体的编码基因的重组载体。本专利技术还提供了表达所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体的重组细胞。本专利技术还提供了所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体在制备恶性肿瘤治疗药物中的应用。该恶性肿瘤治疗药物可以是本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体，也可以是本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体与其他物质的偶联物或组合物；用于治疗的恶性肿瘤一般是由LAG-3造成T细胞失效而导致的。与现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：本专利技术采用带有His标签的人LAG-3蛋白的胞外结构域免疫小鼠，发现免疫小鼠的血清效价可达1:256000，而后通过构建杂交瘤细胞株筛选出与人LAG-3具有高度亲和力的杂交瘤细胞亚克隆，表达获得了本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体。本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体具有与BMS986016相当的抗原亲和力，具有良好的阻断LAG3与MHCII分子结合的生物学功能，同时，本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体能够与BMS986016竞争抗原表位，不仅能够抑制BMS986016与抗原结合，还能促使已与抗原结合的BMS986016发生部分分离；这表明本专利技术的与人LAG-3蛋白结合的抗体和BMS986016与抗原结合的位点不同，本专利技术的与人LAG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与人LAG-3蛋白结合的抗体，包括轻链可变区和重链可变区中的至少一个氨基酸片段，其特征在于，所述的轻链可变区具有含有如①、②或③组所示氨基酸序列的轻链CDR区：/n①：与SEQ ID No.1具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.2具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.3具有至少50％同源性的氨基酸序列；/n②：与SEQ ID No.7具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.8具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.9具有至少50％同源性的氨基酸序列；/n③：与SEQ ID No.13具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.14具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.15具有至少50％同源性的氨基酸序列；/n所述的重链可变区具有含有如④或⑤组所示氨基酸序列的重链CDR区：/n④：与SEQ ID No.4具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.5具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.6具有至少50％同源性的氨基酸序列；/n⑤：与SEQ ID No.10具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQ ID No.11具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQ ID No.12具有至少50％同源性的氨基酸序列。/n...

【技术特征摘要】
1.一种与人LAG-3蛋白结合的抗体，包括轻链可变区和重链可变区中的至少一个氨基酸片段，其特征在于，所述的轻链可变区具有含有如①、②或③组所示氨基酸序列的轻链CDR区：
①：与SEQIDNo.1具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.2具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.3具有至少50％同源性的氨基酸序列；
②：与SEQIDNo.7具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.8具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.9具有至少50％同源性的氨基酸序列；
③：与SEQIDNo.13具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.14具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.15具有至少50％同源性的氨基酸序列；
所述的重链可变区具有含有如④或⑤组所示氨基酸序列的重链CDR区：
④：与SEQIDNo.4具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.5具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.6具有至少50％同源性的氨基酸序列；
⑤：与SEQIDNo.10具有至少50％同源性的氨基酸序列、与SEQIDNo.11具有至少50％同源性的氨基酸序列以及与SEQIDNo.12具有至少50％同源性的氨基酸序列。


2.如权利要求1所述的与人LAG-3蛋白结合的抗体，其特征在于，所述的轻链可变区具有如SEQIDNo.13、14和15所示氨基酸序列的轻链CDR区，所述的重链可变区具有如SEQIDNo.4、5和6所示氨基酸序列的重链CDR区。


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【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，张蔓，崔文俊，郜鹏，高位相，郭树华，
申请(专利权)人：瑞阳苏州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32